贵州省汉族人群类风湿关节炎患者TRAF1/C5基因多态性研究＊

梁爱凤，费 樱

（1.复旦大学附属中山医院青浦分院检验科，上海 201700；2.贵阳医学院附属医院微生物免疫科，贵州 贵阳 550004）

贵州省汉族人群类风湿关节炎患者TRAF1/C5基因多态性研究＊

梁爱凤1，费 樱2△

（1.复旦大学附属中山医院青浦分院检验科，上海 201700；2.贵阳医学院附属医院微生物免疫科，贵州 贵阳 550004）

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子1（TRAF1）/补体5（C5）单核苷酸多态性与类风湿关节炎（RA）的相关性。方法提取300例RA患者（RA组）和300例健康者DNA（对照组），实时荧光定量PCR方法检测TRAF1/C5基因rs3761847和rs10818488的单核苷酸多态性。结果TRAF1/C5存在基因多态性，但RA组与对照组比较基因多态性位点的单倍体基因型和等位基因频率的差异均无统计学意义（P＞0.05）。连锁不平衡分析发现rs3761847与rs10818488之间存在强连锁不平衡。rs3761847位点A等位基因与类风湿因子（RF）阴性（P＝0.001，OR＝0.57，95%CI：0.41～0.79），抗CCP抗体（抗－CCP）阴性（P＝0.001，OR＝0.51，95%CI：0.35～0.76）及抗Sa抗体阴性均相关（P＝0.02，OR＝0.72，95%CI：0.55～0.94）；rs10818488位点G等位基因仅与RF阳性相关（P＝0.01，OR＝1.40，95%CI：1.09～1.81）。结论TRAF1/C5基因多态性可能与贵州汉族人群RA的遗传易感性无关。

肿瘤坏死因子受体相关因子； 补体； 单核苷酸多态性； 类风湿关节炎

类风湿关节炎（RA）是一种系统性自身免疫性疾病，其病因尚不明确，遗传、环境和免疫因素共同发挥作用。RA作为一种多基因遗传疾病，目前已知的RA易感基因主要有肿瘤坏死因子（TNF）、人类白细胞抗原（HLA）－DR、白细胞介素（IL）及肽酰基精氨酸脱亚胺酶－4（PADI4）等。已有报道表明位于9号染色体短臂33－34位点的肿瘤坏死因子受体相关因子（TRAF1）/补体5（C5）基因是RA的易感基因，且与抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体阳性相关［1］，而后者是RA早期诊断、病情评估和疗效检测的有效指标之一。RA的遗传异质性使得不同人种之间的遗传学研究结果常不一致。本研究首次以贵州汉族人群为研究对象，通过实时荧光定量PCR（Real－time PCR）方法检测TRAF1/C5基因多态性，并探讨该基因与RA患者相关血清学指标之间的关系，旨在探讨该基因与贵州汉族人群RA患者遗传易感性之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2011年10月至2013年1月贵阳医学院附属医院肾内科门诊及病房的300例RA患者全血，均为汉族，其中男性72例、女性228例，平均年龄（50.3±14.6）岁，所有RA病例均符合美国风湿病学会（ACR）和欧洲抗风湿联盟（RULAR）2010年联合推出的类风湿性关节炎诊断标准［2］；按照民族、年龄和性别匹配的原则选取健康体检者300例作为对照组，其中男性66例，女性234例，平均年龄（50.5±14.1）岁，均排除其他自身免疫性疾病及肿瘤等。所有纳入对象均为无血缘关系的个体。

1.2 方法

1.2.1 基因组DNA的提取 酚－氯仿法提取受检者外周血DNA，检测纯度和浓度后－20℃保存。

1.2.2 Real－time PCR SNP分型 采用Taqman－MGB探针对TRAF1/C5基因rs3761847和rs10818488位点进行基因分型，所用Real－time PCR探针购自ABI公司。在罗氏LightCycler®480Real－time PCR仪上进行反应。

1.2.3 血清学指标检测 检测RA组类风湿因子（RF）、抗CCP抗体（抗－CCP）和抗Sa抗体（抗－Sa）三项血清学指标，采用RF胶乳凝集法测定试剂盒（购自上海捷门生物技术合作公司）检测RF水平，抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体酶联免疫检测试剂盒（购自上海科新生物技术股份有限公司）检测抗－CCP水平，抗Sa抗体IgG酶联免疫吸附法检测试剂盒（购自欧蒙医学诊断技术有限公司）检测抗－Sa水平。

1.3 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件对结果进行分析。计算两组各个基因型及等位基因频率，并进行Hardy－Weinberg遗传平衡检验，各组基因型及等位基因频率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义，同时计算比值比（OR）和95%置信区间（95%CI）。用SHEsis在线分析软件对TRAF1/C5基因rs3761847和rs10818488两个位点进行连锁不平衡分析。

2 结 果

2.1 TRAF1/C5基因与RA相关性分析 在贵州汉族RA患者中，TRAF1/C5基因的两个单核苷酸多态性（SNPs）位点均符合Hardy－Weinberg平衡。与对照组比较，RA组两个SNPs位点基因型频率分布差异均无统计学意义（P＞0.05），见表1。

2.2 连锁不平衡和单倍体基因型分析 对rs3761847和rs10818488两个SNPs位点的基因型信息在对照组中进行连锁不平衡分析，发现这两个位点存在高度连锁不平衡（D′＝1.000，r2＝0.852），见附图1（见《国际检验医学杂志》网站主页“论文附件”）。理论上这两个位点共可组成4种单倍体基因型，笔者对其中频率大于0.03的3种单倍体基因型进行了进一步的分析比较：在对照组和RA组中3种单倍体基因型的分布无统计学差异（P＞0.05），见表2。

