两种胚胎移植液对体外受精-胚胎移植妊娠结局的影响研究＊

罗 嘉，宋英伟，徐艳霞，李学荣，胡 斐

（东莞康华医院生殖医学中心，广东东莞523080）

随着社会的发展、人们工作压力增大、环境污染严重和人工流产等影响，不孕不育症发病率逐年上升。据WHO 估计目前发达国家中育龄妇女不孕率约为9.00%，而我国育龄妇女的不孕率则高达17.13%［1］。体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）是目前治疗各种原因引起的原发或继发不孕不育的有效方法。随着生命科学的不断进步，IVF-ET 周期妊娠率已由最初的10.00%提高到了40.00%左右，但是仍有不少不孕妇女需要多次行IVF-ET，加重了患者家庭的经济负担和精神压力。有文献报道［2-3］，EmbryoGlue（瑞典Vitrolife公司产品）移植液可以提高IVF-ET 中胚胎种植率和临床妊娠率。本研究对行IVF或卵胞浆内单精子显微注射技术（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）治疗的213例患者新鲜周期进行回顾性总结分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 对2013年1月至2013年12月在东莞康华医院生殖医学中心接受IVF-ET 或ICSI的213例患者的临床资料进行回顾性分析。试验组112例，使用EmbryoGlue移植液；对照组101例，使用G-2胚胎移植液（瑞典Vitrolife公司产品）。纳入标准［4］：女方年龄小于或等于40岁，既往失败周期数小于或等于3次，并除外既往失败周期为无受精和无胚胎移植周期。试验组与对照组一般情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 控制性超排卵 213例患者均行常规的长方案的控制性超排卵治疗，从前一周期的黄体中期开始（月经周期第21天）使用促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a），月经第3天开始注射重组人促卵泡激素（Gonal-F，Serono公司），同时连续监测查血黄体生成素（LH）、雌二醇（E2），使用Gonal-F后第5天起在B超下连续监测双侧卵巢被刺激发育的卵泡数及子宫内膜。当至少3个卵泡直径大于或等于18mm 时，停用GnRH-a和Gonal-F。给人绒毛膜促性腺激素（HCG）250μg（Profasi，Semno）肌内注射。36h后通过阴道B超引导穿刺取卵。

1.2.2 体外受精培养移植 第1次移植周期且35岁以下患者最多移植2个胚胎，治疗在2个治疗周期者及以上或年龄在35岁以上患者最多移植3个胚胎。将卵丘-放射冠和卵母细胞复合物培养4～6h后行IVF或ICSI。受精后密切观察卵子受精情况，在受精16～20h后观察到原核及第二极体出现时为正常受精。受精的第2天起观察胚胎的发育情况，并于第3天2～3个形态正常、发育良好的胚胎进行移植。胚胎评级参照Edwards RG 标准如下，Ⅰ级胚胎：卵裂球大小均匀，形状规则，透明带完整，胞质均匀、清晰，无颗粒现象，碎片少于5%；Ⅱ级胚胎：细胞大小略不均，形状略不规则，胞质碎片占5%～20%；Ⅲ级胚胎：细胞大小明显不均，可有明显的不规则形状，胞质内可有颗粒现象，碎片占21%～49%；Ⅳ级胚胎：细胞大小严重不均，胞质可有严重脱颗粒现象，碎片占50%以上。Ⅰ、Ⅱ级胚胎为优质胚胎；Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级胚胎为可利用胚胎。试验组：取卵后第2天，将盛有1mL EmbryoGlue移植液的双凹皿放在37 ℃、6% CO2培养箱内平衡24h；取卵后第3 天将2～3个挑选好的待移植胚胎放入EmbryoGlue移植液中平衡10min。在1次性1mL注射器上接入移植导管，在体视显微镜下依次吸入一段空气、少量EmbryoGlue移植液后再小心抽吸一段含有胚胎的移植液，尽量将胚胎放于正中位置，封管。将含胚胎的移植液注入子宫，并于显微镜下未发现胚胎遗漏后抽出导管。移植后采用HCG／黄体酮支持黄体治疗。移植后第14天血酶免HCG 试验判断生化妊娠，第28天行阴道B超观察是否有孕囊和心管搏动判断临床妊娠及胚胎种植数。对照组采用G-2作为移植液，操作同试验组。

