趋化因子受体CCR4和CCR7在三阴性乳腺癌组织中的表达及与临床预后的相关性

张春侠,王 妍,章来长,张晓元,赵胤铭

(空军航空医学研究所附属医院,北京 100089)

趋化因子受体CCR4和CCR7在三阴性乳腺癌组织中的表达及与临床预后的相关性

张春侠,王 妍,章来长,张晓元,赵胤铭

(空军航空医学研究所附属医院,北京 100089)

目的 研究趋化因子受体CCR4和CCR7在三阴性乳腺癌组织中的表达及与临床预后的相关性。方法 选取58例三阴性乳腺癌患者及58例乳腺增生患者，采用免疫组化技术检测标本中CCR4和CCR7的表达情况，并分析其与患者的临床病理之间的关系。结果 三阴性乳腺癌患者中CCR4和CCR7高表达均显著多于乳腺增生患者(P均<0.05)，且CCR4和CCR7两者的表达呈显著正相关(r=0.614，P<0.05)。CCR4表达阳性者总生存率显著低于CCR4蛋白表达阴性者(P<0.05)。CCR7表达阳性者总生存率低于CCR7蛋白表达阴性者，差异有统计学意义(P<0.05)，CCR4的表达与肿瘤分期、腋窝淋巴结转移、远处转移有关(P<0.05),CCR7的表达与腋窝淋巴结转移、淋巴结转移个数有关(P<0.05)。CCR4与CCR7高表达患者内脏转移与骨转移率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 趋化因子受体CCR4和CCR7在三阴性乳腺癌组织中呈现高表达，两者呈负相关关系，可应用于临床诊治三阴性乳腺癌患者和判断预后。

CCR4；CCR7；三阴性乳腺癌

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，发病率占全身各种恶性肿瘤的7%～10%，已成为威胁妇女健康的主要疾病[1]。根据基因学技术乳腺癌可分为正常乳腺样型、Her-2过表达型、基底样癌、管腔型和管腔型B 5个亚型，三阴性乳腺癌是指雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体均阴性的一种特殊类型乳腺癌，其分化程度低，恶性程度高，复发转移常见，预后差，内分泌治疗效果欠佳，无有效的靶向治疗药物[2-3]。研究发现，乳腺癌细胞株CCR4可加强对CCL17的趋化反应，增强微血管密度并促进肺转移；CCR7的表达和临床分期及乳腺癌腋窝淋巴结转移相关[4]。所以，研究趋化因子受体CCR4和CCR7在三阴性乳腺癌组织中的表达及与临床预后显得非常重要。

1 临床资料

1.1一般资料 按知情同意原则选取2008年6月—2009年12月于我院就诊的经病理检查确诊为三阴性乳腺癌患者的乳腺癌组织标本58例，患者在就诊前均未行放化疗治疗，均无合并远处脏器转移的原发性乳腺癌，年龄36～78(57.1±11.2)岁。肿瘤TNM分期Ⅰ期9例，Ⅱ期38例，Ⅲ期11例；乳头状癌2例，导管癌50例，分泌性癌2例，小叶癌1例，特殊类型癌3例。另取同期乳腺增生患者的正常乳腺组织标本58例，患者年龄31～48(41.2±7.2)岁。

1.2免疫组化方法 取下标本后石蜡包埋连续性切片，切片厚2.5 μm，常规脱蜡、水化。恒温65 ℃烤箱过夜，碱性修复组织抗原，自然冷却至室温。用PBS洗涤之后，滴加3%过氧化氢，室温孵育10 min。以PBS液充分浸洗后，滴加一抗，在室温下孵育1 h。然后以PBS液充分浸洗后，滴加试剂1，室温孵育10 min，PBS液充分浸洗后，滴加试剂2，室温孵育10 min，PBS液充分浸洗。HE染色，滴加显色剂，显色5 min，脱水、透明、封片保存。抗体及免疫组化试剂盒购于北京中杉金桥生物技术公司。

1.3观察项目 在400倍光镜下读片交观察记录结果，每份切片取10个高倍镜视野采取双人双盲计数，记录切片中CCR4和CCR7蛋白阳性表达及其染色强度。两者蛋白阳性表达判定位置为癌细胞或正常腺上皮细胞胞质。按染色强度分4等级： 0分为无色，1分为淡黄色，2分为黄色，3分为棕黄色；再按阳性细胞所占的百分比评分： 0分为阳性细胞 <5%，1分为5%～<25%，2分为25%～<50%，3分为50%～<75%，4分为≥75%。低表达为染色强度与阳性细胞百分比的分值乘积<6分，高表达为≥6分。随访时间从手术当天算起截止时间为2013年12月31日，手术当天至第1次转移或复发的时间为无病生存时间，手术当天至患者随访截止或死亡的时间为总生存时间。

1.4统计学方法 采用SPSS 17.0软件进行数据录入及数据分析。2组及多组计数资料表达差异、临床病理特征及转移情况的比较采用卡方检验或Fisher精确检验，CCR4和CCR7的相关性采用Spearman相关分析，生存率的比较采用log-rank检验。检验水准α=0.05。

