白花败酱草抗妇科肿瘤有效部位对Siha细胞体外抑制作用研究

朴成玉 ,房 城 ,张 颖 ,陈婷婷 ,周忠光

（1.黑龙江中医药大学药物安全性评价中心，哈尔滨 150040；2.黑龙江中医药大学，哈尔滨 150040）

白花败酱草（Patrina villosa Juss,PVJ）系败酱科植物，药用其全草，味辛，性寒［1］。白花败酱出自《本草纲目》［2］，败酱草来源为黄花败酱（Patrinia scabiosaef olia Fisch）和白花败酱（Patrinia villosa Juss），以全草入药，应称为白花败酱草［3］，具有清热解毒、利湿排脓、活血化瘀、镇心安神的功效，近年来白花败酱草的抗肿瘤作用备受关注［4］。实验通过MTT法和细胞形态观察，考察白花败酱草有效部位对Siha细胞的体外抑制作用。

1 材料

1.1 药材与试剂

白花败酱草有效部位（本实验室自制,含有总皂苷61.81%，总黄酮8.69%）；顺铂注射液，江苏豪森。

1.2 细胞株与试剂

人子宫颈鳞癌细胞Siha、RPMI-1640培养基、胎牛血清（均购自上海佛雷堡）；噻唑蓝（购自Sigma）；二甲基亚砜（购自Amresco）。

1.3 仪器

酶标仪（上海热电）；CO2培养箱（NAPCO）；Olympus倒置显微镜；生物洁净工作台（苏州安泰）。

2 方法

2.1 药液的配制

本实验分为不同浓度的白花败酱草有效部位组、顺铂组、空白组，共八组。分别精密移取储备液（6.4mg/mL） 用培养液稀释为 20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL、320μg/mL、640μg/mL 六种不同浓度的白花败酱草有效部位溶液；顺铂注射液用培养液稀释制得浓度为5μg/mL的阳性药药液。

2.2 细胞生长抑制实验

采用MTT法检测。选取对数生长期的Siha细胞，调整细胞浓度至1×105个/mL，分别接种于96孔板培养，每孔100μL。培养24h加不同浓度的白花败酱草有效部位药液、顺铂药液、RAPM1640培养液继续培养24h、48h、72h。培养结束前4h，每孔加入5μg/mL的MTT20μL。培养结束后弃去培养液，每孔加入DMSO150mL，轻轻震荡10min，用酶标仪测定每孔吸光度（A），检测波长为570nm。抑制率（%）=（1-A药液组/A空白对照组）×100%。

2.3 对细胞形态的影响

选取对数生长期的Siha细胞，调整细胞浓度至2×105个/mL，分别接种于6孔板培养，每孔100μL。培养24h后分别加白花败酱草有效部位药液（320μg/mL）、顺铂药液（5μg/mL）、RAPM1640 培养液 200μL 继续培养，分别于 0h、6h、12h、24h 用光学显微镜观察。

3 结果

3.1 细胞生长抑制实验

不同浓度的白花败酱草有效部位对Siha细胞的生长均有不同程度的抑制作用，40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL、320μg/mL、640μg/mL 剂量组与空白组相比均有显著性差异（P＜0.05），并呈剂量依赖关系；各浓度组对细胞的抑制率随时间延长而增高，呈时间依赖关系，详见表1。

表1 白花败酱草有效部位对Siha细胞生长的抑制作用（X±SD-）Tab.1 Inhibitory effect ofPatrinia villosaactive composition on Siha cell

3.2 对细胞形态的影响

倒置显微镜下观察空白组细胞呈上皮型贴壁生长，细胞呈延展、扁平，细胞均质而透明，细胞一般有2～4个核仁，核膜、核仁轮廓明显，细胞间结构紧密，细胞生长旺盛，给药组细胞轮廓增强、反差增大，变圆浮起，细胞间接触变松，增殖减慢，胞质中颗粒增多，见图1。

图1 白花败酱草有效部位及顺铂阳性药对Siha细胞凋亡形态的影响Fig.1 Study on influence of Patrinia villosa activecomposition and cisplatin to Siha cells apoptosis morphology

4 讨论

近年来，宫颈癌的发病率逐渐上升，严重危害妇女健康，其治疗费用昂贵且治愈率低，给家庭和社会带来沉重的负担。本实验结果表明，白花败酱草有效部位对Siha细胞有显著的生长抑制作用，其抑制率与药物的作用浓度和作用时间呈依赖关系。其中作用时间为48h时，药物浓度在20～640μg/mL范围内量效关系变化比较均一，作用时间为72h，药物浓度超过320μg/mL时，抑制率的变化较缓慢。白花败酱草有效部位对Siha细胞的抑制作用明确，但其作用机制尚不清楚，需要进一步研究。

［1］ 宋立人.现代中药大辞典［M］.北京:人民卫生出版社，2001：1268.

［2］ 卢寅熹.败酱草的本草考证［J］.时珍国药研究，1996，7（3）：129.

［3］ 王立军，李运景.败酱草的本草考证［J］.中草药，2004，35（6）：696-697.

［4］ 宋婷，孙晖，路娟，等.白花败酱草体外抗肿瘤活性部位筛选［J］.时珍国医国药，2012，23（10）：2410-2412.