1.2.3 评价标准 观察和统计两组移植相关参数，统计受精率、卵裂率、优质胚胎率、胚胎种植率及临床妊娠率、早期流产率、异位和多胎妊娠率。

1.3 统计学处理 采用SPSS16.0统计软件进行分析，计量资料以±s表示，使用t检验，计数资料以率表示，采用χ2检验，检验标准α＝0.05，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

两组移植周期数、取卵数、移植胚胎数、每周期移植胚胎数、受精、卵裂和优质胚胎组间比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。试验组种植率、临床妊娠率、多胎妊娠率明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。试验组异位妊娠率低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 试验组与对照组移植相关参数和妊娠结局比较

3 讨 论

世界首例试管婴儿诞生于1978年，自此IVF-ET 技术迅速发展，成为了治疗不孕不育症的重要手段。近年来，IVF-ET发展迅猛，出现了控制性超促排卵（controlled ovarian hyperstimulation，cOH）方案、辅助孵化（assisted hatching，AH）、ICSI、胚胎植入前遗传学诊断（preimplnatation genetic diagnosis，PGD）显微操作等技术，这些技术大大提高了IVF-ET 的成功率［5-6］。IVF-ET 作为一项系统工程，其成功受制于多方面的因素。患者不孕不育的病因、精子与卵子的质量、孕妇的生育能力、显微操作等都会影响种植效果［7］。

透明质酸广泛分布于精浆、宫颈黏液、卵泡液中。在胚胎种植期时，透明质酸在输卵管和子宫内的水平大大增加，因此学者认为其对胚胎种植期起到了促进作用［8］。研究发现［9-11］，透明质酸可以使水进入细胞间隙并同蛋白质结合形成凝胶，提高细胞之间以及细胞与间质之间的粘连。同时其还参与免疫系统的调节，透明质酸和其降解物可以增强免疫力，保护胚胎不受病原体感染，还能在免疫排斥中发挥调节作用，保护胚胎在种植过程中免受母体的免疫排斥［12］。

EmbryoGlue移植液与人体输卵管和子宫内环境十分接近，其主要成分为透明质酸（0.5mg／mL）、重组人清蛋白（2.5 mg／mL）和庆大霉素，以及胚胎种植过程中所必需的营养成分。本研究发现，在移植参数无明显差异的情况下，使用富含透明质酸的EmbryoGlue移植液可以提高胚胎种植率、临床妊娠率、多胎妊娠率，降低异位妊娠发生率，而对受精、卵裂无显著影响。说明EmbryoGlue移植液可以提高IVF-ET 的移植成功率，这与张建瑞等［13］研究结果一致。EmbryoGlue移植液改善临床妊娠结局的原因可能与EmbryoGlue移植液的透明质酸浓度比G2培养液明显增加有关。透明质酸是在卵泡、输卵管和子宫腔液体中存在的主要黏多糖物质。研究证实，透明质酸可以增加细胞之间及细胞与基质之间的黏附［14］，促进新生血管形成［15］等，可能进而能够支持植入前胚胎发育、促进胚胎着床。异位妊娠是IVF-ET 的主要失败因素，一般在2.10%～9.40%，而自然异位妊娠约为2.00%［16］。除了患者输卵管因素和异位妊娠史之外，移植管放入官腔的深度、移植管内的液体量、移植时注入的速度、植入胚胎数目、胚胎在宫腔内游走、胚胎与子宫内膜发育的同步性等有关。EmbryoGlue移植液增加胚胎和子宫的黏附性，限制其在宫腔内游走，保证了胚胎着床，从而降低异位妊娠率［17］。

多胎妊娠属高危妊娠，妊娠期、分娩期并发症多，围生儿病死率、新生儿病死率高，还会带来糖尿病等风险。本研究发现，EmbryoGlue移植液会增加多胎妊娠率，这与其能提高胚胎种植率有关。因此，在移植时减少移植胚胎数甚至实施单胎移植是减少多胎妊娠的有效手段。

综上所述，在IVF-ET 采用EmbryoGlue移植液能有效提高移植的妊娠率和种植率，减少异位妊娠率，但是同时也会提高了多胎妊娠率，因此在临床上需要减少IVF-ET 中移植胚胎的数量。

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