儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因Val158Met多态性与阿立哌唑治疗精神分裂症患者疗效的相关性研究

周 鑫，李康智，秦群生

(1. 广西桂林市精神卫生中心/桂林市社会福利医院，广西 桂林 541001；2. 桂林医学院，广西 桂林 541004)

儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因Val158Met多态性与阿立哌唑治疗精神分裂症患者疗效的相关性研究

周 鑫1，李康智2，秦群生1

(1. 广西桂林市精神卫生中心/桂林市社会福利医院，广西 桂林 541001；2. 桂林医学院，广西 桂林 541004)

目的 探讨儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)基因Val158Met多态性与阿立哌唑治疗精神分裂症患者疗效的相关性。方法 选取接受阿立哌唑治疗的精神分裂症患者80例作为治疗组，选取同期愿意充当精神疾病志愿者的健康人70例作为对照组。应用即聚合酶链式反应-限制性片段长度多态分析(PCR-RFLP)与即阳性、阴性症状评定表(PANSS)进行基因分型与精神症状评定，同时观察应用阿立哌唑治疗的临床效果。结果 2组的基因型及等位基因频率比较差异有统计学意义(P均<0.05)。经阿立哌唑治疗后，患者PANSS评分明显降低(P<0.05)。3种基因型应用阿立哌唑治疗后疗效比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 COMT基因Val158Met多态性并不关联于临床症状的改善，阿立哌唑治疗精神分裂，能够有效改善患者精神状况及部分认知状况。

精神分裂症；儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因Val158Met多态性；阿立哌唑

儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)是导致精神分裂症的候选基因之一，这类型基因处于22q11.2，即22号染色体，其长臂11区2亚带上[1]。COMT基因的cDNA已经可被全长克隆，克隆大小在6 210 bp左右[2]。对患者认知功能研究发现，精神分裂症患者在工作记忆、注意力、智商、信息加工等方面会受到COMT基因多态性影响，且在Met基因型认知功能上远远优于另2种类型[3]。据调查，全世界约有1%的人口受到精神分裂症的影响，由此可见，该病是全球主要的公共卫生疾病。多数学者认为，COMT基因会引发精神分裂症，同时影响患者的认知功能与治疗效果[4]。本研究分析了80例精神分裂症患者COMT基因Val158Met多态性，阿立哌唑治疗精神分裂症的疗效，报道如下。

1 临床资料

1.1一般资料 选取2012年5月—2014年6月在桂林市精神卫生中心接受治疗的精神分裂症患者80例作为治疗组，均符合美国精神障碍与行为问题诊断标准第4版(DSM-Ⅳ)相关标准，患者未患有严重内脏器官疾病，无较强烈的自杀企图，无严重药物依赖现象，未滥用过精神活性物质，在入组前14 d未服用过抗抑郁、抗癫痫、抗精神病等药物，患者均签署知情同意书。80例患者中，男49例，女31例；年龄17～60(38.4±2.7)岁；病程(16.3±4.1)年(4个月～29年)。选取同期自愿作为精神疾病志愿者的健康人70例为对照组，男44例，女26例；年龄16～60(38.2±2.9)岁。2组性别、年龄比较差异无统计学意义(P均>0.05)，具有可比性。

1.3检测指标与方法

1.3.1采集血液，提取DNA基因组 取外周静脉血5 mL置于0.5 mL的EDTA试管中，即刻放入-80 ℃低温冰箱中保存。7 d后按照如下步骤对白细胞中的DNA进行提取：①取500 μL的静脉全血，在其中混入TBP裂解液，将二者摇匀后放置3 min，而后应用高速冷冻离心机行离心处理1 min，而后弃掉上清。②上述步骤需重复3次左右，一直到形成沉淀，且颜色为淡红色或者无色即可停止。③在离心管中加入20 μL的RNase/蛋白酶K液，而后即刻振荡摇晃，待其均匀后放入温度55 ℃左右的水槽中行衡温浴处理，时间45 min左右，在温浴期间数次对离心管行来回颠倒处理。④加入3 mol/L NaAc 10 μL，至pH值为4.8，而后再加入结合缓冲液1 250 μL，行振荡摇晃处理，待其均匀后行3 min的转动处理，而后在离心吸附柱中应用TIP加入上清液，放置1 min后行3 min离心转动处理。⑤将废液倒掉，加入漂洗缓冲液约600 μL，离心30 s，将此步骤重复2次后，最后一次将废液倒掉，再行3 min的离心处理，这样能够保证漂洗缓冲液被充分去除。⑥在容量为1.5 mL的EP管中套上已经被取出的离心柱，将洗脱缓冲液50 μL加入其中，放置1 min后行1 min的离心处理，而后所提取到的DNA就会出现在EP管中。

