宫颈脱落细胞HPVL1蛋白及HPV DNA 载量对宫颈病变的预测价值

李美琴，李春宏，裴圣林，黄文成，李佩章 黄玲莎△

（1.广西医科大学附属肿瘤医院检验科，南宁530021；2.广西医科大学公共卫生学院，南宁530021）

宫颈癌是常见的女性恶性肿瘤，严重威胁女性患者的身心健康。近年来宫颈癌发生率呈明显上升趋势，发病年龄也呈现明显的年轻化倾向。大量流行病学资料证实，人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）与宫颈癌的发生紧密相关，HPVL1蛋白是HPV 感染细胞和重要靶点，可作为机体免疫应答攻击HPV 病毒的靶点，宫颈鳞状上皮细胞HPVL1蛋白表达降低反映了宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）细胞免疫脱逃，机体无法彻底清除部分CIN 细胞，导致宫颈浸润性癌的发生［1］。HPV DNA 载量与宫颈病变程度是否具有相关性，是否可以初步作为宫颈病变的评估依据尚未具有明确的定论［2］。相关研究发现：不同组织病理学类型的宫颈病变与病毒载量具有明显的相关性，其HPV DNA 载量越高，宫颈病变程度越严重［3］。本研究通过探讨宫颈脱落细胞HPVL1蛋白表达和HPV DNA 载量在宫颈病变中的评估价值，旨在为宫颈癌的筛查提供指导。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年1月至2014年6月在本院就诊的362例宫颈病变患者作为研究对象，纳入标准：有性生活，无子宫切除术和宫颈手术史，无盆腔放射治疗史，无妊娠，年龄24～70岁，平均（44.65±6.57）岁，根据宫颈组织病理学（由3名组织病理学医师统一诊断）结果将患者分为慢性宫颈炎（n＝190），宫颈上皮内瘤变Ⅰ期（CINⅠ，n＝45），宫颈上皮内瘤变Ⅱ期（CINⅡ，n＝43），宫颈上皮内瘤变Ⅲ期（CINⅢ，n＝46）和宫颈癌（n＝38），不同宫颈组织病变患者年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。根据宫颈液基细胞学检查结果将脱落细胞分为未见异常细胞（NILM，n＝122），未明确性非典型鳞状上皮细胞（ASCUS，n＝75），可疑非典型鳞状上皮病变细胞（ASCH，n＝52），低度鳞状上皮内病变（LSIL，n＝61）和高度鳞状上皮内病变（HSIL，n＝52），不同宫颈液基细胞学检查结果的患者年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 仪器与试剂 第二代杂交捕获试验系统（Digene Company，美国），HPVL1、HPV DNA试剂盒（Eddie Vance Company，美国）和液基细胞学（Cytcy，美国）等。

1.3 检测方法 宫颈刷采集宫颈脱落细胞，采用免疫化学方法检测HPVL1 蛋白，第二代杂交捕获试验（Hybrid Capture 2，HC2）检测HPV DNA 载量。

1.3.1 标本采集 全部患者采用宫颈刷插入宫颈口旋转5周，刷头放入含Cytorich 保存液的小瓶中涮洗，采集宫颈表面和宫颈管处脱落上皮细胞，取出刷头，盖好，作标记，送检。HPV-DNA 采样：宫颈刷插入宫颈口逆时针旋转3 周，停留10s，采样刷放入储存瓶中，盖好，冰冻箱储存，3周内检测。

1.3.2 HPVL1蛋白和HPV DNA 载量测定 宫颈脱落细胞采用液基细胞学技术测定，统一由固定细胞学医师阅片，HPVL1蛋白严格按照操作指南测定，见红染细胞核则为HPVL1蛋白阳性。HPV DNA 载量测定利用对抗体捕获信号放大和化学发光信号检测，样本产生光信号经微孔板判读仪器测量，获得相对光单位，与设置的标准阳性对照比值作为HPV DNA 载量的结果，＜1.00为阴性，≥1.00为阳性，比值越高，HPV DNA 载量越高，其中1.00～10.00为轻度HPV DNA 载量，10.00～100.00为中度HPV DNA 载量，≥100.00为重度HPV DNA 载量。

1.4 统计学处理 数据采用SPSS18.0统计软件进行分析，计数资料用百分率表示，采用χ2检验，P＜0.05提示差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同宫颈组织病理学HPVL1蛋白和HPV DNA 载量的比较 130 例宫颈脱落细胞HPVL1 蛋白阳性，阳性率为35.91%（130／362），其 中HPVL1 蛋 白 阳 性 率 由 大 至 小 分 别为：慢性宫颈炎＞CINⅠ期＞CINⅡ期＞CINⅢ期＞宫颈癌，不同宫颈病变组织病理学类型比较差异具有统计学意义（P＜0.05），272例HPV DNA 阳性，阳性率为75.14%，其中宫颈癌HPV DNA 阳性率为92.11（35／38），CINⅢ期HPV DNA 阳性率为89.13%（41／46），CINⅡ期HPV DNA 阳性率为88.37%（38／43），CINⅠ期HPV DNA 阳性率为75.56%（34／45），慢性宫颈炎HPV DNA 阳性率为65.26%（124／190），CINⅡ分期以上HPV DNA 阳性率明显增高，差异具有统计学意义（P＜0.05），其中低度HPV DNA 载量以慢性宫颈炎最多，高度HPV DNA 载量以宫颈癌最多，明显高于其他宫颈组织病理学类型，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。

