性能评价、方法学评价及参考区间验证在ALI FAX血沉检测质量保证中的应用

性能评价、方法学评价及参考区间验证在ALI FAX血沉检测质量保证中的应用

陈显秋,曲林琳,王学军,刘天明*

(吉林大学第一医院 检验科，吉林 长春130021)

红细胞沉降率(血沉，ESR)是指抗凝静脉血直立静置于室温下，红细胞在单位时间内沉降的速度。有报道，病理性ESR增高与结核、类风湿性关节炎、感染、恶性肿瘤、红斑狼疮、多发性骨髓瘤等许多疾病相关[1]，是一项非特异性的检验项目。用于ESR检测的Westergren法被国际血液标准化委员会(ICSH)推荐为ESR测定的标准方法[2]。Westergren法操作简便，但容易受管内抗凝剂稀释，不同厂家血沉管的内径、材质存在差异，检测用血量较大，操作及结果判读费时费力，不适合大批量标本ESR的检测。本检验科自2008年引进ALI FAX TEST1血沉仪替代westergren法检测血沉以来，通过每12个月对其进行仪器校准，随后评价仪器等准确性、重复性和携带污染率等主要性能指标，并进行参考区间验证，来保证分析过程中的检验质量。为了了解仪器法与westergren法检测血沉的差异以及标本存放时间对结果的影响，我们对ALI FAX TEST1仪器法与Westergren法检测结果进行差异和相关性比较，对标本稳定性进行评价。

1材料与方法

1．1材料ALI FAX TEST I血沉仪(意大利)和Westergren法检测的血液样品均采用乙二胺四乙酸(EDTA)-K2抗凝的真空抗凝管，采集2ml静脉血抗凝，真空抗凝管购自广州阳普医疗科技股份有限公司。ALI FAX TEST I血沉仪在检测前及每年按仪器说明书要求应用配套标准品进行校准。

1.2样本检测按照仪器说明书，开机后仪器预热并进行自检，仪器前面控制区液晶屏上显示“adjusting temp…”，待仪器内部温度稳定在37℃后进行样本针和管路清洗，然后样本检测，按照屏幕提示将装载有EDTA-K2抗凝血的样本架插入检测道，关门，按“START”开始检测，仪器自动旋转混匀并完成检测。每批检测前及检测完毕后都进行样本针和管路清洗，及时清理废液桶。

1.3性能评价(1)准确度：用ALI FAX TEST l检测卫生部室间质评血沉5份标本，记录测定值(X)，将测定值与靶值(Y)做差，计算出偏倚(B)和相对偏倚(%)，公式为B=|X-Y|，B%=|X-Y|/Y×100%；(2)重复性：选用10例ESR结果覆盖正常、异常的标本分别在血沉仪上连续检测11次，将第1次测定结果去除，计算每份样本的变异系数(CV)值；(3)携带污染率：选取ESR高值和低值标本各一份，依次检测高值3次(H1，H2，H3)、低值3次(L1，L2，L3)，计算携带污染率，公式为携带污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%。

1.4稳定性评价随机抽取40例EDTA-K2抗凝血标本各2份，采集后30 min内在ALI FAX TEST l上检测完毕，将标本分别保存在室温(23-26℃)和4-8℃下于采集后4 h、16 h进行仪器法检测，比较不同存放条件下ESR的变化情况。

1.5方法学评价抽取EDTA-K2抗凝血标本40份(血沉仪结果标记*者除外)，用仪器法检测得到的ESR结果涵盖高、中、低水平，再用Westergren法[3]进行检测，将两种方法所得的ESR结果做显著性检验及相关性分析(r值及回归方程)，分析比较两种检测方法的差异及相关程度。

1.6参考区间验证选取健康男性、女性EDTA-K2抗凝血液标本各20例，在经校准并通过性能验证的ALI FAX TEST1血沉仪上进行检测，每组ESR检测结果95%(19例)分布在现行参考区间内，1例结果在参考区间以外时判定为该参考区间有效。如果某组中有≥2例检测结果在参考区间之外，则必须重新收集这组(20例)标本重新检测，不超过2例结果在参考区间以外时可判定为参考区间通过验证；若在参考区间以外的超过2例，在排除标本原因、检测系统和检测程序原因后，进一步进行生物参考区间调查，必要时自行建立参考区间。

