GC-ECD法测定5种保健食品中六六六和滴滴涕的农药残留

于桂芳，王宪平，胡军华，李家春，黄文哲，王振中，萧 伟*

1江苏康缘药业股份有限公司，连云港 222001;2中药制药过程新技术国家重点实验室，连云港 222001

GC-ECD法测定5种保健食品中六六六和滴滴涕的农药残留

于桂芳1，2，王宪平1，2，胡军华1，2，李家春1，2，黄文哲1，2，王振中1，2，萧 伟1，2*

1江苏康缘药业股份有限公司，连云港 222001;2中药制药过程新技术国家重点实验室，连云港 222001

目的：建立毛细管气相色谱法测定保健食品中六六六和滴滴涕残留的方法。方法：样品中的六六六、滴滴涕经过石油醚（30℃～60℃）提取、浓硫酸净化以及浓缩后，采用毛细管气相色谱法进行分离。色谱条件：DM-5弹性石英毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm)；电子捕获检测器（ECD）；载气为高纯氮气，柱流量为1.0 mL·min-1；进样口温度为230℃；检测器温度为300℃；进样量为1 μL；程序升温：初始温度150℃，以10℃·min-1升至250℃，保持5 min。结果：六六六、滴滴涕测定的线性关系良好，回收率为72.6%～96.5%，六六六的检测限为1.1 μg·kg-1，滴滴涕的检测限为1.8 μg·kg-1。结论：该法操作简便，准确，灵敏度高，可以满足保健食品中六六六、滴滴涕农药残留检测的需要，为保健食品的质量控制提供依据。

保健食品；六六六；滴滴涕；电子捕获检测器

随着人们保健意识的逐渐增强，对保健食品的需求日益增加，保健食品的质量控制包括农药残留问题日渐引起关注。国家标准GB16740《保健（功能）食品通用标准》规定保健食品要进行农药残留限量检查，检测项目包括有机氯农药（HCH）与滴滴涕（DDT）等。尽管我国早在1984年已停止使用HCH和DDT，但因其性质稳定、残留时间长、属高残毒农药，目前许多农产品、食品、中药材中仍能检出。

目前，保健食品中HCH与DDT的检测主要依据国家标准[1]的方法，但是该方法由于年代的限制存在一定的不足：“第一法毛细管柱气相色谱-电子捕获检测器法”的供试品处理方法主要针对食品，并且色谱条件适合分离近30种有机氯农药，保留时间太长；“第二法填充柱气相色谱-电子捕获检测器法”的色谱条件不适合现代的仪器设备。本文旨在国家标准及文献[2-4]的基础上，建立一种保健食品中HCH与DDT残留的检测方法，为质量控制提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

气相色谱仪（Agilent 6890N），配电子捕获检测器（ECD）；离心机（TDL-5-A型，上海安亭科学仪器厂）；调速多用振荡器（HY-4型，普瑞斯机械有限公司）。

1.2 试药与样品

8种有机氯农药对照品分别为：α-HCH（Lot 20202，纯度99.5%）、β-HCH（Lot10216，纯度97.5%）、γ-HCH（Lot 21119，纯度98.6%）、δ-HCH（Lot 31109，纯度99.7%）、4，4′-DDE（Lot1221，纯度98.0%）、4，4′-DDD（Lot 00908，纯度99.5%）、2，4′-DDT（Lot 30627，纯度98.5%）、4，4′-DDT（Lot 30115，纯度98.5%），均购自德国Dr.Ehrenstorfer公司。石油醚（30～60℃）为色谱纯；浓硫酸为分析纯；5种保健食品（固体、液体两种），均为江苏康缘药业股份有限公司现代中药研究院提供的在研品种，代号分别为：QHHBP（1 S）、QPP（2 S）、QGP（3 S）、GKP（4 S）、HYCZY（5 S）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

弹性石英毛细管柱DM-5（30 m×0.32 mm，0.25 μm），63Ni-ECD电子捕获检测器；载气为高纯氮气，柱流量为1.0 mL·min-1（恒流方式）；进样口温度为230℃；检测器温度为300℃；进样量为1 μL，进样方式为不分流进样；尾吹气流量为30 mL· min-1；程序升温：初始温度150℃，以10℃·min-1升至250℃，保持5 min。从图1可以看出，8个成分均得到较好地分离，分离度大于1.5，峰型对称性良好，保留时间小于14 min。

图1 空白溶剂（A）、混合对照品溶液（B）及供试品溶液（C）的气相色谱图

2.2 对照品溶液的制备

对照品储备液：精密称取各对照品适量，用石油醚分别制成每毫升约含0.2 mg的溶液，摇匀即得。

混合对照品溶液：精密量取上述各对照品储备液50 μL，置50 mL量瓶中，用石油醚制成每毫升含200 ng的混合对照品储备液；精密量取该混合储备液1 mL至10 mL量瓶中，用石油醚制成每毫升含20ng的混合对照品溶液，摇匀即得（需临用前现配）。

2.3 供试品溶液的制备

固体样品：取样品粉末或内容物约5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入石油醚50 mL，振荡30 min，过滤，滤渣用少量石油醚洗涤，浓缩至5 mL，加0.5 mL浓硫酸净化，振摇0.5 min，于3000 r·min-1离心15 min。如此反复，直至净化充分。

液体样品：取约2 g，精密称定，置10 mL刻度试管中，加入石油醚溶解并定容至刻度。加1.0 mL浓硫酸净化，振摇0.5 min，于3000 r·min-1离心15 min。如此反复，直至净化充分。

2.4 标准曲线及线性范围

取200 ng·mL-1的混合对照品储备液，用石油醚逐级稀释配制成 1、2、5、10、20、40、80、100 ng· mL-1系列标准溶液，按“2.1”色谱条件测定，以各组分浓度为横坐标，各组分峰面积为纵坐标进行线性回归，结果见表1。结果表明各组分线性关系良好。