2.3 TRAF1/C5基因与RF、抗－CCP、抗－Sa水平的相关性分析 与对照组相比，rs3761847位点A等位基因与RF阴性（P＝0.001，OR＝0.57，95%CI：0.41～0.79），抗－CCP阴性（P＝0.001，OR＝0.51，95%CI：0.35～0.76）及抗－Sa阴性相关（P＝0.02，OR＝0.72，95%CI：0.55～0.94），rs10818488位点G等位基因仅与RF阳性组相关（P＝0.01，OR＝1.40，95% CI：1.09～1.81），见表3、4。

3 讨 论

TRAF1介导TNF受体1、2和CD40参与的信号转导途径，而TNF是RA发病机制中的重要细胞因子［3］。TRAF1还与T细胞的活化增殖有关［4］，TRAF1基因敲除的小鼠T细胞过度增殖或受到T细胞受体复合物刺激时过度增殖以应答TNF。TRAF1在这些信号转导途径中起到负调节作用以维持炎症反应的环境［5］，从而在RA中发挥作用。虽然TRAF1在多种受体介导的信号通路中起作用，但TRAF1的分子机制还没有完全阐明，其在RA中作用有待于进一步研究。补体途径也参与了RA的发病，C5裂解成促炎症反应的C5a和C5b，进而启动攻膜复合物的形成。RA患者关节滑液持续的炎症反应与高水平的C5a同时存在［6］。小鼠模型研究证实了C5基因是RA的候补基因，同时证明了C5缺陷的小鼠可抵抗炎性关节炎，表明了C5基因在炎症反应中的作用［7－8］。因此，C5在RA发病机制中可能通过上调RA患者关节腔内补体活化程度来起作用。

本研究发现TRAF1/C5的两个SNPs存在基因多态性，但RA组与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05），可能与贵州汉族人群RA易感性无关，这一结果与其他人种研究结果不尽相同［1，9－10］。这一情况说明了RA的遗传异质性，不同人种之间遗传学研究结果常不相同。经连锁不平衡分析发现TRAF1/C5两个SNPs位点在对照组人群中呈现高度连锁不平衡（D′＝1.000，r2＝0.852），与HapMap发布的数据基本一致（r2＝1），但构建的单倍体基因型则与RA发病不相关（P＞0.05）。由于国内外大量的病例－对照研究均局限于验证基因与RA患者的关联性，较少涉及这些多态性位点的单倍体基因型，因此单倍体基因型与RA的关系有待于不同种族、大样本量的研究证实。另外本研究还发现TRAF1/C5基因rs3761847位点A等位基因与RF阴性、抗－CCP阴性及抗－Sa阴性相关，这表明该位点可能增加自身抗体阴性RA者的易感性；rs10818488位点G等位基因仅与RF阳性相关，表明该位点可能在RF阳性者RA的发病中起重要作用，但是受到标本量的影响，这些结果还有待于进一步加大样本量进行分析，目前的研究结果也存在争议［1，9］。

本研究首次以贵州汉族人群为研究对象，结果显示TRAF1/C5SNPs基因型或多态性位点可能与贵州汉族人群RA的发病无关，可能是由于受到样本量较小，TRAF1/C5 SNPs单倍体基因型及等位基因与RA患者血清学指标之间的关系没有得到很好的证实。

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Association of the TRAF1/C5 gene polymorphism with rheumatoid arthritis in Han population of Guizhou Province＊

Liang Aifeng1，Fei Ying2△
（1.Department of Clinical Laboratory，Qingpu Branch of Zhongshan Hospital Affiliated to Fudan University，Shanghai 201700，China；2.Department of Clinical microbiology and Immunology，the Affiliated Hospital of Guiyang Medical College，Guiyang，Guizhou550004，China）

ObjectiveTo explore the association between the tumor necrosis factor receptor－associated factor 1（TRAF1）/complement component 5（C5）single nucleotide polymorphism and rheumatoid arthritis patients.MethodsTwo groups of people were included in the study：300rheumatoid arthritis（RA）patients（RA group）and 300healthy individuals（control group）.Real－time PCR was used to test the single nucleotide polymorphisms rs3761847and rs10818488of TRAF1/C5.ResultsThere was no significant difference（P＞0.05）of TRAF1/C5rs3761847and rs10818488polymorphism between the two groups.The linkage disequilibrium analysis results showed that there was strong linkage disequilibrium between rs3761847and rs10818488.For the RF，anti－CCP and anti－Sa negative RA patients，the difference in the frequency of A allele of rs3761847between the RA patients and matched controls was statistically significant（P＝0.001，OR＝0.57，95%CI：0.41－0.79；P＝0.001，OR＝0.51，95%CI：0.35－0.76；P＝0.02，OR＝0.72，95%CI：0.55－0.94）.Significant difference for the frequency of G allele of rs10818488between RF positive RA patients and control groups was observed（P＝0.01，OR＝1.40，95%CI：1.09－1.81）.ConclusionTRAF1/C5gene polymorphism may not associate with susceptibility of RA patients in Han population in Guizhou.

tumor necrosis factor receptor－associated factor； complement component； single nucleotide polymorphisms；rheumatoid arthritis

10.3969/j.issn.1673－4130.2015.03.010

A

1673－4130（2015）03－0310－03

2014－11－10）

贵阳市科技计划项目［（2010）筑科农合同第1－社－17号］。 作者简介：梁爱凤，女，检验技师，主要从事分子生物学检测方面的研究。△

，Email：645903661＠qq.com。