1.7统计分析显著性检验、相关性分析、95%CI等统计应用GraphPad Prism5.0进行完成。

2结果

2.1性能评价

2.1.1准确度应用ALI FAX TEST l检测卫生部室间质评5个水平的样品，结果见表1。所得的偏倚均在允许范围内。

2.1.2重复性10例ESR结果覆盖正常、异常的全血标本，每份标本经ALI FAX TEST1重复检测11次，将第1次测定结果去除，计算其余10次的CV值，1份低值ESR样本的CV为14.5%，其余均<10%(见表2)，符合重复性不超过1/3TEa的标准[4]。

2.1.3携带污染率选取ESR高值和低值标本各一份，高值3次(H1，H2，H3)测定结果分别为116、115、120，低值3次(L1，L2，L3)测定结果分别为6、8、5，利用携带污染率公式(L1-L3)/(H3-L3)×100%计算出携带污染率0.8%。

表2　ALI FAX TEST l重复性验证结果

2.2稳定性评价40例EDTA-K2抗凝血标本各2份，采集后30 min内在ALI FAX TEST l上完成检测，随后将标本分别保存在室温(23-26℃)和4-8℃下于采集后4 h、16 h进行仪器法检测。与采集后立即检测的ESR结果比较，采集后室温、4-8℃放置4 h检测的ESR结果无明显变化；而在室温或4-8℃放置16 h后检测ESR结果明显降低(P<0.05，见表3)。

表3　 ALI FAX TEST l稳定性检测结果评价(ESR单位：mm/h)

注：△与采集后30 min内ESR检测结果相比。

2.3方法学比较ALI FAX TEST1仪器经校准、配套标准品通过正确度验证，40份EDTA-K2抗凝血标本经仪器法检测，与Westergren法3检测相比，两种方法所得的ESR结果无显著性差异(P>0.05)，相关性较好(y=0.9294x-0.9019，R2=0.8222，图1)。

2.4参考区间验证ESR现用参考区间，男性为0-15 mm/L，女性为0-20 mm/L。ALI FAX TEST1血沉仪经仪器校准、性能验证通过后，检测20例健康男性及20例健康女性ESR(表4)，结果健康男性ESR分布范围2-25 mm/L，其中有1例ESR为25 mm/L超出参考区间上限，其余19例ESR结果在2-15 mm/L范围内，符合95%可信区间的要求；健康女性ESR分布范围2-28 mm/L，其中有1例ESR为28 mm/L超出参考区间上限，其余19例ESR结果在2-18 mm/L范围内，符合95%可信区间的要求。

图1　ALI FAX TEST1与Westergren法检测ESR结果差异

表4　健康男性、女性ESR检测结果(单位：mm/h)

3讨论

ALI FAX TEST1全自动血沉仪采用950 nm波长的红外线进行检测，光电二极管检测器收集的电脉冲信号与红细胞在毛细管固定位置出现的密集程度相关。每个样本在单位时间内所检测的电脉冲信号变化被描绘成一条沉降曲线，在单位时间内信号的减低被转换成数值。该仪器检测速度110份/小时，每个测试所需的样本量仅为150 μl全血，仪器配套样本架可同时放入60份标本进行检测，有利于批量上样、自动旋转混匀，适合本检验科进行大批量血沉样本的检测。仪器内部温度恒定在37℃，保证了检测环境的稳定性。因此ALI FAX TEST1血沉仪与westergren法相比除了检测速度的优势外，还可基本排除环境温度、样本混匀、管径大小等实验因素的影响。为了提高仪器法检测的准确性和重复性，需要监控仪器性能。本检验科按照ISO15189：2007《医学实验室——质量和能力的专用要求》[5]和美国临床和实验室标准协会(CLSI)发布的性能验证指南EP10-A[6]制定了血沉检测的性能验证方案，规定了性能验证的内容、频率、时机、步骤、结果分析和结论。一般情况下在每次仪器校准之后进行性能评价，包括正确度、精密度和携带污染率。应用可溯源的配套标准品[7]对该仪器进行正确度验证，配合3个水平的室内质控品，以保证仪器检测的准确性。重复性的评价结果表明，ESR值较低时，CV值较高，随着ESR值升高，其CV逐渐降低，ALI FAX对于检测高值血沉表现出良好的重复性，这对于临床疾病的治疗监测、随访具有重要的意义。该仪器的准确性、重复性较好，检测效率较高，使用中还需注意携带污染现象[8]，经评价该仪器携带污染率低，能够较好地保障检测结果准确性和重复性。治疗过程中或治疗后患者血液中的药物成分或特殊的代谢产物可能会对仪器的电脉冲信号产生干扰，进而影响个别结果的准确性[9]。

