白花败酱草抗妇科肿瘤有效部位对Siha细胞体外抑制作用研究

2015-03-07 02:10朴成玉陈婷婷周忠光
黑龙江科学 2015年2期
关键词:败酱草白花抑制率

朴成玉 ,房 城 ,张 颖 ,陈婷婷 ,周忠光

(1.黑龙江中医药大学药物安全性评价中心,哈尔滨 150040;2.黑龙江中医药大学,哈尔滨 150040)

白花败酱草(Patrina villosa Juss,PVJ)系败酱科植物,药用其全草,味辛,性寒[1]。白花败酱出自《本草纲目》[2],败酱草来源为黄花败酱(Patrinia scabiosaef olia Fisch)和白花败酱(Patrinia villosa Juss),以全草入药,应称为白花败酱草[3],具有清热解毒、利湿排脓、活血化瘀、镇心安神的功效,近年来白花败酱草的抗肿瘤作用备受关注[4]。实验通过MTT法和细胞形态观察,考察白花败酱草有效部位对Siha细胞的体外抑制作用。

1 材料

1.1 药材与试剂

白花败酱草有效部位(本实验室自制,含有总皂苷61.81%,总黄酮8.69%);顺铂注射液,江苏豪森。

1.2 细胞株与试剂

人子宫颈鳞癌细胞Siha、RPMI-1640培养基、胎牛血清(均购自上海佛雷堡);噻唑蓝(购自Sigma);二甲基亚砜(购自Amresco)。

1.3 仪器

酶标仪(上海热电);CO2培养箱(NAPCO);Olympus倒置显微镜;生物洁净工作台(苏州安泰)。

2 方法

2.1 药液的配制

本实验分为不同浓度的白花败酱草有效部位组、顺铂组、空白组,共八组。分别精密移取储备液(6.4mg/mL) 用培养液稀释为 20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL、320μg/mL、640μg/mL 六种不同浓度的白花败酱草有效部位溶液;顺铂注射液用培养液稀释制得浓度为5μg/mL的阳性药药液。

2.2 细胞生长抑制实验

采用MTT法检测。选取对数生长期的Siha细胞,调整细胞浓度至1×105个/mL,分别接种于96孔板培养,每孔100μL。培养24h加不同浓度的白花败酱草有效部位药液、顺铂药液、RAPM1640培养液继续培养24h、48h、72h。培养结束前4h,每孔加入5μg/mL的MTT20μL。培养结束后弃去培养液,每孔加入DMSO150mL,轻轻震荡10min,用酶标仪测定每孔吸光度(A),检测波长为570nm。抑制率(%)=(1-A药液组/A空白对照组)×100%。

2.3 对细胞形态的影响

选取对数生长期的Siha细胞,调整细胞浓度至2×105个/mL,分别接种于6孔板培养,每孔100μL。培养24h后分别加白花败酱草有效部位药液(320μg/mL)、顺铂药液(5μg/mL)、RAPM1640 培养液 200μL 继续培养,分别于 0h、6h、12h、24h 用光学显微镜观察。

3 结果

3.1 细胞生长抑制实验

不同浓度的白花败酱草有效部位对Siha细胞的生长均有不同程度的抑制作用,40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL、320μg/mL、640μg/mL 剂量组与空白组相比均有显著性差异(P<0.05),并呈剂量依赖关系;各浓度组对细胞的抑制率随时间延长而增高,呈时间依赖关系,详见表1。

表1 白花败酱草有效部位对Siha细胞生长的抑制作用(X±SD-)Tab.1 Inhibitory effect ofPatrinia villosaactive composition on Siha cell

3.2 对细胞形态的影响

倒置显微镜下观察空白组细胞呈上皮型贴壁生长,细胞呈延展、扁平,细胞均质而透明,细胞一般有2~4个核仁,核膜、核仁轮廓明显,细胞间结构紧密,细胞生长旺盛,给药组细胞轮廓增强、反差增大,变圆浮起,细胞间接触变松,增殖减慢,胞质中颗粒增多,见图1。

图1 白花败酱草有效部位及顺铂阳性药对Siha细胞凋亡形态的影响Fig.1 Study on influence of Patrinia villosa activecomposition and cisplatin to Siha cells apoptosis morphology

4 讨论

近年来,宫颈癌的发病率逐渐上升,严重危害妇女健康,其治疗费用昂贵且治愈率低,给家庭和社会带来沉重的负担。本实验结果表明,白花败酱草有效部位对Siha细胞有显著的生长抑制作用,其抑制率与药物的作用浓度和作用时间呈依赖关系。其中作用时间为48h时,药物浓度在20~640μg/mL范围内量效关系变化比较均一,作用时间为72h,药物浓度超过320μg/mL时,抑制率的变化较缓慢。白花败酱草有效部位对Siha细胞的抑制作用明确,但其作用机制尚不清楚,需要进一步研究。

[1] 宋立人.现代中药大辞典[M].北京:人民卫生出版社,2001:1268.

[2] 卢寅熹.败酱草的本草考证[J].时珍国药研究,1996,7(3):129.

[3] 王立军,李运景.败酱草的本草考证[J].中草药,2004,35(6):696-697.

[4] 宋婷,孙晖,路娟,等.白花败酱草体外抗肿瘤活性部位筛选[J].时珍国医国药,2012,23(10):2410-2412.

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