HPLC-ELSD测定不同主产地黄芪饮片中黄芪甲苷的含量*

黄 锐，蒲清荣，赵 剑，明俊男，罗 群，李 静

(四川医科大学附属中医医院，四川 泸州 646000)

HPLC-ELSD测定不同主产地黄芪饮片中黄芪甲苷的含量*

黄 锐，蒲清荣△，赵 剑，明俊男，罗 群，李 静

(四川医科大学附属中医医院，四川 泸州 646000)

目的 测定不同批次，不同产地的黄芪饮片中黄芪甲苷的含量。方法 收集8个批次，4个主产地(甘肃、山西、内蒙古、四川)的黄芪饮片；采用HPLC-ELSD法测定黄芪甲苷含量。结果 黄芪甲苷在0.03696～0.924 mg·mL-1时，进样量的对数与峰面积的对数呈良好的线性关系，平均回收率为98.63%，RSD为1.76%。结论 所建立的方法可有效评价黄芪饮片的质量；测定结果表明，不同主产地黄芪饮片黄芪甲苷含量差异较大，临床应用时应注意区分。

黄芪饮片；黄芪甲苷；HPLC-ELSD

黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao.或膜荚黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。春、秋二季采挖，除去杂质，大小分开，洗净，润透，切厚片，干燥即得饮片[1]。黄芪是传统补益药，在《神农本草经》中列为上品，有补气升阳，固表止汗，利水消肿，托疮生肌等功效，用于气虚乏力，中气下陷，表虚自汗，久溃不敛等症。黄芪的主要成分为三萜皂苷和黄酮类[2]。为了探索黄芪饮片的质量，特采用HPLC-ELSD法测定黄芪中含量较大的黄芪甲苷，以建立黄芪饮片质量控制方法的建立提供科学、可靠的依据。

1 材料

日本岛津高效液相色谱仪(LC-20AT泵、ELSD检测器、CTO-10AS进样器、LcSolution色谱工作站)；AUW120D十万分之一电子天平(日本岛津)；JP全数字超声波发生器(武汉嘉鹏电子有限公司)；黄芪甲苷(中国食品药品检定研究院，批号为110781-200613)；甲醇、乙腈为色谱纯，水为哇哈哈纯净水，其他试剂均为分析纯；所购药材经泸州医学院药学院唐灿教授鉴定为蒙古黄芪[Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao.]。具体见表1。

表1 黄芪样品信息

2 黄芪甲苷含量测定[3-4]

2.1 色谱条件与系统适应性试验 Inertsil ODS-SP C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(32∶68)，柱温40 ℃，流速1 mL·min-1，进样量10 μL，蒸发光散射检测参数：漂移管温度45 ℃，press.350kpa。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。

2.2 对照品溶液的制备 取黄芪甲苷标准品9.24 mg，精密称定，置10 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 黄芪饮片适量，60 ℃干燥1 h，粉碎成细粉，取约4 g，精密称定，置索式提取器中，加甲醇40 mL，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4 h，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10 mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4 次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2 次，每次40 mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5 mL使溶解，放冷，通过D101 型大孔吸附树脂柱(内径1.5 cm，长12 cm)，以水50 mL洗脱，弃取水液，再用40 % 乙醇30 mL洗脱，弃取洗脱液，继用70 %乙醇80 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.4 线性关系考察 取“2.1.2”项下对照品溶液0.4，0.8，1.0，2.0，4.0 mL分别于10 mL棕色容量瓶中，加甲醇定容，取10 μL注入液相色谱仪，按照“2.1.1”项下色谱条件进行试验。以峰面积的对数Y为纵坐标，对照品的进样浓度的对数X(mg·mL-1)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=1.5167X+14.752，r2=0.999 5，结果表明黄芪甲苷在0.03696～0.924 mg·mL-1时，进样量的对数与峰面积的对数呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 取“2.1.2”项下对照品溶液10 μL，按照“2.1.1”项下色谱条件，连续进样6次，测得黄芪甲苷峰面积RSD为0.65 %。表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 取表1中HQ1号样品按“2.1.3”项下制备的供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12 h 进样10 μL注入液相色谱仪，测定黄芪甲苷峰面积，结果RSD 为1.56 %，表明供试品溶液在12 h 内基本稳定。