考虑到国际血液标准化委员会(ICSH)推荐用EDTA-K2作为血沉检测的抗凝剂，标本稳定性评价和参考区间验证时均用EDTA-K2抗凝全血完成。ALI FAX TEST 1仪器经校准、性能评价后，40例样本分别用仪器法和westergren法检测，经证实两种方法检测结果无显著差异，相关性也很好，而仪器法实验温度为37℃，westergren法为室温，可见对于仪器法和westergren法两种方法来讲，不同的实验温度对检验结果影响不大。而检测需在样本采集后4 h内完成。

由于仪器法与westergren法检测血沉的方法学不同，而目前国内较权威的参考资料[3]和医学实验室一直采用NCCLS C28-A2[10]推荐可以引用权威书刊、其他实验室或制造商提供的生物参考区间，采用适用性验证的方法建立参考区间，在2008年ALI FAX TEST 1应用之初进行了参考区间调查，认为wesIergren法的参考区间适用于仪器法检测。根据ISO15189：2012《医学实验室质量和能力的专用要求》[11]规定，实验室必须慎重建立自己的生物参考区间并定期评审。对于现用的参考区间，本检验科每年进行一次参考区间验证，并召开一次临床联席会评审参考区间，以确保参考区间适用。

随着检验自动化的发展，ALI FAX TEST 1血沉仪检测血沉比westergren法更容易被医学实验室尤其是样本量大的实验室采纳，但仪器法检测要求重视仪器的维护和保养，以保证仪器性能。因此定期的性能验证有利于保证结果的准确性和重复性，还能及时提示仪器异常，为血沉检测准确性和重复性提供保障。

参考文献：

[1]朱喜丹,田刚,王南华.ROC曲线评价红细胞沉降率在14种疾病中的诊断价值[J]．《国际检验医学杂志，2013，3:276.

[2]ICSH recommendations for measurement of erythrocyte sedimentation rate.International Council for Standardization in Haematology[J].J Clin Pathol，1993，46(3):198.

[3]叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程[M]．第3版.南京:东南大学出版社，2007.

[4]Proficiency testing requirements under CLIA '88.American Society of Internal Medicine.

[5]ISO 15189:2007《Medical laboratories -- Particular requirements for quality and competence》.

[6]EP10 A:1998《Preliminary Evaluation of Quantitative Clinical Laboratory Methods》

[7]Cha CHI,Cha YJ,Park CJ,et al.Evaluation of the TEST 1 erythrocyte sedimentation rate system and intra- and inter-laboratory quality control using new latex control materials[J].Clin Chem Lab Med，2010，48(7):1043.

[8]张智慧，汤菲，王宪灵，等．全自动生化分析仪携带污染的原因及对策[J]．临床误诊误治，2009，22(12)：18．

[9]Hardeman MRI,Levitus M,Pelliccia A,et al.Test analyser for determination of ESR Practical evaluation and comparison with the Westergren technique[J].Scand J Clin Lab Invest，2010，70(1):21.

[10]NccLS C28-A2 How to Define and Reference Intervals in the Clinical Laboratory．NCCLS．2000．

[11]ISO 15189:2012《Medical laboratories-Particular requirements for quality and competence》.

(收稿日期：2015-01-17)

文章编号：1007-4287(2015)12-2105-04

*通讯作者