2.5 检测限

取混合对照品溶液逐步稀释，按“2.1”色谱条件进样测定，计算检测限。从表2可以看出，HCH、DDT各异构体检测限之和分别为 0.0011、0.0018 mg· kg-1，分别小于GB[1]同法折算后二者检测限0.0013、0.019mg·kg-1[5]，即本法灵敏度满足检测要求。

2.6 进样精密度

表1 各组分回归方程及线性范围

表2 各对照品在样品中的检测限

取20 ng·mL-1的混合对照品溶液，按上述色谱条件连续进样5次，测得各组分各次的峰面积，计算相对标准偏差（RSD）在1.1%～1.8%，表明仪器稳定，进样精密度良好。

2.7 回收率试验

取不含HCH与DDT的样品约5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入40 ng·mL-1的混合对照品溶液1.0 mL，自“加入石油醚50 mL”起，同“供试品溶液的制备”，平行制备6份，按上述色谱条件测定，计算各组分的回收率，结果见表3。

表3 各组分回收率试验结果（n=6）

2.8 样品测定

取5种保健食品，按上述“供试品溶液的制备”方法平行制备2份，按“2.1色谱条件”进行测定，以保留时间定性，峰面积外标法定量，结果见表4。

表4 5种样品测定结果（μg·kg-1，n=2）

3 讨 论

3.1 色谱条件的考察

关于程序升温条件：国家标准[1]中8个组分全部出峰需要28 min，且4，4′-DDD与4，4′-DDT没有达到基线分离；药典标准[6]需要18 min；本方法只需13 min，并且8个组分全部达到分离，峰型对称性好。

3.2 供试品制备方法的考察

样品的净化方式依据国家标准 （GB/T5009.19 2008）[1]，采用浓硫酸通过磺化的原理把农药中杂质如色素和脂类分离除去，由于HCH和DDT对酸稳定，在处理过程中不会受到破坏。供试品制备方法中未规定浓硫酸净化的次数，实验过程中发现不同品种需净化的次数差别较大，一般品种只需净化一次即可得到较纯的供试品溶液，但是油类等特殊品种需要净化数次，否则杂质会污染称管、色谱柱及检测器，并且干扰待测组分；比较了色谱级石油醚与分析级石油醚的区别，由于分析级石油醚对HCH测定有干扰，故所以选择色谱级石油醚。

3.3 定量方式的选择

采用外标法定量，没有加内标是考虑到以下几个方面：①农药残留的测定属于限度检查，对含量的准确性要求不高。②依据国家标准[5]的要求，保健食品中HCH、DDT的4个异构体含量限值远大于检测限，微小的误差对结果不会造成较大的影响。③通过稳定性试验证明，样品溶液在18h内基本稳定。另外，样品中的部分成分含量超出线性范围，位于检测限与定量限之间，无法准确定量，这部分结果仅供参考。

[1]中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会. GB/T 5009.19-2008.中华人民共和国国家标准：食品中有机氯农药多组分残留量的测定[S].

[2]程巧鸳，谭春梅.毛细管气相色谱法测定33批中药保健食品中9种有机氯农药残留量 [J].中成药，2011，33（12）：2100-3.

[3]王丽萍，张 毅，封淑华，等.保健食品中六六六、滴滴涕农药残留的考察[J].药物鉴定，2010，19（24）：39-40.

[4]黄玉娟，吴春发，罗 飞，等.气相色谱法检测地下水中六六六和滴滴涕[J].环境监测管理与技术，2011，23（3）：81-4.

[5]中华人民共和国卫生部，中华人民共和国农业部.GB 2763-2012.中华人民共和国国家标准：食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量[S].

[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典，一部，第二增补本[S].北京：化学工业出版社，2010，184.

Residues Determination of Hexachlorocyclohexane and Clofenotane in Five Kinds of Dietary Supplements by GC-ECD

YU Gui-fang1,2,WANG Xian-ping1,2,HU Jun-hua1,2,LI Jia-chun1,2,HUANG Wen-zhe1,2,WANG Zhen-zhong1,2,XIAO Wei1,2*
1Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co.,Ltd,Lianyungang 222001;2State Key Laboratory of New-tech for Chi-nese Medicine Pharmaceutical Process,Lianyungang 222001

Objective:To establish a method for determination of residues of hexachlorocyclohexane (HCH)and clofenotane(DDT)in dietary supplements by GC-ECD.Methods:The samples were determined by capillary gas chromatography after petroleum ether extraction, sulphuric acid purification and concentration.The chromatographic conditions were as follows:the capillary column was DM-5(30 m×0.32 mm,0.25 μm)with an ECD detector;the carrier gas was high purity nitrogen and the column flow rate was 1.0 mL·min-1(constant flow);the flow rate of make-up gas was 30 mL·min-1;the temperature was 230℃for splitless sampling inlet and 300℃ for detector,the column temperature was initially 150℃,raised at 10℃·min-1to 250℃ and kept for 5 min.Results:The detection linearity of HCH and DDT were very good,the recovery rates were 72.6%-96.5%,the detection limits were 1.1 μg·kg-1for HCH and 1.8 μg·kg-1for DDT.Conclusion:This method can meet the needs for determination of HCH and DDT residues in dietary supplements,which is simple,accurate,highly sensitive and provides basis for quality control.

Dietary supplement;HCH;DDT;Electron capture detector

R927.11

A

1673-7806（2015）05-468-03

于桂芳，女，中级研究员 E-mail:gfyu100@126.com

*通讯作者萧伟，男，高级工程师 E-mail:kanionlunwen@163.com

2014-12-02

2015-01-12