多指标评分法优选复方茵陈合剂中大黄提取工艺

刘建清，王庆芬，曹毅祥，张 荣

(中国人民解放军第一七五医院、厦门大学附属东南医院制剂科，福建漳州 363000)

复方茵陈合剂由茵陈、栀子、大黄三味药组成，为我院非标准制剂，临床上主要用于急性黄疸性肝炎的治疗，在我院应用二十余年，其降低转氨酶、消除黄疸的疗效显著［1－4]。过去尚未对该制剂，煎煮工艺进行考察优化，前期试验发现茵陈、栀子成分稳定，受煎煮过程影响小，而大黄易受煎煮时间、浸泡时间等因素影响，因此有必要对大黄提取进行优化，建立稳定可靠的工艺。本实验以水为溶剂，大黄中5个游离蒽醌化合物(包括芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚、大黄酚)的提取量为指标［5]，以高效液相色谱法对其含量进行测定，采用正交实验设计优化大黄提取工艺。

1 仪器与试剂

1200型高效液相色谱仪(美国 Agilent);AUX220型电子分析天平(日本岛津公司);芦荟大黄素(110736－200716)、大黄酸(批号:0757－200206)、大黄素(批号:110756－200110)、大黄酚(批号:110796－200615)、大黄素甲醚(批号:0759－200311)(以上均购至中国药品生物制品检定所);乙腈为色谱纯;水为纯净水;其他试剂为分析纯;复方茵陈合剂(自制)。

2 方法与结果

2．1 正交实验

2．1．1 复方茵陈合剂煎煮工艺 称取茵陈187．5 g、栀子 93．8 g、大黄 62．5 g，其中茵陈、栀子合并加水煎煮2次，每次分别为 1．5 h、1 h，以四层脱脂效［6－8]，另煎。茵陈、栀子浓缩后与大黄煎煮液合并，加水至1 000 mL，流通蒸汽100℃灭菌30 min即得。

2．1．2 正交试验设计 通过前期预实验，拟以浸泡时间、煎煮时间、煎煮次数为考察因素，每个因素设立3个水平(见表1)，采用L9(34)正交设计表，试验安排见表1。

表1 实验因素与水平表

2．2 大黄蒽醌类化合物的含量测定

2．2．1 色谱条件 色谱柱:伊特利 Kromasile C18(4．6 mm ×250 mm，5 μm);流动相:乙腈(A)—0．1%磷酸溶液(B);洗脱梯度:0～15 min 10%A，15～20 min 25%A，20 ～30 min 40%A，30 ～40 min 60%A，40～60 min 80%A，60～70 min 80%→10%A［9];流速:1 mL·min－1;检测波长:254 nm;柱温:30℃。

2．2．2 对照品溶液的制备 精密称取芦荟大黄素9．9 mg、大黄酸 10．2 mg、大黄素 10．0 mg、大黄酚10．2 mg、大黄素甲醚 10．5 mg，分别溶于 50 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。

精密吸取上述贮备液中芦荟大黄素、大黄素、大黄酚各0．5 mL，大黄酸1 mL，大黄素甲醚0．2 mL 置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，混匀即得混合对照品溶液。

供试品溶液测定:取煎煮液35 mL，加乙醇使含醇量为 60%，4 000 r·min－1离心10 min，上清液移至200 mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，选用孔径为0．45 μm的微孔滤膜滤过进样分析。色谱图见图1。

2．2．3 线性关系考察 分别精密吸取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚各3、5、8、10、15、20μL进样，测定其峰面积(Y)对进样量(X)进行回归处理，得出5种成分的回归方程及线性范围。见表2。

2．3 正交实验结果及方差分析 正交试验结果见表3(测得的量为35 mL煎煮液中各蒽醌类化合物含量)，方差分析见表4，5。

图1 HPLC图

表2 回归方程与线性范围

表3 蒽醌类化合物的正交表设计

表4 蒽醌类化合物方差分析表

表5 各指标优选出的大黄提取工艺

由表4与表5方差分析结果可得出:大黄煎煮过程中，有无浸泡对大黄各成分，尤其对芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的提取有显著性的影响;对大黄素的提取有一定的影响;而煎煮时间及煎煮次数对大黄各蒽醌化合物提取影响较小。综合各指标优选出的提取工艺，选择提取条件为A2B2C3，即浸泡6 h，煎煮3次，每次煎煮时间15 min。

2．4 验证实验 分别称取处方量药材3份，按最佳工艺条件平行操作，提取，处理，进样分析。计算出芦荟大黄素平均含量为0．61 mg，RSD为3．4%;大黄酸平均含量为2．42 mg，RSD为4．1%;大黄素平均含量为0．95 mg，RSD 为3．3%;大黄酚平均含量为8．45 mg，RSD 为 4．6%;大黄素甲醚平均含量为0．48 mg，RSD为3．9%。实验结果表明该提取工艺稳定可靠。

3 讨论

大黄具有泻下攻积、清热泻火等作用，主要含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等成分，故本文进行正交试验时，以5个成分提取量为考察指标，优化工艺，提高制剂中有效成分含量。

大黄中5个游离蒽醌化合物极性小，目前文献报道［10－12]大多采用甲醇、乙醇等有机溶剂进行提取，但大黄以水煎煮服用仍应用广泛。因而本试验探讨优化大黄水提工艺，为大黄煎煮提供参考。

本试验中浸泡时间对大黄蒽醌化合物的提取有较显著的影响，考虑可能大黄酚等蒽醌化合物浸出缓慢，较长时间浸泡有助于药物的渗透扩散［13－14]，同时也可以缩短煎煮时间，防止长时间煎煮对各蒽醌化合物的破坏。

与传统工艺相比，优化后的工艺对大黄酸的提取基本无改变，甚至略有降低;但大黄酚、大黄素甲醚等提取量均有了较显著的提高，即大黄总蒽醌化合物的提取量有了较大的提高。因此该工艺适合大黄的水提生产。

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