2 结 果

2.12组CCR4和CCR7表达情况 CCR4主要定位于乳腺癌组织细胞质中，有部分细胞核着色，呈棕黄色细颗粒状。三阴性乳腺癌组织中，有20例呈现CCR4高表达，有25例呈现CCR7高表达，CCR4、CCR7主要定位于乳腺癌组织细胞质中，呈棕黄色细颗粒状。三阴性乳腺癌组织CCR4、CCR7表达与正常乳腺组织比较差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组CCR4和CCR7表达情况 例

2.2不同CCR4和CCR7表达三阴性乳腺癌患者生存状况比较 CCR4表达阳性者无病生存时间为12个月，阴性者30个月，2者比较差异无统计学意义(P>0.05)；CCR4表达阳性者总生存时间为26个月，阴性者50个月，2者比较差异有统计学意义(P<0.05)。CCR7表达阳性者无病生存时间为15个月，阴性者29个月，2者比较差异无统计学意义(P>0.05)；CCR7表达阳性者总生存时间为35个月，阴性者50个月，2者比较差异有统计学意义(P<0.05)。

2.3CCR4和CCR7在三阴性乳腺癌组织中的表达相关性 乳腺癌组织中CCR4表达阳性的CCR7 表达阳性率(85.0%，17/20)高于在乳腺癌组织 CCR4 表达阴性的CCR7的表达阳性率(21.1%，8/38)。在三阴性乳腺癌组织中，CCR4和CCR7的表达呈显著正相关，相关系数r=0.614(P<0.001)。见表2。

表2 CCR4和CCR7在三阴性乳腺癌组织中的表达相关性 例

注：r=-0.717,P<0.001。

2.4三阴性乳腺癌组织中CCR4与CCR7表达与临床病理特征的关系 CCR4的表达与肿瘤分期、腋窝淋巴结转移、远处转移有关，CCR7的表达与腋窝淋巴结转移、淋巴结转移个数有关，差异均有统计学意义(P均<0.05)。见表3。

表3 CCR4与CCRT表达与乳腺癌患者临床病理指标的关系 例

2.5三阴性乳腺癌组织中CCR4与CCR7表达与远处转移的关系 本组发生肿瘤复发或转移30例，其中肝转移5例，肺转移10 例，骨转移6 例，脑转移10例，胸壁转移共3例，远处、纵隔淋巴结转移4例；2个或者2个以上器官转移5例，因肿瘤而死亡患者21例。CCR4与CCR7高表达患者内脏转移率分别为35%(7/20)和32%(8/25)，骨转移率分别为15%(3/20)和12%(3/25)。经过Fisher检验，差异无统计学意义(P>0.05)。

3 讨 论

乳腺癌是威胁女性生命健康的最常见的恶性肿瘤，发病率占全身各种恶性肿瘤的7%～10%，在妇女仅次于子宫癌，已成为威胁妇女健康的主要病因[5-7]。其主要治疗方法包括放化疗、手术治疗、靶向治疗及激素治疗等。三阴性乳腺癌是恶性程度高、分化程度低的一种高危类型，由于靶向治疗及内分泌治疗疗效效果不明显，患者预后差，已被临床热门关注[8-10]。趋化因子作为促炎细胞因子，是能使细胞发生趋化作用的细胞因子总称，可参与细胞生长、分化、凋亡、损伤、肿瘤生长转移等多种病理和生理的过程。CCR4是CC趋化因子受体CCR家族中的一员，主要表达于多种淋巴细胞。Li等[11]研究表明，CCR4在乳腺癌中呈高表达且CCR4的高表达与肺、骨等的转移相关。CCR7的配体有2个，包括CCL19和CCL21，主要在淋巴结中特异性高表达，生理状况下CCR7及其配体介导淋巴细胞向淋巴结迁移与归巢[12]。Mashino等[13]研究发现，CCR7在大约2/3的胃癌组织呈高表达，且CCR7的高表达与胃癌淋巴结转移密切相关，因此笔者推断CCR7在乳腺癌发病中可能也参与了乳腺癌细胞淋巴结转移的过程。

本研究结果显示，CCR4和CCR7在三阴性乳腺癌组织中均呈现高表达，差异有统计学意义。CCR4及CCR7表达阳性者总生存率明显低于表达阴性者。乳腺癌组织中CCR4表达阳性患者CCR7表达阳性率明显高于表达阴性者；在三阴性乳腺癌组织中，CCR4和CCR7的表达呈正相关关系。CCR4的表达与肿瘤分期、腋窝淋巴结转移、远处转移有关，CCR7的表达与腋窝淋巴结转移、淋巴结转移个数有关，差异均有统计学意义。即使内脏转移患者比骨转移患者多，但差异无统计学意义，这有待进一步研究及临床验证。

作为小分子分泌性细胞因子趋化因子，跟特异性受体联合，共同导致肿瘤的发生、发展及转移[14-15]。CC族趋化因子受体CCR4 和 CCR7，能否作为抗肿瘤转移治疗的新靶点、与其他细胞因子之间的相互作用、有无淋巴道、信号通路的发生传导、器官特异性转移及机制等问题有待进一步研究。在不久的将来，随着对趋化因子及其受体网络的研究不断深入，相信基于趋化因子-受体轴的特异性三阴性乳腺癌治疗新途径将有望被发现。

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10.3969/j.issn.1008-8849.2015.06.017

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1008-8849(2015)06-0618-03

2014-04-20