浒苔粉对肉鸡免疫机能及盲肠微生物区系的影响

王述柏，史雪萍，周传凤，朱风华，林英庭

（青岛农业大学动物科技学院，山东 青岛266109）

目前全世界海藻粉产量达5万吨，许多国家建有海藻饲料加工厂，将海藻粉作为饲料添加剂广泛应用于畜禽饲养，我国海藻粉的生产及应用还处于起步阶段[1]。浒苔（Entermorpha prolifera）属绿藻门石莼目石莼科浒苔属的藻类植物，具有味道鲜美、营养全面、藻体嫩绿、野生资源丰富、极易生长繁殖等特点，是一种极具开发价值的海洋藻类。据报道，饲喂浒苔粉可明显降低肉兔血液低密度脂蛋白胆固醇和甘油三酯的含量[2]，提高生长猪日增重和料重比[3]，提高肉鸡胃肠道消化酶活性和饲料利用率[4-5]。目前有关浒苔粉在畜禽体内的作用机制、适宜添加方式及合理添加水平等有待于进一步探讨。本试验在前期研究的基础上，研究了肉鸡饲粮中不同浒苔粉添加水平对其免疫机能及肠道微生物群落的影响，旨在为新型非常规饲料资源-浒苔粉在家禽生产中的合理开发应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 试验动物：400只1日龄健康爱拔益加（AA）肉仔鸡（购自青岛正大集团肉种鸡场）。

浒苔粉常规营养成分含量经实验室测定分别为：粗蛋白9.15%，粗纤维6.02%，粗脂肪0.75%，灰分27.11%，盐分8.42%，钙1.46%(均为干物质中所占比例)。

疫苗：新支妥（鸡新城疫LaSota株+传支H120二联疫苗）、锐必法（鸡传染性囊病耐热保护剂活苗）和鸡新城疫Ⅳ系（均购自普瑞生物药业有限公司）。

1.2 试验设计 供试鸡按完全随机原则分为4组。每组5个重复，每重复20只。第1组为对照组，饲喂基础饲粮，第2组、第3组和第4组于基础饲粮中分别添加1%、2%、4%浒苔粉，第2组、第3组和第4组饲粮中食盐添加量分别减少0.08%、0.17%、0.25%（使各组饲粮食盐含量均为0.35%）,其他组成成分与对照组相同。预试期5 d，正试期30天。基础饲粮组成及营养水平见表1。

表1 基础饲粮组成及营养水平

1.3 免疫程序 1日龄检测试验鸡新城疫母源抗体效价平均为5（log2），各组间无显著差异。试验鸡免疫程序见表2。

1.4 饲养管理 试验鸡均按肉鸡饲养管理规程常规饲养，自由采食、饮水，饲养管理条件完全一致。

表2 试验鸡免疫程序

1.5 检测指标及方法

1.5.1 免疫学指标 分别于21日龄、35日龄，自各试验组随机取5只鸡，每重复1只，心脏采血，2 mL加抗凝剂，用于检测淋巴细胞转化率，2～3 mL不加抗凝剂，制备血清，-20℃保存，用于检测新城疫抗体效价。

新城疫抗体效价和淋巴细胞转化率：新城疫抗体效价采用HI试验测定，结果以log2的平均值表示。血液淋巴细胞转化率采用MTT法测定，结果以刺激指数（SI值）表示[6]。

免疫器官指数：各试验组随机取5只鸡，每重复1只，21日龄和35日龄屠宰后摘取肉鸡免疫器官（胸腺、脾脏、腔上囊）并称重。计算免疫器官指数。

免疫器官指数（g/kg）=免疫器官重量（g）/活重（kg）×100%。

1.5.2 盲肠微生物群落 试验鸡于42日龄早饲前，自每组每重复随机取1只鸡，颈动脉放血处死，迅速剖腹并结扎盲肠的开口端，灭菌手术刀切取盲肠，酒精棉球消毒结扎开口端后，放入已灭菌塑料袋中。在超净工作台上立即称取0.50 g盲肠内容物于已灭菌试管中，加入灭菌稀释液4.5 mL，加入灭菌玻璃珠，用力振摇使之充分溶解，静置15min，逐级稀释至10-3～10-7倍，分别吸取稀释液10μL，大肠杆菌接种于麦康凯培养基，37℃培养24 h，乳酸杆菌和双歧杆菌分别接种于MRS培养基和TPY琼脂培养基，37℃厌氧培养48 h，每个稀释度做两个重复。选择最适宜的稀释梯度（以20～300个菌落为宜），对3种微生物进行平板菌落计数，求其平均值并计算每克肠道内容物所含的细菌数。数据以每克盲肠内容物中菌落（CFU）的对数值（log CFU/g）表示[7]。

