微粒色谱法和高效液相色谱法检测糖化血红蛋白的相关性研究

杨朝美，马 珍

(重庆市急救中心检验科 400015)



·论 著·

微粒色谱法和高效液相色谱法检测糖化血红蛋白的相关性研究

杨朝美，马 珍△

(重庆市急救中心检验科 400015)

糖化血红蛋白； 相关性； 微粒色谱法； 高效液相色谱法

近年来，随着人们生活水平的提高和饮食结构的改变，糖尿病的患病率逐年上升，成为威胁大众健康的主要慢性非传染性疾病之一。血糖水平的大幅度变化会激发多途径代谢从而损伤微血管和大血管[1-2]，血糖控制较差的糖尿病患者更易并发感染,其致死、致残率高[3]。糖化血红蛋白(HbA1c)水平能体现患者近2个月的血糖情况，其作为糖尿病血糖回顾性观察的常用指标，在病情评估的同时，有助于临床医生调整患者的降糖方案。近年来，HbA1c作为糖尿病患者的血糖监测指标在临床上被广泛认可，临床医生已将其作为评估糖尿病血糖控制水平的相对金标准[4]。微粒色谱法和高效液相色谱法是检测HbA1c的两种常用方法，根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)的指南文件EP9-A2[5]，本研究比较分析了上述两种方法用以HbA1c检测的相关性。现将研究结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 样本标准遵循EP9-A2[5]文件要求，随机选定抽血时间，每日从本院门诊和住院患者中选取8例全血标本，连续收集5 d，共收集40例，其中男17例、女23例，所有标本均无溶血，均以乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝，均在6 h以内检测。

1.2 仪器与试剂 微粒色谱法检测系统采用挪威NycoCard®ReaderⅡ检测仪；高效液相色谱法检测系统采用上海惠中医疗科技有限公司MQ-2000PT糖化血红蛋白仪。所有试剂、校准品、质控品均为相应厂家提供的配套产品。

1.3 检测方法 按照EP9-A2[5]文件的方法采样后，以统计学随机标记的方法标注每日的8份临床全血标本，按顺序运用2个检测系统检测HbA1c，再反序检测，即每份标本获得2个值，连续测定5 d。检测过程保证仪器的良好性能，由本院检验科经验丰富的技术人员严格遵循标准操作规章进行检测，使每日获得的结果有良好的质量控制。X(比较方法)和Y(试验方法)分别为微粒色谱法检测系统和高效液相色谱法检测系统。

1.3.3 数据作散点图和偏倚图 以比较方法测定的结果为X,试验方法测定的结果为Y，制作散点图和偏倚图，计算回归方程，评价线性程度。

1.4 统计学处理 将两个检测系统所测得的对应的HbA1c数据，根据EP9-A2[5 ]文件中的统计分析流程，运用Excel2012进行统计分析。

2 结 果

2.3 相关散点图及偏倚图分析 以比较方法结果为X，试验方法结果为Y制作散点图，相关系数r=0.993，r2=0.986，线性回归方程为Y=1.088 5X-0.521 4，回归线性良好，且r≥0．975，表明两种方法的数据相关性好，见图1。两种方法测定的平均值无明显差异，且在X轴两侧均匀排列，见图2。

图1 挪威NycoCard®ReaderⅡ检测仪和

Xi(%)

图2 两种检测系统的偏倚图

3 讨 论

糖尿病患者的血糖监测具有重要的临床意义，临床上主要通过检测末梢血糖反映患者的实时血糖水平；而长期的血糖水平则主要依据HbA1c水平的检测值，该值可反映患者近2个月的血糖控制情况[7]。人体血液红细胞中的正常血红蛋白(Hb)主要由HbA1组成，占97%；其次为HbA2和HbF，分别占2.5%、0.5%。糖化血红蛋白为葡萄糖分子与血红蛋白A组分的组合产物，通过红细胞的非酶促反应，生成HbA1c酮胺化合物。HbA1c水平可体现被检测者的长期血糖水平，对糖尿病患者的血糖控制和用药方案的制订具有指导作用。目前用于HbA1c检验的方法较多，主要依靠电荷或被检测物的结构进行检测。而色谱法是临床检测HbA1c的“金标准”，主要包括阳离子交换层析法和高效液相色谱法[8-9]。本研究通过比较分析同一被测物微粒色谱法与高效液相色谱法的临床评价结果，分析其检验性能，为实验室HbA1c检测方法的选择提供指导和参考依据。

挪威NycoCard®ReaderⅡ检测仪(微粒色谱法)的原理：检测包含红、绿、蓝3对发光二极管[10]。光电二极管路线以白色样品为参比样品，对检测样品的光反射情况进行测量。在NycoCard®ReaderⅡ检测仪的测试菜单中选择某一种检测后，检测所需发光二极管将照亮待测样品，样品对某些光的反射将在光电二极管回路中引起相反的电流，从而对电容进行放电，使其电压从V1线性降低至V2。电压降至V2后，微处理器接受系统发送的讯号，并计算电压从V1降低至V2所需时间(T)。反射光密度(I)与T呈反比，微处理器将时间转换为浓度值，并将其显示出来。

MQ-2000PT糖化血红蛋白分析仪采用高效液相色谱法，由于非糖化血红蛋白带正电荷，而HbA1c几乎不带电，因此可根据所带电量的不同将其分离。固定相选择弱酸性阳离子交换固定相，存在交换阳离子的基团，能同带正电荷的非糖化血红蛋白结合，在低浓度下洗脱出HbA1c，再利用高浓度洗脱液洗脱获得非糖化血红蛋白。被分离出来的血红蛋白洗脱液通过415nm波长的紫外光检测吸光度，得到相应的血红蛋白层色谱。HbA1c水平以色谱图中HbA1c的峰面积占血红蛋白面积的百分率表示。高效液相色谱法分离效率高，能分离HbF、L-A1c等血红蛋白的变异体，降低血红蛋白变异体对稳定的HbA1c检测结果的干扰，使HbA1c的测定结果更加可靠。

本实验结果表明，上述两种检测方法的重复性好，相互间无离群点存在；r=0.993，符合r≥0.975，相关性好。两种方法在可进行相关性研究的范围内，结果无明显差异。此外，系统误差可接受，偏倚分布佳。两种方法的检测原理虽有差异，检测手段虽然不同，但实际所测结果无明显差异。临床上同一实验室采用多种方法测定HbA1c的现象较多，而实际的临床应用要求所获得的结果不受测定方法的影响，因此实验室在应用不同方法测定HbA1c时必须可比、可替代。微粒色谱法和高效液相色谱法测定的HbA1c结果具有可比性和较好的相关性，表明两种方法的测定结果类似，可相互替换，均可用于临床。

综上所述，微粒色谱法和高效液相色谱法可比性高，相关性好，符合临床需求。实验室可根据自身条件，选择适合的测定方法。

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Study on relationship between particle chromatography and high performance liquid chromatography in detection of glycosylated hemoglobin

YANGChao-mei,MAZhen△

(DepartmentofClinicalLaboratory,ChongqingEmergencyMedicalCenter,Chongqing400015，China)

glycosylated hemoglobin; correlation; particulate chromatography; high performance liquid chromatography

杨朝美，女，本科，主管检验技师，主要从事生化检验研究。△

,E-mail:mzhen100@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.024

A

1672-9455(2015)05-0641-03

2014-10-26

2014-12-28)