2.7 重现性试验 取表1中HQ1号样品6份，按照“2.1.3”项下制备供试品溶液，进行测定，计算黄芪甲苷的质量分数，结果表明黄芪甲苷平均质量分数为0.4036 mg·g-1，RSD 为2.16 %。

2.8 回收率试验 取表1中HQ1号样品6份，按照“2.1.3”项下制备供试品溶液，取供试品溶液1 mL，置10 mL棕色容量瓶中，加入“2.1.2”项下黄芪甲苷对照品溶液4 mL，加甲醇定容至刻度，摇匀。按“2.1.1”项下色谱条件测定峰面积，计算平均加样回收率，结果黄芪甲苷98.63 %(RSD 1.76 %)，说明该方法确实可行。

2.9 样品测定 取8批黄芪饮片，每批2份，按照“2.1.3”项下制备供试品溶液。分别精密吸取黄芪甲苷对照品溶液10 μL，供试品溶液10 μL，按照“2.1.1”项下色谱条件进行测定。对照品，样品-HQ1及样品-HQ7色谱图见图1。结果见表2。

表2 不同产地黄芪中黄芪甲苷的含量

t/min

A.对照品；B.样品-HQ1；C.样品-HQ7；1.黄芪甲苷

图1 黄芪甲苷高效液相色谱图

3 讨论

黄芪用药历史悠久，为常用中药之一，植物黄芪产于甘肃、山西、内蒙古、四川等地，为国家三级保护植物。主要是制成饮片，调剂于中药方剂中，因此研究黄芪饮片的质量问题具有重要的意义。研究表明：黄芪中含有多种活性成分，包括黄芪皂苷、黄芪黄酮类成分等。黄芪皂苷中活性研究较系统的为黄芪甲苷，其在黄芪中含量最高，对缺血造成的心、脑损伤具有保护性作用，同时具有抗病毒、降血糖、免疫调节等活性[5]。因而综合考虑，选取黄芪中所含黄芪甲苷，作为质量评价研究的指标。

2010年版中国药典规定了黄芪饮片含量测定的有效成分是黄芪甲苷不少于0.040 %，换算成质量分数即不少于0.40 mg·g-1。从表2结果可以得出6批次黄芪饮片中黄芪甲苷含量均达到药典标准；HQ7、HQ8即来源于四川理塘县所产黄芪饮片无黄芪甲苷峰面积，在8.406 min时比其它样品多一个峰，说明产自四川的黄芪含有其他成分，临床应用时应注意。

[1]卫生部.中国药典[S].一部.北京：化工出版社，2010.

[2]陈国辉，黄文凤.黄芪的化学成分及药理作用研究进展[J].中国新药杂志，2008，17(17)：1482-1485.

[3]徐忠坤，徐海娟，宋娟，等.HPLC法测定芪葛颗粒中黄芪甲苷[J].中草药，2011，42(1)：94-95.

[4]裴彩云，王宗权，贾继明，等.HPLC-ELSD内标法测定8个产地黄芪药材、饮片中黄芪甲苷的含量[J].中国中药杂志，2011，36(14)：1982-1984.

[5]张蔷，高文远，满淑丽.黄芪中有效成分药理活性的研究进展[J].中国中药杂志，2012，37(21)：3203-3207.

四川省科技厅项目(NO：2013SZ0143)

黄锐(1986-)，男，中药师，硕士，研究方向为中药新制剂研究，E-mail：365369747@qq.com

△通信作者：蒲清荣，Tel：0830-3162253，E-mail：365369747@qq.com

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1007-2349(2015)10-0071-03

2015-07-13)