汉族人外周血二氢尿嘧啶脱氢酶活力影响因素的研究*

丁永娟，许德金**，袁文博，卢红文，裴泽军

1江南大学附属医院药学部，无锡 214000；2无锡市第二人民医院药剂科，无锡 214000

汉族人外周血二氢尿嘧啶脱氢酶活力影响因素的研究*

丁永娟1，许德金1**，袁文博1，卢红文1，裴泽军2

1江南大学附属医院药学部，无锡 214000；2无锡市第二人民医院药剂科，无锡 214000

目的：考察年龄、性别、肝功能、肾功能以及是否怀孕这五大因素对汉族人外周血二氢尿嘧啶脱氢酶（DPD）活力的影响，为制定符合我国汉族人群实际的氟尿嘧啶类药物使用指南提供参考。方法：选取460份汉族人的血样分成5个大组，以外周血全血温孵的方法分别考察年龄、性别、肝功能、肾功能以及是否怀孕这五大因素对外周血DPD活力的影响。结果：汉族人外周血DPD活力与年龄负相关，与性别无关，当个体肝肾功能异常时，外周血DPD活力降低，当个体怀孕时，外周血DPD活力增强。结论：使用氟尿嘧啶类药物时，当患者为老人或肝肾功能异常时，应适当减量；当患者为无法避免用药的孕妇时，要注意怀孕导致药物代谢的异常加快。

二氢尿嘧啶脱氢酶；全血温孵；汉族人群

二氢尿嘧啶脱氢酶（DPD）是临床常见的氟尿嘧啶类药物代谢过程中最关键的限速酶[1]。研究显示：氟尿嘧啶类药物活化进入血液后约85%首先经过DPD代谢失活，剩余的药物通过参与嘧啶代谢途径发挥抗肿瘤作用，因此氟尿嘧啶类药物的毒性大小与DPD在人类血细胞中的活性程度密切相关[2]。

人类DPD活力的个体间变异程度较大。研究显示[3-4]DPD活力受种族差异、性别差异、生理节律性影响较大，与年龄、肝功能无关。在日本人中[3]，DPD活力与年龄呈正相关。而目前尚未见中国人群中DPD活力对氟尿嘧啶类药物代谢影响的调查研究。

本文选取了460份汉族人的血样，以外周血全血温孵的方法考察了年龄、性别、肝功能、肾功能以及是否怀孕这五大因素对外周血DPD活力的影响，旨在为氟尿嘧啶类药物的个体化给药提供参考。

1 资料与方法

1.1 实验入组条件和分组[5]

2014年5月至11月间，我院与无锡市第二人民医院合作，共选取460份汉族人的外周血样，分为5大组进行比较。第一大组考察不同年龄段间的外周血DPD活力差异，选取20～40岁健康人血样20份，40～60岁健康人血样20份，60岁以上健康人血样20份。第二大组考察性别差异对外周血DPD活力的影响，采集健康男性血样50份，健康女性血样50份。第三大组考察肝功能对外周血DPD活力的影响，选取肝功能异常者血样（分级以1983年武汉中国首届门静脉高压症研讨会制定的分级标准[6]为准，三级肝功能异常者的入组比例近似为1∶1∶1）50份，肝功能正常者血样50份。第四大组考察肾功能对外周血DPD活力的影响，选取肾功能异常血样（分级按美国CKD分期[7]，各期入组比例近似为1∶1∶1∶1∶1）50份，肾功能正常者血样50份。第五大组考察怀孕对外周血DPD活力的影响，选取20～40岁孕妇及健康未怀孕女性血样各50份。以上各组血样入组时，为避免各因素交互作用的影响，每组血样仅在研因素发生变化，其余因素保持一致。

利用矩阵的UV分解将每个用户的潜在因子求出，再利用解析几何中高维欧几里得空间中两个向量夹角的余弦公式相乘就可以得出得分矩阵。于是系统把得分最高的歌曲推荐给相应的用户即可(如下图示，统计图中的红色的字体即代表推荐的歌曲)

1.2 全血温孵体系的建立和DPD活力的计算

所谓信息素养就是指利用与其特定相关的一些列工具及资源等方式去感知信息，并且对信息做出识别、转换、处理和传递等基础操作，它是当前网络信息背景下学生所必备的基础性能力.高中信息技术是一门理论与实践并重、可操作性强的学科，它对学生把握知识的水平以及动手操作转换能力有很高的要求标准，是帮助教师引导学生建立信息素养的必经之路.因此，在高中信息技术教学过程中，教师应该提高自身专业素质、提升知识水平，在新的时代背景下关注学生个人能力，积极引导使其发挥主体能动性，高效的完成培养学生信息素养的教育目标，培养信息化专业人才.

