全自动毛细管电泳仪在HbE病检测中的应用评价

黄劲柏，吴志群，苏明珍，李北坤

(英德市妇幼保健院检验科，广东 英德513000)

地中海贫血的发生是由于编码珠蛋白肽链的基因发生缺失或突变，导致一种或者多种珠蛋白肽缺乏或者合成不足而引起的遗传性溶血性贫血病，血红蛋白E病属于β地中海贫血中的一种血红蛋白疾病[1]，其发生原因主要是由于β珠蛋白肽第26位的密码子发生了突变，对mRNA前体的加工效率造成影响，进而导致β珠蛋白肽的合成降低，是比较常见的一种异常血红蛋白疾病，主要发生在东南亚和我国的南方地区。高效液相色谱仪以及毛细管电泳检测都是目前临床上常用的检测血红蛋白E病的方法，高效液相色谱仪虽然应用广泛，也具有一定的筛查价值，但是在分析血红蛋白E病方面仍然存在着一定的不足之处，例如不能实现血红蛋白E病的定量，而全自动毛细管电泳仪和前者相比有很多的优越性，是比较可靠的筛查方式[2]。近年来，我院对接受检测的孕妇及其配偶7311例样本的临床资料进行回顾性分析和总结，旨在研究全自动毛细管电泳仪在HbE病检测中的应用价值，现将其报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年10月至2014年10月期间在我院接受检测的孕妇及其配偶7311例的样本为研究对象，根据其临床资料进行回顾性分析和研究。受检者年龄为23~48岁，平均年龄为(32.5±3.2)岁，其中男性为 2456 例，占 33.6%，女性为4855例，占66.4%。

1.2 仪器与试剂 法国Sebia公司的Capillary2 FlexPricing全自动毛细管电泳仪及其原厂配套试剂。厦门致善生物公司生产的磁珠法基因组DNA提取试剂盒和Lab-Aid820自动化仪器。深圳亚能生物有限公司生产的地贫基因检测试剂盒。

1.3 方法

1.3 .1样本采集 使用ACD抗凝管，抽取受检者静脉血3ml。将抽取的血液标本颠倒混匀10次后，先进行血红蛋白电泳分析；再用ACD抗凝管抽取受检者静脉血3m l，颠倒混匀10次后，进行地贫基因的分析。

1.3 .2 全自动毛细管电泳血红蛋白分析 使用Capillary2 FlexPricing全自动毛细管电泳仪对样本进行Hb电泳分析。在进行检查之前，首先用厂家配套的质控定位品进行定位，目的在于保证仪器的良好使用，然后将编好号的样品放入检测架导入仪器中按照说明书进行操作，结果曲线中Z4区域出现异常Hb区带则为疑似HbE病的标本[3]。

1.3 .3地贫基因分析 使用地贫基因检测试剂盒对全自动毛细管电泳仪筛选出的疑似HbE病的标本进行地贫基因的检测，首先使用厦门致善生物公司生产的磁珠法基因组DNA提取试剂盒和Lab-Aid820自动化仪器提取受检者的DNA，然后进行PCR扩增，再进行分子杂交后读取结果。观察全自动毛细管电泳仪检测结果是否与之相符。

1.4 统计学处理 所有检测数据均采用SPSS 17.0分析软件进行统计学分析，计量资料采用均数±标准差±s)，组间比较采用 t检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 全自动毛细管电泳血红蛋白分析结果 接受检测的7311例样本中共检测出HbE带25例，其检出率为0.34%。HbE带定量最小值为14.2%，最大值为84.6%，其平均值为(29.68±14.56)%。

2.2 地贫基因分析结果 使用全自动毛细管电泳仪检出的25例HbE带样本经地贫基因分析证实全部为HbE，其中包括了HbE复合α地贫(HbE/α地贫)5例，HbE复合β地贫 (HbE/β地贫)3例，另外还有HbE杂合子15例以及HbE纯合子2例，详见表1。

表1 HbE病毛细管电泳仪检测血红蛋白的结果分布

3 讨论

血红蛋白病在临床上分为异常血红蛋白和地中海贫血，地中海贫血依据病变发生的珠蛋白链的不同又分为α-地中海贫血和β-地中海贫血。第一例HbE病首先在泰国被发现[4]，在我国HbE病主要分布在广东、广西等地区，是危害人体健康的一种遗传性疾病，因此对于血红蛋白病的筛查就显得十分重要，关系着人类的身体健康和临床治疗，同时也关系着下一代的健康[5]。目前临床上对于血红蛋白病的检测方式有很多，其中以血常规分析最为常见，这种检测方式虽然在一定程度上可以判断检测者是否有血红蛋白病，但是不能判断患者是否为α-地中海贫血还是β-地中海贫血，或是其他异常血红蛋白疾病，所以，血细胞分析检测的方式存在一定的不足，容易发生漏诊[6]。

