615例门诊就诊者HPV基因检测结果分析

林丽华，钟 娜，乔 凤，张丽芬

(海南省皮肤性病防治中心，海南 海口 570206)

615例门诊就诊者HPV基因检测结果分析

林丽华，钟 娜，乔 凤，张丽芬

(海南省皮肤性病防治中心，海南 海口 570206)

目的 了解海口地区人乳头瘤病毒(HPV)感染的情况，为HPV感染患者的治疗及监测提供科学依据。方法采用实时荧光定量PCR方法(FQ-PCR)对海口地区615例性病门诊就诊者泌尿系分泌物标本的HPV6，11型和HR-HPV(8个型)进行检测。结果615例样本中检出HPV阳性者302例，感染率为49.11% (302/615)，其中HPV6，11-DNA阳性130例，阳性率为21.14%(130/615)，HR-HPV-DNA阳性126例，阳性率为20.49%(126/615)，HPV6，11型合并HR-HPV阳性46例，占7.48%(46/615)。HPV6，11低危型与HR-HPV混合高危型比较差异无统计学意义(P>0.05)。302例HPV感染者中尖锐湿疣(CA)患者187例，占61.92%(187/302)，检出HPV6,11-DNA阳性126例，占67.38%(126/187)，HR-HPV-DNA阳性19例，占10.16%(19/187)，HPV6,11型和HR-HPV混合感染42例，占22.46%(42/187)。CA患者感染以HPV6，11低危型为主，HPV6，11/HR-HPV次之，少部分为高危混合型HR-HPV感染，各组比较差异有统计学意义(P＜0.01)。结论尖锐湿疣主要的基因型感染是低危型HPV6,11，高危型HPV感染多以混合感染形式存在。荧光定量PCR方法检测尖锐湿疣患者HPV基因型具有快速、准确的优点，是临床HPV感染分型检测的有效方法。

人乳头瘤病毒；FQ-PCR；感染率；尖锐湿疣

人乳头瘤病毒(HPV)是一种小分子双链DNA病毒，对人皮肤、黏膜有高度亲嗜性，根据其基因序列多态性，目前已经发现200余种亚型，约有40种涉及生殖道感染[1]。根据不同基因型与癌发生危险性的高低分为高危型和低危型，高危型HPV与宫颈癌和宫颈上皮内瘤变有关，包括16、18、31、33型等；低危型HPV与外生殖器尖锐湿疣等良性病变有关，包括6、11、42、43型等[2-3]。为了解海口地区HPV感染的情况，我们采用实时荧光定量-PCR法对615例性病门诊就诊者进行HPV6，11-DNA和HR-HPV-DNA检测，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 标本来源 选取我院2012年3月至2015年2月性病门诊就诊者615例，男性396例，女性219例。其中尖锐湿疣(CA)患者187例。

1.2 标本采集 男性尿道分泌物的采集用无菌棉拭子插入尿道2～3 cm轻轻转动后取出立即置于采集官中；女性按常规消毒采集宫颈脱落细胞，置无菌采集管立即送检。尖锐湿疣患者标本的采集用无菌棉拭子刮取包皮、尿道口、大小阴唇、阴道口和肛周赘生物组织液，密闭送检。

1.3 仪器与试剂 使用罗氏公司生产的LightCycler2.0基因扩增仪；HPV6,11型核酸检测试剂盒，HR-HPV(8个型)核酸检测试剂盒(包含16、18、31、33、45、52、56、58型)。试剂盒与质控品均为中山大学达安基因股份有限公司产品。

1.4 DNA提取及检测 将标本洗脱在1 ml灭菌生理盐水的1.5 ml离心管中，12 000次/min离心5 min，弃去上清液，于沉淀物中加入50µl DNA提取液充分混匀，100℃恒温水浴中处理10 min，12 000次/min离心5 min，吸取上清液2µl加入毛细反应管中进行PCR反应。扩增参数及结果判定严格按照试剂盒说明书进行。

1.5 统计学方法 采用SPSS15.0统计学软件进行数据分析，率的比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 615例性病门诊就诊者HPV-DNA检测结果 615例样本共检出HPV阳性302例，感染率为49.11%(302/615)，其中HPV6，11型阳性130例，阳性率为21.14%(130/615)，HR-HPV混合型阳性126例，阳性率为20.49%(126/615)，HPV6，11型合并HR-HPV阳性46例，占7.48%(46/615)。HPV6，11低危型与HR-HPV混合高危型感染率比较差异无统计学意义(χ2=0.08，P>0.05)。

2.2187 例CA患者HPV-DNA检测结果 302例HPV感染者中CA患者187例，占61.92%(187/302)，其中检出HPV6，11型阳性126例，占67.38%(126/187)，HR-HPV混合型阳性19例，占10.16%(19/187)，HPV6，11型和HR-HPV混合感染42例，占22.46% (42/187)。CA患者感染以HPV6，11低危型为主，HPV6，11/HR-HPV次之，少部分为高危混合型HR-HPV感染，各类型HPV-DNA检测结果比较差异有显著统计学意义(χ2=128.95，P＜0.01)。