因为结亲工作的调整，朱学江的结亲户有所变动，从原来的结亲户阿班调整为现在的赛力克，结亲周活动中朱学江与“亲戚”赛力克一同下地，帮助赛力克搬管子。不管跟谁结亲，朱学江都尽心、尽力地帮助结亲户解决实际困难。入住结束时，朱学江接到了阿班的电话，阿班热情地邀请朱学江到家里坐坐。

2.1 对外周血DPD活力影响的单因素分析

2 结 果

所有统计计算均由SPSS19.0中文版软件完成。考察外周血DPD活力与性别、肝功能、肾功能以及是否怀孕这四大因素的相关性时采用t检验。考察外周血DPD活力与年龄的相关性时采用方差分析。以P＜0.05为有统计学意义。

第二大组中男性与女性的外周血DPD活力数据均值接近（t=1.424，P＞0.05），差异无统计学意义。

5组血样的实验结果见表1。

表1 年龄、性别、肝功能、肾功能和是否怀孕5大因素对外周血DPD活力影响的统计学结果

第一大组血样中的青年组（20～40岁）、中年组（40～60岁）和老年组（60岁以上）外周血DPD活力进行方差分析（F=3.832，P=0.042）结果说明，不同年龄组的外周血DPD活力有显著性差异。

该系统选用Nokia5110液晶模块作为系统的显示器件，用来显示工作模式、角度与速度、PID参数等，方便系统调试。Nokia5110液晶模块采用PCD8544作为驱动芯片，通过模拟串行总线协议发送指令和写入数据RAM来控制和显示数据；采用串行接口与主处理器进行数据通信，接口信号线相较于其他液晶模块大幅减少，除去电源、背光电源与地，仅有5根信号线。其电路原理图如图3。

终体积为500 μL的全血温孵体系，包括400 μL新鲜全血，pH=7.4的Tris-HCl缓冲液配制的2μmol· L-1还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）50μL和生理盐水配制的50 μg·mL-1氟尿嘧啶底物50 μL。将全血在37℃预温孵10 min，迅速加入底物溶液混匀，并加入NADPH 50μL，启动反应。温孵60min后，依次加入50 μL含内标5-氯尿嘧啶（0.192 μg·mL-1）的冰甲醇和6%高氯酸溶液200 μL终止反应。此反应体系经4000r·min-1离心10min，上清液过0.22μm滤膜，滤液按文献方法进行分析和计算活力[8-9]。

第三大组中肝功能正常者的外周血DPD活力均数大于异常者（t=5.802，P＜0.05）。说明在汉族人群中肝功能异常会使得DPD活力下降。

2.2 综合数据多元回归分析

能够积极发现生活中生物学科存在的问题，针对生物学的现象进行提问、观察、实验设计与实施方案的结果进行讨论与研究，在开展不同工作的同时，都很愿意和团对合作.

第五大组中怀孕与未怀孕者的外周血DPD活力数据差异存在统计学显著意义（t=3.470，P＜0.05），说明在汉族人群中，怀孕会使得外周血DPD活力增强。

1.3 统计学方法

第四大组中肾功能正常与异常者的外周血DPD活力数据差异存在统计学显著意义 （t=3.720，P＜0.05）。说明在汉族人群中，肾功能异常会导致外周血DPD活力下降。

将年龄（X1）、性别（X2）、肝功能（X3）、肾功能（X4）、是否怀孕（X5）这5个因素分别作为自变量，外周血DPD酶活力作为因变量Y，进行多元线性回归。回归方程为 Y=3.549-0.157X1+0.017X2+0.105X3+ 0.117X4+0.365X5（其中拟合优度R2=0.8121，回归方程显著性检验P=0.037，常量对应t=0.149，P=0.883；X1对应t=-0.902，P=0.358；X2对应t=0.247，P=0.807；X3对应t=1.352，P=0.258；X4对应t=1.198，P=0.314；X5对应t=1.548，P=0.178）。从多元线性回归结果可见：外周血DPD活力受性别影响不显著，与年龄负相关，与肝功能、肾功能、是否怀孕呈正相关。其中外周血DPD酶活力与是否怀孕这一因素的相关性最高。