1.3.2COMT基因型分析 ①主要应用PCR-RFLP法，P1为正向引物，序列号为5’-TCGTGGACGCCGTGATTCAGG-3’；P2为反向引物，序列号为5’-AGGTCTGACAACGGGT CAGGC-3’。PCR具体反应条件为：94 ℃预变性8 min，94 ℃变性1 min，57 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，上述步骤循环35次后。在72 ℃条件下逐渐延伸8 min，而后保存于4 ℃条件下。②对PCR产物行纯化处理。将DB缓冲液150 μL放入PCR反应液中，振荡摇匀。而后在Collection上将Spin Column放置好，行1 min离心处理，将滤液弃掉。再在Spin Column中先后放入Rinse A和Rinse B，离心处理30 s后将滤液弃掉；在容量为1.5 mL的新型EP管中放好Spin Column，在中央位置混入Elution Buffer液30 μL，放置1 min。而后再行1 min的离心处理，以对DNA行洗脱处理。③对产物行酶切处理。将20 μL的酶切体系、7 μL的ddH2O、2 μL的10×buffer、10 μL的PCR产物以及1 μL的NlaⅢ酶放入容量为0.5 mL的EP管中，振荡摇晃处理后放入温度37 ℃的水浴中，时间控制在2.5 h。而后再应用浓度为3%的琼脂糖凝胶行20 min的电泳处理，基因分型如下：V/V基因型为136 bp、81 bp；M/M基因型为96 bp、81 bp以及40 bp；V/M基因型为136 bp、96 bp、81 bp以及40 bp。由于40 bp拥有较小的条带且已经扩散开，故而成像较模糊。

1.3.3精神症状评定 主要应用PANSS与临床疗效总评量表(CGI)进行精神症状评定。①PANSS量表：主要包括一般精神病理、阳性以及阴性量表。每个症状按照0～7分评分，7分为最严重，0分为最轻。②CGI量表：主要包括疗效指数(EI)、病情严重程度(SI)以及疗效总评(GI)3项。SI用于评定病情程度，0分代表没有病，7分代表极其严重；GI用于评定患者治疗前后的情况，0分代表未评，7分代表病变严重；EI是结合患者治疗效果以及不良反应进行评定，EI=疗效分/不良反应分，疗效主要有4个级别，1分代表恶化或者未出现变化，4分代表疗效显著；不良反应也有4个级别，1分代表未出现不良反应，4代表不良反应已经对患者安危有所威胁。

2 结 果

2.12组COMT基因Val158Met多态性分布情况 2组基因型及等位基因频率比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。见表1。

表1 2组COMT基因Val158Met多态性分布情况

2.2治疗组治疗前后PANSS与CGI评分比较 治疗后各评分均明显降低(P均<0.05)。见表2。

2.3COMT基因多态性与阿立哌唑治疗前后PANSS之间的相关性 3种基因型患者经阿立哌唑治疗后疗效比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

3 讨 论

精神分裂症主要是指个性、情感、行为以及思维上的分裂，发病机制至今尚未明确，可能与内分泌、遗传或者环境有关[5]。诸多研究认为，家庭中若有近亲出现精神分裂者，则与患者血缘愈加浓厚，患上精神分裂症的概率也越高，由此可见，遗传是主要原因[6]。COMT基因属于多巴胺的主要降解酶[7]，其具有多态性，且不同基因型有不同活性，主要有3型，V/V型为高活性，V/M型为中等活性，M/M型为低活性。该基因中的碱基G会被A替换，而后使得COMT结构出现变化，使得缬氨酸逐渐转变为蛋氨酸，这一突变致使COMT酶活性大幅度降低，致使位于大脑前额的多巴胺(DA)出现代谢紊乱现象，从而致使精神分裂症的发病率增加[8]。此外，COMT基因Val158Met多态性与精神分裂症患病率上升存在某种关联。本研究结果显示，治疗组的M/M基因型频率要比对照组高，表明M等位基因可能是精神分裂症的易感因素。同时，Val158Met多态性在极大程度上决定着COMT活性，其多态性也关联于COMT酶活性，V/V与M/M基因型患者会致使DA水平缺乏平衡性，导致大脑前额叶、扣带回以及海马等位置的DA信号出现异常，从而增加精神分裂症的风险[9-11]。笔者认为V/M基因型精神分裂症的发病概率低。

