2010—2013年常州地区手足口病病原学分析

黎俊宏，徐晓怡，王凤鸣，姚 萍，李 琼，徐 辉，何明祯

手足口病（hand,footandmouth disease,HFMD）是一种好发于幼儿的疾病，常以发热为首发症状，主要特征为皮肤和口腔黏膜的损伤。皮肤损伤多为斑丘疹或水泡样皮疹，多见于以患儿的手掌、脚足部为代表性的身体部位，有时亦出现于患儿的臀部、手肘和脚膝处；口腔黏膜损伤多为口腔溃疡，有些患儿表现为疱疹性咽峡炎，也有些患儿不出现口腔损伤[1]。

引起HFMD的病毒很多，主要为小RNA病毒科肠道病毒属，包括柯萨奇病毒A组（coxasckievirus A,CoxA）的 2、4、5、6、7、9、10、16 型等、B 组的1、2、3、4、5 型等、肠道病毒（enterovirus,EV）71 型及埃可病毒等。其中以EV71及CoxA16型较为常见[2－3]。EV71 感染不仅能引起 HFMD，还可引起脑膜炎、脑炎、急性迟缓性瘫痪等严重中枢神经系统并发症[4]；CoxA16感染初期引起的HFMD临床症状与EV71难以区别，但对神经系统的侵袭及其严重并发症却较后者少见[5]。

由于EV71与CoxA16引起HFMD有着相似的临床症状及体征，其病原学型别必须通过实验室检测来确诊。本研究采用实时荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR），对 2010年 1月—2013年12月常州地区HFMD患儿进行病原学分析，并分析患者年龄、性别及标本类型等因素对型别分布及阳性率的影响，为把握HFMD的防控工作提供实验室依据。

1 对象与方法

1.1 对象 常州市2010年1月—2013年12月HFMD监测网疫报总病例数为25 644例，选取其中HFMD患儿1945例。各医疗单位均以《手足口病诊疗指南（2010版）》[6]为临床诊断标准，并严格规范采样，每病例采集咽拭子和肛拭子各一份，冷藏送检，24 h内 4°C 保存，超过 24 h的－20°C 保存。

1.2 仪器及试剂 ABI7500实时荧光定量PCR仪、MME－24提取仪和MagMAX－96病毒核酸抽提试剂盒均系美国ABI公司产品；无菌病毒采样管系友康基业生物科技有限公司产品；HFMD肠道病毒通用引物、EV71和CoxA16病毒RNA实时荧光定量PCR检测试剂盒系硕世生物科技有限公司产品。

1.3 检测方法 核酸提取：采样管涡旋震荡2min，取50μl混匀液，利用病毒核酸抽提试剂盒和MME－24磁珠处理仪，获得50μl病毒RNA洗脱液。实时荧光定量PCR：按照试剂盒说明书配制反应液。反应条件：50℃，30min，1个循环；95℃，5min，1个循环；95℃，10 s，55℃，40 s，45个循环。阴阳对照和标本结果判断以说明书为准。同一例患儿肛拭子或咽拭子任意一项出现阳性结果即判为阳性。

1.4 统计学处理 应用SPSS 16.0软件对数据进行统计分析。各组病原体型别分布差异性检验用R×Cχ2检验，多组阳性率比较用R×Cχ2检验，2组阳性率比较用四格表χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同年份病原体型别分布及阳性率 4个年份病原体型别分布不同，差异有统计学意义。2010和2012年以CoxA16型最多，EV71次之；2011年以EV71最多，CoxA16型次之，非EV71、CoxA16的其他EV型（指肠道病毒通用引物检测阳性而EV71和 CoxA16检测阴性）均为最少；2013年以非EV71、CoxA16其他 EV 型最多，EV71型次之，Cox－A16最少。见表1。

2.2 不同年龄患儿病原体型别分布及阳性率 在总阳性率方面，除1～岁组的总阳性率高于0～岁组外，其余各组间差异均无统计学意义。不同年龄段3种病原体型别分布差异具有统计学意义，其中0～岁组和1～岁组均以非EV71、CoxA16的其他EV型最多，EV71 次之，CoxA16 最少；3～岁组和 6～岁组均以EV71最多，CoxA16次之，非 EV71、CoxA16的其他EV型最少。见表2。