2 数据处理

试验数据采用Excel软件整理，SPSS11.5软件One-way ANOVA进行方差分析，LSD法进行组间差异显著性检验。表中数据以“平均数±标准差”表示。

3 结果与分析

3.1 浒苔粉对肉仔鸡血清新城疫抗体效价的影响 肉仔鸡血清新城疫抗体效价见表3。由表3可知，21日龄时各试验组均显著高于1组（对照组）（P＜0.05）；35日龄时2组、3组、4组分别较对照组高6.20%、16.80%、13.40%，3组、4组与对照组差异显著（P＜0.05）。

表3 肉仔鸡血清新城疫抗体效价 （log2）

3.2 浒苔粉对肉仔鸡血液淋巴细胞转化率的影响

肉仔鸡血液淋巴细胞转化率见表4。由表4可知，试验组淋巴细胞转化率均不同程度高于对照组。21日龄，2组、3组和4组显著高于1组（P＜0.05）；35日龄，2组和3组极显著高于1组（P＜0.01）；4组显著高于1组（P＜0.05）。

表4 肉仔鸡血液淋巴细胞转化率 （SI值）

3.3 浒苔粉对肉仔鸡免疫器官指数的影响 肉仔鸡免疫器官指数见表5。由表5可知，各试验组肉鸡的胸腺指数和腔上囊指数与对照组（1组）无显著差异（P＞0.05）。21日龄，3个试验组肉仔鸡的脾脏指数均略高于对照组，差异不显著（P＞0.05）；35日龄，3个试验组脾脏指数均显著高于对照组（P＜0.05)。

表5 肉仔鸡免疫器官指数 （g/kg）

3.4 浒苔粉对肉仔鸡盲肠微生物区系的影响肉仔鸡盲肠微生物数量见表6。由表6可知，盲肠大肠杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌数量各组间差异均不显著（P＞0.05）。

4 讨论

4.1 浒苔粉对肉鸡免疫机能的影响 鸡血清抗体效价和血液淋巴细胞转化率可分别反映其体液免疫和细胞免疫能力。钟礼云[8]、徐大伦等[9]研究发现，浒苔多糖和浒苔的甲醇提取物均能够明显促进T、B淋巴细胞的增殖反应。本试验表明，饲粮中添加浒苔粉可不同程度提高肉仔鸡新城疫抗体效价，提高肉仔鸡血液淋巴细胞转化率，脾脏指数亦均高于对照组，说明浒苔粉对肉鸡免疫能力有促进作用。浒苔粉含有丰富的硫酸多糖，硫酸多糖可通过与淋巴细胞和吞噬细胞表面的受体结合、调节环磷酸腺苷（cAMP）和Ca2+等信使分子的浓度，影响细胞内的信息传递过程，诱生酶及多种细胞因子，激活补体、巨噬细胞和T、B淋巴细胞等来增强机体的免疫[8-10]，可见，浒苔粉提高动物免疫机能的作用机制与其所含的生物活性成分有关。

4.2 浒苔粉对肉仔鸡肠道微生物的影响 吕琴等[11]报道，不同种类海藻对大鼠盲肠内微生物区系及肠内环境具有不同的影响。浒苔粉含有多种生物活性成分，主要有浒苔多糖、脂溶性色素、蛋白质多肽、甾醇、脂肪酸等[12]。李凌绪等[13]报道，浒苔的乙醇提取物对甜椒灰霉菌、链格孢菌有较强的抑制作用。孙国强等[14]报道，浒苔粉对奶牛牛粪中大肠杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌菌落数无显著影响。本试验结果表明，试验组肉仔鸡盲肠乳酸杆菌、双歧杆菌的数量有提高的趋势，但与对照组无显著差异，对肉仔鸡盲肠大肠杆菌数量亦无显著影响。

4.3 浒苔粉的应用前景及存在问题 海藻饲料是一种极有研究价值、经济价值和开发利用潜力的野生饲料资源。浒苔粉作为饲料产品的研究开发虽已取得了一定的进展，但存在很多不足，如因不同种类、不同产地浒苔粉营养成分的较大差异性，导致其在饲料中应用方法的不统一；高盐分浒苔的脱盐处理技术；浒苔配套配方技术的实际测定等，上述问题有待进一步研究。

5 结论

饲料中添加1%～4%浒苔粉，可显著提高肉仔鸡血清新城疫抗体效价、血液淋巴细胞转化率和脾脏指数，对盲肠大肠杆菌、乳酸杆菌和双歧杆菌数量无显著影响。可见，饲用浒苔粉可提高肉仔鸡免疫能力。

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