表2 治疗组治疗前后PANSS与CGI评分比较，分)

表3 COMT基因多态性与阿立哌唑治疗后PANSS与CGI评分相关性±s，分)

目前，阿立哌唑作为临床主要抗精神病药，与D2、D3、5-HT1A、5-HT2A受体具有高亲和力，与D4、5-HT2 c、5-HT7、α1、H1受体及5-HT重吸收位点具有中度亲和力。阿立哌唑是D2和5-HT1A受体的部分激动剂，也是5-HT2A受体的拮抗剂，与其他具有抗精神分裂症作用的药物一样，阿立哌唑的作用机制尚不清楚，但认为是通过对D2和5-HT1A受体的部分激动作用及对5-HT2A受体的拮抗作用介导产生的，与其他受体的作用可能产生了阿立哌唑临床上某些其他的作用，如对α1受体的拮抗作用可以阐释其体位性低血压的现象，能够稳定多巴胺系统，同时对5-HT2A受体起阻断作用[12-14]，亦有部分激动功能，故而可有效治疗精神分裂症患者的情感以及精神障碍。且临床研究后证实，该药对阴性症状改善情况比阳性症状好，尤其体现在认知功能方面[15-16]。而M/M基因型患者本来就比其他2种基因型患者有更好的认知能力，故而阿立哌唑对M/M基因型精神分裂患者认知功能改善效果最优[17]。

本研究结果显示，阿立哌唑治疗后精神分裂症患者PANSS评分明显降低，且不同基因型患者的各项评分均明显下降，各型间评分比较差异无统计学意义。

综上所述，COMT基因Val158Met具有多态性，且M等位基因以及M/M基因型在很大程度上属于精神分裂症的易感因素，然而该多态性并不关联于临床症状的改善。阿立哌唑治疗精神分裂能够有效改善患者精神状况，亦可改善部分患者的认知状况。

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Study on the correlation between COMT gene Val158Met polymorphism and clinical efficacy of aripiprazole in the treatment of schizophrenic patients

ZHOU Xin1, LI Kangzhi2, QIN Qunsheng1

(1.The Mental Health Cente of Guilin/Guilin City Social Welfare Hospital, Guilin 541001, Guangxi, China; 2.Guilin Medical University, Guilin 541004, Guangxi, China)

Objective It is to approach the correlation of COMT gene Val158Met polymorphism and clinical effect of aripiprazole in treatment of schizophrenic patients. Methods 80 cases of schizophrenia patients received aripiprazole were selected as treatment group, 70 cases of healthy people who willing to volunteer spirit disease were selected as control group. The clinical data were retrospectively analyzed, as the treatment group. The genotyping were detected by Polymerase Chain Reaction restriction fragment length polymorphism analysis (PCR-RFLP), the symptoms were evaluated by Positive and Negative Symptom Scale (PANSS). At the same time, the curative effects were observed. Results There was significant differences in the genotypes and allele frequency between both groups (allP<0.05). After treatment by aripiprazole, the PANSS scores were significantly reduced in treatment group (P<0.05), but there was no significant difference between the three genotypes after treatment by aripiprazole (allP>0.05). Conclusion COMT gene Val158Met polymorphism is not associated with the improvement of clinical symptom, aripiprazole in treatment of schizophrenia patients to mental health, can effectively improve the patient's mental health and part of cognitive status.

schizophrenia; COMT gene Val158Met polymorphism; aripiprazole

周鑫,男，主治医师，研究方向为精神分裂症及双向情感障碍的诊疗。

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.06.004

R749.3

A

1008-8849(2015)06-0580-04

2014-08-30