2）多数海岛柴油机烟气所余热能可以满足生活垃圾垃圾干燥，其技术路线是可行的。干燥后的垃圾热值高，易于焚烧，环境污染小。

3 讨 论

3.1 全血温孵体系评价DPD活力的可行性

文献曾报道过两种DPD活力的评价方法，包括放射免疫法和血浆内源性二氢尿嘧啶与尿嘧啶比值法。放射免疫法价格昂贵，操作费时，不易推广；比值法虽然简便，但在预实验中发现有部分入组血样检测时出现内源性干扰，会影响结果的准确性，所以本实验也不能采用。温孵体系是体外模拟研究药物代谢的最重要的手段，曾被成功用于解决多种药物代谢的研究。氟尿嘧啶类药物活化进入血液后85%首先经过DPD代谢失活，只有极少部分会通过其他途径代谢。因此，通过建立全血温孵体系，考察固定采样时间点的氟尿嘧啶残留率，也可以间接反应DPD活力的强弱。

3.2 全血温孵体系的建立和参数优化

一个完整的全血温孵体系主要包括以下要素：全血、反应底物、启动剂、反应温度、反应时间和反应终止剂。实验中，反应底物为50 μg·mL-1的氟尿嘧啶生理盐水溶液，用pH=7.4的Tris-HCl缓冲液配制的NADPH是启动DPD活力的启动剂。为了模拟体内代谢的温度条件，选择37℃为反应温度。图1显示了不同反应时间对氟尿嘧啶残留率的影响，从图1中可见，反应时间为60min后氟尿嘧啶的残留率趋近稳定，因此，选用60 min为温孵时间。6%高氯酸溶液是一种强酸型的蛋白沉淀剂，可以使血浆中多种酶和蛋白变性失活，因此可以作为反应终止剂[17]。

图1 全血温孵时间与氟尿嘧啶残留率的相关性考察曲线

4 结 论

外周血DPD活力与个体氟尿嘧啶类药物的耐受性密切相关。本文通过460份汉族人血样的测定发现：在汉族人群中，外周血DPD活力与年龄呈负相关，与性别无关，当个体怀孕时，外周血DPD活力增强，当个体肝肾功能异常时，外周血DPD活力降低。实验结果提示：使用氟尿嘧啶类药物时，对不同性别的患者不必考虑剂量的差异性，当患者为老人或肝肾功能异常时，存在减量的必要性，当患者为无法避免用药的孕妇时（基本不推荐孕期使用氟尿嘧啶类药物，除非危及生命的疾病），要注意怀孕导致药物代谢的异常加快。本实验的结果可以为制定符合我国汉族人群个体化使用氟尿嘧啶类药物提供参考。

[1]章 鸿，厉有名，虞朝辉，等.肿瘤患者二氢嘧啶脱氢酶基因多态性与5-氟尿嘧啶毒副反应的关系 [J].中华内科杂志，2007，46（2）：103-6.

[2]蔡 乐，朱 珠.二氢嘧啶脱氢酶及其与5-氟尿嘧啶疗效和毒性的关系 [J].中国药学杂志，2007，42（19）：1441-45.

[3]Ogura K,Ohnuma T,Mnamde Y,et al.Dihydropyrimi-dine dehydrogenase activity in 150 healthy Japanese volunteers and identification of novel mutations[J].Clin Cancer Res,2005,11(14):5104-11.

[4]Morsman JM,Sludden J,Ameyaw MM,et al.Evalua- tion ofdihydropyrimidine dehydrogenase activity in South-west Asian,Kenyan and Ghanaian populations[J].Br J Clin Pharmacol,2000,50(3):269-72.

[5]何笑荣，卢 炜，邹 定，等.万古霉素群体药物动力学模型的研究进展 [J].中国药学杂志，2013，48（24）：2075-80.

[6]中华外科杂志编辑室.门静脉高压症肝功能分级试行标准[J].中华外科杂志，1983，21：433.

[7]Hogg RJ,Furth S,Lemley KV,et al.National Kidney Foundation's Kidney Disease Outcomes Quality Initiative clinical practice guidelines for chronic kidney disease in children and adolescents:evaluation,classification, and stratification[J].Pediatrics,2003,111(6):1416-21.

[8]袁文博，丁永娟，徐静静.直接蛋白沉淀-超高效液相色谱法测定氟尿嘧啶血药浓度 [J].中国药科大学学报，2015，46（1）：81-3.

[9]陈清轩，Leonard O.Rosik，Frederick Sweet.高效液相色谱法测定酶的活性[J].色谱，1992，10（2）：101-3.

[10]李洪亮，乔 静，曹 玫，等.6种不同沉淀试剂对万古霉素、去甲万古霉素血药浓度测定影响的比较[J].山西医药杂志，2009，38（12）：1154-5.

[11]Gardiner SJ,Begg EJ,Robinson BA.The effect of di-hydropyrimidine dehydrogenase deficiency on outcomes with fluorouracil[J].Adverse Drug React Toxicol Rev, 2002,21(122):1-16.

Factors Affecting the Activity of Dihydropyrimidine Dehydrogenase in the Chinese Han Population's Peripheral Blood*

DIN