表1 不同年份病原体型别分布及阳性率［阳性例数(%)］Table 1 Genotype distribution from 2010 to 2013[positives(%)]

表2 不同年龄患儿病原体型别分布及阳性率［阳性例数(%)］Table2 Genotype distribution in differentage groups[positives(%)]

2.3 不同性别病原体型别分布及总阳性率 男童与女童病原体型别分布及总阳性率差异均无统计学意义。见表3。

表3 男童与女童病原体型别分布及阳性率［阳性例数(%)］Table 3 Genotype distribution in boys and girls[positives(%)]

2.4 不同标本来源病原体型别分布及总阳性率 肛拭子组和咽拭子组病原体型别分布差异无统计学意义，但肛拭子组总阳性检出率高于咽拭子组（P＜0.05）。见表 4。

3 讨 论

HFMD是一种常见的肠道传染病，全球均有流行。在过去的几十年里，随着医疗卫生水平和社会关注的提高，我国多个省市多次报道了HFMD流行状况；2008年安徽省阜阳市EV71型HFMD暴发致多起死亡病例的疫情[7]，更是引起国内的高度重视。

表4 肛拭子和咽拭子病原体型别分布及阳性率［阳性例数(%)］Table 4 Genotype distribution in rectal and throat swab samp les[positives(%)]

本研究利用实时荧光定量PCR方法对2010年1月—2013年12月我市1945例HFMD病例的病原体进行检测并分析，结果表明：EV71和CoxA16型是我市HFMD主要感染型别，这与国内其他省市和周边城市报道[8－11]相符；而非 EV71、CoxA16 其他EV型感染率呈逐年上升趋势，4年间感染型别差异具有统计学意义，由此提示，未来的HFMD病原体型别分布亦有可能发生变化。对476例非EV71、CoxA16其他EV型继续分型发现，CoxA6型348例，CoxA10型41例，CoxB 4型19例，仍有68例待分型，这与现有报道基本相符[12]。按照年龄将HFMD病例分为4个组，分析发现：在总体阳性率方面，除1～岁组的总体阳性率高于0～岁组外，其余各组间差异均无统计学意义。不同年龄段3种病原体型别分布差异具有统计学意义，其中0～岁组和1～岁组均以非EV71、CoxA16型最多，EV71次之，CoxA16最少；3～岁组和6～岁组均以EV71最多，CoxA16型次之，非EV71、CoxA16的其他EV型最少。

按照性别分组，发现男童组和女童组病原体感染型别及总阳性率无显著差异。由此提示，在HFMD的日常防控工作中，对于各个年龄阶段的男童与女童均须加强儿童卫生意识的培养，重视良好的卫生生活习惯的养成，多运动以增强机体免疫力，重视生活环境的消毒，在高发季节坚持每日检查体温及皮肤黏膜的损伤情况等。HFMD防控工作应紧抓不放，以杜绝聚集性感染的发生。

目前，用于HFMD临床诊断标本有疱疹液、血清、脑脊液、粪便、肛拭子、咽拭子等。基层医疗机构较易获取的则为肛拭子和咽拭子，而国内外有关这2种标本检测差异的文献较少。对二者进行HFMD检出评价，有利于实验室诊断和了解HFMD病原学特征，并对基层医疗机构采集样本有指导作用。本研究结果发现，肛拭子组和咽拭子组病原体型别分布差异无统计学意义，但肛拭子组总阳性检出率高于咽拭子组，这可能与两种标本采集时机和HFMD发病病程有关[13]，提示样本取材应该采取以肛拭子为主和咽拭子为辅的采集方案，建议在基层医疗单位中推广。而对于仍有部分标本检测为阴性，应考虑以下几个方面[14]：临床上将相似HFMD病例误诊为HFMD病例；采集样本时，操作不规范，未采集到或采集量不够；运输和保存样本是否不当，病毒采样液反复冻融导致核酸降解。这些都有待于今后工作中进一步调查研究。

本研究为我市对HFMD病原学流行趋势的判断和预测提供了实验室依据，并为有针对性地制定HFMD预防与控制的策略提供了思路，同时为经济有效地开展工作提供了帮助。

志谢 南京医科大学基础医学院郭雪江

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