日立7600生化检测系统检测天门冬氨酸氨基转移酶临床可报告范围的研究

胡军红，谢建红，陆玲，谢素玉

(清远市省佛冈县人民医院，广东 清远511600)

天门冬氨酸氨基转移酶(AST)是一种临床常见的酶类测定项目，在临床生化检验工作中我们经常会遇到超出可测量范围的酶类项目需要稀释后才能测定出来。如何才能保证稀释后测定的结果准确可靠就需要我们对每个酶类检测项目的临床可报告范围进行验证。本文就日立7600生化分析仪检测AST的临床可报告范围进行了一系列研究，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1 .1 仪器与试剂 (1)仪器：日立7600全自动生化分析仪。(2)试剂：宁波美康AST检测试剂,校准品为罗氏CFAS,质控品为伯乐公司提供。试剂批号：20130821；校准品批号：20130206；质控品批号：27601,27602。

1.1 .2样本的制备 收集本院患者AST低浓度和高浓度的新鲜血清标本若干份,要求血清清亮，无溶血、无黄疸、无脂血。

1.2 方法

1.2 .1仪器维护及校准 按照说明书进行对仪器进行维护保养，设置好试剂参数，用罗氏公司CFAS多项校准品进行校准，室内质控在控后再检测样品。

1.2 .2样品检测 (1)最大稀释度实验样品检测：选取2个浓度稍微高于AST检测范围高限1000U/L的标本，用0.9g/dl生理盐水对这2个样本分别进行 2、4、8、32、64、128 倍稀释。两样本分别测定 3次，取均值，计算稀释回收率，稀释回收率=(实测值均值／理论浓度值)×100%，以重复性CV值小于5%、回收率在90%～110%以内为可接受，确定最大稀释倍数。(2)功能灵敏度实验样品检测 ：选取低浓度AST的样本，用0.9g/dl生理盐水对该样本进行不同倍数稀释，使最大稀释倍数浓度接近于0。在7600仪器上对不同倍数稀释样本连续测定20次，计算平均数、标准差及变异系数。查看各样本的变异系数(CV%)，样本的变异系数最接近20%所对应的浓度即为功能灵敏度。(3)分析测量范围样品检测：参考EP6-A文件，设定实验重复性和线性允许误差分别为5%和10%。收集低AST浓度和高AST浓度的新鲜患者血清标本若干份，将浓度稍微超出厂家声明的分析测量范围上线1000U/L的高AST浓度样本作为分析测量范围试验中的高值样本(H),将低AST浓度标本稀释为浓度接近功能灵敏度后作为分析测量范围试验中的低值样本(L)。将样本H与样本L按照 L，0.8L+0.2H，0.6L+0.4H，0.4L+0.6H，0.2L+0.8H，H的比例配制成6个系列活性浓度样品，充分混匀，各样品重复检测2次。记录检测结果。应用SPSSl9.0统计软件进行重复性误差和多项式回归分析。将所得数据拟合为一次多项式模型Y=b0+b1X、二次多项式模型Y=b0+b1X+b2X2和三次多项式模型Y=b0+blX+b2X2+b3X3多项式。用t检验判断拟合二次回归多项式模型的非线性系数b2及三次回归多项式模型的非线性系数b2和b3与0的差异是否具有统计学意义。如有则判断为非线性，否则为线性。

1.2 .3临床可报告范围的建立 将功能灵敏度作为临床可报告范围的下限，将分析测量范围的上限乘最大稀释倍数作为临床可报告范围的上限。

2 结果

2.1 AST稀释回收率实验结果 浓度值为1 165U／L(标本 1)，l 607 U ／L(标本 2)的两标本稀释后测定结果重复性CV%，稀释倍数在1:128内时，均在5%以内，当稀释倍数延伸至1:128时，浓度值为1009U/L的标本回收率超出90%～110%的实验设定范围，所以其最大稀释倍数为64倍。检测数据见表1。

表1 AST稀释回收率结果(%)

2.2 功能灵敏度实验结果 从表中数据可以看出样本号3的CV值最接近20%，故本实验室7600生化检测系统检测AST的功能灵敏度可确认为2.9U／L。 见表 2。

表2 AST功能灵敏度试验结果

2.3 分析测量范围实验结果 应用CLSI的EP6-A文件对AST的分析测量范围进行验证，6个系列浓度样本AST的重复测定，每个浓度2次测量结果的重复测量误差远远小于设定的允许不精密度5%，重复测定误差符合实验要求。测定数据进行多项式回归分析，结果见表3。从表3可知二次多项式与三次多项式虽有较小的回归标准误，但在α=0.05水平时无有统计意义的显著性系数(P>0.05,表次t=1.91,小于查表的2.262，三次t=1.64及t=-1.33小于查表的2.306)，所以AST为一次线性，线性方程为Y=209.21X-209.67。本次实验证实AST检测方法在3~1057.5U/L范围成直线线性，由于低浓度AST不具有重要的临床意义，本范围涵盖了厂家提供的0~1000U/L的线性范围。

2.4 临床可报告范围实验结果 根据稀释回收率结果实验结果确定AST的最大稀释度为1：64，功能灵敏度为2.9U/L，分析测量范围为3~1057.5U/L，所以本实验室日立7600测定AST的临床可报告范围为2.9~67680U/L。

表3 AST多项式回归分析结果

3 讨论

ISO 15189医学实验室质量和能力认可准则、CAP认证标准以及CLIA’88都对医学实验室在引进或改变检测系统时需要进行性能评价作出了规定[1],要求各实验室定期对包括精密度、准确度、分析测量范围、临床可报告范围及参考区间在内的检测系统性能进行评价[2]。

临床可报告范围 (clinical reportable range,CRR)是指对临床、诊断有意义的待测物浓度范围。此范围如果超出了AMR(分析测量范围)，可将样本通过稀释、浓缩等预处理使待测物浓度处于分析测量范围内，最后乘以稀释或浓缩的倍数。AMR是指患者标本不经稀释或浓缩等任何处理由检验方法或检测系统得到可靠测量结果的范围[3],AMR评价的方法主要有目测法,平均斜率法和CLSI评价方案[4],在本次AST的AMR验证实验中我们采用了CLSI的EP6-A[5]多项式回归分析方法,从统计学理论得出各浓度点的最适多项式为一次多项式，AST在3~1057.5U/L范围内成一次线性，由于低浓度AST没有重要的临床意义，我们可以认为AST浓度在0~1057.5U/L范围内成一次线性，这就涵盖了厂家提供的0~1000的线性范围。

在本次验证AST的临床可报告范围实验中由于在功能灵敏度实验和分析测量范围实验都需对标本进行稀释处理，所以在实验设计时，我们先做了稀释回收率实验然后再做其他实验，保证标本的稀释倍数在最大稀释度范围内，以确保标本稀释后测定结果的准确性[6，7]。通过最大稀释度实验，功能灵敏度实验及分析测量范围实验结果我们确定了日立7600生化分析仪测定AST的最大稀释度为1：64，临床可报告范围为2.9~67680U/L。

在我们的日常临床检验工作中我们经常会碰到高浓度的标本需要我们稀释后才能准确测定，但高浓度标本经稀释后由于基质效应或其他原因可能会对测定结果的准确性造成影响，如何处理高浓度的标本才能得到准确的结果，如何保证稀释程序的规范，这就要求我们对每个检验项目的临床可报告范围进行验证。

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