3 讨 论

HPV是一种小分子双链DNA病毒，对人体的皮肤和黏膜具有高度亲和力[4]。按其致癌性可分为高危型和低危型两大类，流行病学调查研究发现，HPV感染型别与地区和人群差异有关，分析感染情况以及基因型分布可以有效判断患者预后，具有十分重要的临床价值[5]。本文通过对615例海口地区性病门诊就诊者的泌尿系分泌物样本，用荧光定量PCR技术进行HPV6， 11-DNA和HR-HPV(8个型)DNA检测，共检出HPV阳性302例，感染率为49.11%，其中HPV6，11-DNA阳性130例，阳性率为21.14%，HR-HPV-DNA阳性126例，阳性率为20.49%，明显高于王小伦等[6]报道的江西萍乡HPV感染率(29.6%)。这可能与检测的对象、采用的检测技术不同有关，临床上应给予重视。

CA是HPV引起的一种性传播疾病(STD)，以瘤样增生性皮损为主要临床表现。海口地区302例HPV感染者中有187例为CA患者，发病率高达67.36%，其中121例为男性，经调查发现男男同性恋者占30%，相关部门须引起重视，加强宣传教育，制订科学的干预措施，阻断HPV感染途径，降低CA发病率。

目前HPV检测方法有聚合酶链反应(PCR)、实时荧光PCR、PCR-反向定点杂交法、导流杂交法、流式荧光杂交法，我们采用了实时荧光定量-PCR方法，该法是一种较简单的分子生物学技术，具有特异性强、敏感度高、步骤简单、自动化程度高、操作快速、结果准确等优点[7]，为临床早期提供可靠的诊断依据，值得推广应用。

本文结果初步反映了性病门诊就诊者HPV感染的情况，为临床对HPV感染患者的治疗监测及预后判断等提供重要的科学依据。

[1]Culton DA,Morrell DS,Burkhar CN.The management of condyloma acuminate in the pediatric population[J].Pediatr Ann,2009,38 (7):368-372.

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[3]Lee CB,Choe HS,Hwang SJ,et al.Epidemiological characeristics of genital herpes and condyloma acuminate in patients presenting to urologic and gynecologic clinics in Korea[J].J Infect Chemother, 2011,17(3):351-357.

[4]Scherpenisse M,Mollers M,Schepp RM,et al.Detection of systemic and mucosal HPV-specific IgG antibodies in adolescent girls one and two years after HPV vaccination[J].Hum Vaccin Immunother, 2012,9(2):543-546.

[5]Giuliano AR,Lazcano Ponce E,Villa LL,et al.The human papillomavirus infection in men study:human papillomavirus prevalence and type distribution among men residing in Brazil,Mexico,and the United States[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prey,2008,17 (8):2036-2043.

[6]王小伦,谭亚林,许 琦.人乳头瘤病毒检测筛查早期宫颈癌的意义[J].中国医药指南,2013,11(33):191-192.

[7]赖迪辉,朱 威,连 石.单纯疱疹病毒实验室检测方法的研究进展[J].中国计划生育学杂志,2010,6(177):380-381.

Human papillomavirus gene analysis of 615 out-patients.

LIN Li-hua,ZHONG Na,QIAO Feng,ZHANG Li-fen. Hainan Provincial Center for STD/Skin Disease Control and Prevention,Haikou 570206,Hainan,CHINA

ObjectiveTo explore human papillomavirus(HPV)infection in people in Haikou,China,and provide a basis for the treatment and monitoring of HPV-infected patients.MethodsThe urinary secretion specimens of 615 patients from Out-patient Department of Venereal Diseases were analyzed with real-time fluorescent quantitation PCR(FQ-PCR)for HPV6,11 and HR-HPV(8 types).ResultsOf the 615 specimens,302(49.11%,302/ 615)were positive of HPV,including 130(21.14%,130/302)positive of HPV6,11 DNA,126(20.49%,126/302)positive of HR-HPV DNA,and 46(7.48%,46/302)positive of both HPV6,11 and HR-HPV DNA.There was no statistically significant difference between the low-risk group(HPV6,11)and the high-risk group(HPV6,11 combined with HR-HPV),P>0.05.Of the 302 HPV-infected patients,187(61.92%,187/302)had condyloma acuminata(CA),out of which 126(67.38%,126/187)were positive for HPV6,11 DNA,19(10.16%,19/187)positive for HR-HPV DNA and 42(22.46%,42/187)positive for both HPV6,11 and HR-HPV DNA.Infection with low-risk HPV6,11 was mostly seen in these CA patients,followed by mixed infection with both HPV6,11 and HR-HPV and then by high-risk infection with HR-HPV,where the differences among groups were significant(P＜0.01).ConclusionThe main genotype of CA is low-risk HPV6,11,while the high-risk genotype of HPV often exists in a mixed status.Being rapid and precise in the determination of HPV genotype in CA patients,fluorescent quantitation PCR is an effective clinical method for classifying HPV infection.

Human papillomavivus;Fluorescent quantitation PCR;Infection rate;Condyloma acuminata

R373

A

1003—6350（2015）18—2723—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.18.0988

2015-05-10)

林丽华。E-mail：59940784@qq.com