2.2 不同宫颈细胞学HPVL1蛋白和HPV DNA 载量的比较 HPVL1 蛋白阳性率由大至小分别为：NILM＞ASCUS＞ASCH＞LSIL＞HSIL，不同宫颈细胞学类型比较差异具有统计学意义（P＜0.05），HSIL HPV DNA 阳性率为94.23%（49／52），LSIL HPV DNA 阳性率为85.25%（52／61），ASCH HPV DNA 阳性率为76.92%（40／52），ASCUS HPV DNA 阳性率为74.67%（56／75），NILM HPV DNA 阳 性 率 为64.75%（79／122），不同宫颈细胞学类型比较差异具有统计学意义（P＜0.05），其中低度HPV DNA 载量以NILM 最多，高度HPV DNA 载量以HSIL 最多，明显高于其他宫颈细胞学类型，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表1 不同宫颈组织病理学HPVL1蛋白和HPV DNA 载量的比较［n（%）］

表2 不同宫颈细胞学HPVL1蛋白和HPV DNA 载量的比较［n（%）］

3 讨 论

HPV 感染是导致宫颈细胞不典型增生和CIN 形成的病因之一，CIN 病情发展，HPV 未清除是导致宫颈浸润性癌的重要原因［4］。宫颈癌前病变筛查，寻找有效的宫颈癌预测指标在宫颈癌早期干预，降低宫颈癌发生率和病死率中具有重要的价值。HPVL1蛋白是主要的特异性HPV 抗原，其阳性表达证实HPV 病毒复制，HPV 未与宿主DNA 结合，宿主细胞分化正常［5］。HPVL1蛋白与T 淋巴细胞形成免疫复合物，参与细胞免疫功能和抗体形成，彻底消除HPV 病毒，宫颈病变具有明显的自愈趋势［6］。而HPVL1蛋白阴性表达则在一定程度上提示HPV 病毒与宿主DNA 结合，细胞分化异常，机体免疫功能减弱，宫颈病变加重。因此，HPV 病毒是宫颈病变的高危因素，HPVL1蛋白是宫颈病变的保护因素［7］。HPV DNA 病毒载量越高，HPVL1蛋白阴性表达，宫颈癌病变的发生率显著增高；而HPV DNA 病毒载量越低，HPVL1蛋白阳性表达，宫颈癌病变的发生率显著降低。大量研究证实HPVL1蛋白、HPV DNA 病毒载量与宫颈病变具有明显相关性［8］，但关于二者在宫颈病变程度中的预测作用研究较少。

本研究结果显示，在不同组织病理学类型宫颈脱落细胞HPVL1蛋白的阳性率比较发现，慢性宫颈炎HPVL1蛋白的阳性率最高，而宫颈癌HPVL1蛋白的阳性率最低，提示了宫颈脱落细胞HPVL1蛋白阳性表达随着宫颈病变加重而显著降低，其与宫颈病变程度呈明显负相关［9］。同时，在不同类型宫颈脱落细胞中发现，NILM HPVL1 蛋白的阳性率最高，HSIL最低，证实了HPVL1蛋白的阳性表达随着宫颈病变程度加重而降低。另一方面，低度HPV DNA 载量以慢性宫颈炎或NILM 最多，高度HPV DNA 载量以宫颈癌或HSIL 最多。本研究结果提示了宫颈病变程度越轻，HPV DNA 载量越低，宫颈病变程度越严重，HPV DNA 载量越高，HPV DNA 载量与宫颈病变呈正相关［10］。CINⅠ期随着病情的发展可逐渐进展至浸润癌，但大部分CINⅠ期可逐渐恢复至正常宫颈上皮细胞，宫颈病变的改变与HPVL1蛋白和HPV DNA 载量显著相关，检测二者阳性率有助于预测宫颈癌发生风险［11］。相关文献显示，HPV 病毒是导致宫颈病变的主要原因之一［12］。作为特异性抗原，HPVL1 蛋白具有清除HPV 病毒的作用，HPVL1蛋白阳性表达时，HPV 病毒清除率越高，HPV DNA载量显著降低，宫颈病变程度越轻［13］。因此，在一定程度上，HPVL1蛋白与HPV DNA 载量具有明显的负相关。其中，宫颈病变程度最轻的慢性宫颈炎和NILM 患者HPVL1蛋白阳性表达率最高，HPV DNA 载量处于低度HPV DNA 载量，反之，宫颈病变最重的宫颈癌和HSIL 患者阴性表达率最高，HPV DNA 载量处于高度HPV DNA 载量，与相关研究结果具有一致性［14-15］。

综上所述，HPVL1蛋白在宫颈脱落细胞的表达随着子宫颈病变程度加重而下调，HPV DNA 载量随子宫颈病变程度加重而上调，二者检测在子宫颈病变程度的预测中具有重要的价值。

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