目前临床上比较常用的筛查血红蛋白E病的方法有全自动毛细管电泳仪、醋酸纤维素电泳法以及高效液相色谱法等其他筛查方法。其中毛细管电泳仪作为全自动、快速、高效、准确的血红蛋白分离、定量系统，在临床中用于筛查血红蛋白E病受到广泛的欢迎。有学者[7]通过将全自动毛细管电泳仪、醋酸纤维素电泳法筛查血红蛋白E病的结果进行分析，发现全自动毛细管电泳仪检测结果比醋酸纤维素电泳法的检测结果更加可靠，更适合用于临床上筛查血红蛋白病。在地中海贫血的高发地区，有学者通过对全自动毛细管电泳仪筛查血红蛋白病的结果进行研究，认为全自动毛细管电泳法筛查地贫的相关性要优于高效液相色谱和低压液相色谱法，全自动毛细管电泳仪能够准确的测定地中海贫血和异常血红蛋白，这是上述两者所不能完成的，而且除此之外，全自动毛细管电泳仪还能分离，定量Hb A2、Hb E、Hb F、Hb H、Hb Bart's，这些都为临床上诊断地中海贫血和异常血红蛋白提供了重要的依据。全自动毛细管电泳仪检测血红蛋白病的原理主要是[8]利用充满电泳液的石英毛细管进行的，溶血剂中进行稀释的红细胞样品在高压电的作用下将其分离，最后利用光波检测装置检测，全自动毛细管电泳仪对血红蛋白成分分析的灵敏度和分辨率十分高，和其他的一些检测方法相比具有很大的优越性。本次研究结果显示，全自动毛细管电泳仪检测血红蛋白病可以区分HbE杂合子，其值为 (25.41±0.94)%，和 HbE纯合子，其值为(83.42±1.45)%，还可以区分HbE/α-地中海贫血，其值为 (18.32±2.94)%，和HbE/β-地中海贫血，其值为 (52.78±9.45)%，在接受检测的7311例样本中共检测出HbE带样本25例，其检出率为0.34%，检出的样本经过地贫基因分析验证，其结果完全相符，说明通过全自动毛细管电泳仪就能检测出患者是否为HbE病，其检查速度快，是临床上检测血红蛋白病的理想方式。

综上所述，全自动毛细管电泳仪在HbE病检测中发挥着重要的作用，不仅可以分析出HbE带，还可以区分出HbE病是杂合子或是纯合子，是筛查血红蛋白HbE病的理想方式，值得应用和推广。

[1]徐咏梅,段国庆,龚翠芹,等.醋酸纤维素电泳和毛细管电泳在HbE病筛查中的价值比较[J].国际检验医学杂志,2014,12(9):1166-1167.

[2]阮丽明,周艳洁,丁进龙,等.全自动毛细管电泳仪在血红蛋白分析中的应用[J].海南医学,2012,23(1):15-17.

[3]阮丽明,周艳洁,朱茂灵,等.全自动毛细管电泳法定量测定血红蛋白A2快速筛查β珠蛋白生成障碍性贫血的应用评价[J].国际检验医学杂志,2012,33(19):2313-2314,3216.

[4]索明环,温冬梅,张秀明,等.全自动毛细管电泳检测11519例血红蛋白的结果分析[J].检验医学与临床,2013,10(8):913-914.

[5]朱红艳,欧阳红梅,宋建新,等.全自动毛细管电泳仪对2079例孕妇地中海贫血的筛查[J].中国妇幼保健,2012,27(30):4833-4834.

[6]刘基铎,肖明锋,袁晴,等.高压毛细电泳技术检测β-地中海贫血的结果分析[J].国际检验医学杂志,2013,34(4):427-429.

[7]卢业成,郑师陵,肖艳华,等.全自动多通道毛细管区带电泳技术在血红蛋白分析中的临床应用[J].国际检验医学杂志,2012,30(7):675-676,679.

[8]游雪云,刘艳秋,吴敏.毛细管电泳在β地中海贫血中的应用研究[J].实验与检验医学,2014,32(5):517-519.

[9]李东明,玉晋武,韦媛,等.高效液相色谱分析在HbE筛查中的应用价值[J].检验医学与临床,2013,12(14):1808-1809,1811.

[10]吴教仁,林炳忠,陈钊,等.血红蛋白E及血红蛋白E复合β地中海贫血的临床分析[J].临床血液学杂志,2004,17(4):204-206.

[11]陈星,初德强,梁开艳,等.全自动毛细管电泳技术在筛查地中海贫血中的临床诊断价值[J].中国实验诊断学,2014,18(4):635-638.

[12]赵应斌,黎华莲,刘钢毅,等.全自动蛋白电泳系统在妊娠妇女产前Hb病检查中应用[J].实用医技杂志,2007,14(7):869-870.

[13]Francois F,Zhang K,Varenne A,et al.New integrated measurement protocol using capillary electrophoresis instrumentation for the determination of viscosity,conductivity and absorbance of ionic liquid-molecular solvent mixtures[J].Anal Chim Acta,2006,562:164-170.

[14]Van Delft P,Lenters E,Bakker-Verweij M,et al.Evaluating five dedicated automatic devices for haemoglobinopathy diagnostics in multi-ethnic populations.[J].Pediatr Int,2009,31(5):484-495.

[15]Wang WJ,Wu ZK,Zhang XH,et al.Observations on after-effect duration of kidney-nourishing and marrow-replenishing therapy on 58 cases of Mediterranean anemia[J].JTradit Chin Med,2009,29(4):258-262.