辅助生殖技术后流产胚胎核型与超声结果分析

宋雅娴　何国平　刘　文　周桂香　胡美红

作者单位： 230001　合肥　安徽医科大学附属省立医院生殖医学中心

辅助生殖技术后流产胚胎核型与超声结果分析

宋雅娴何国平刘文周桂香胡美红

作者单位： 230001合肥安徽医科大学附属省立医院生殖医学中心

[摘要]目的探讨辅助生殖技术(ART)治疗后妊娠早期影响胚胎发育的因素。 方法以85例不孕症患者早孕期流产胚胎为研究对象，分析绒毛染色体以及异常核型、不同受孕方式和年龄对超声结果的影响。 结果85例流产胚胎中异常核型占50.6%，全部为染色体数目异常；有胚芽的流产胚胎异常核型率(63.3%)显著高于无胚芽组(33.3%)，差异有统计学意义(P=0.006)；有胚芽的胚胎由体外受精联合胚胎移植技术(IVF)受精的比例(44.9%)较无胚芽组低(80.6%)，差异有统计学意义(P=0.001)；流产患者的平均年龄在有胚芽和无胚芽组间分别为(33.4±5.2)岁和(33.0±4.4)岁，但差异无统计学意义(P=0.713)。 结论经ART妊娠后胚胎自然流产的异常核型主要是染色体数目异常，出现胚芽的胚胎中染色体异常率较高，IVF受精的胚胎空孕囊的比例较高，年龄对胚胎组织结构的发育无显著影响。

[关键词]不孕症；自然流产；辅助生殖技术；核型；超声

近年来，随着辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)的进步，不孕症患者的妊娠率得到了较大提高，然而自然流产仍是较为恶劣的妊娠结局，发生率为10%～20%，其中多数为孕早期流产[1,2]。孕早期是胚胎发育的重要阶段，胚胎的许多组织结构都在该阶段内开始形成，如果胚胎形态出现异常可能会引起流产[3]。关于流产胚胎的报道有很多，然而对不同形态和不同发育阶段流产胚胎的研究并不多，致使胚胎在不同阶段停止发育的原因仍不明确。在以往的报道中，孕早期流产的相关因素包括染色体异常、年龄、受孕方式等[1,4]，研究这些因素与胚胎停止发育时不同形态的关系有助于了解不同发育阶段胚胎的流产原因。本研究将通过检测经ART治疗后妊娠早期流产胚胎的B超表现，分析核型、受精方式和患者年龄等对胚胎发育的影响。

1资料与方法

1.1一般资料收集本院2009～2013年经ART治疗移植新鲜胚胎妊娠后自然流产并进行绒毛染色体检测的胚胎标本为研究对象。排除标准：①夫妻双方有染色体异常，包括平衡异位、臂间倒位、染色体多态性等；②多胎妊娠；③感染、解剖；④有接触致染色体畸变物质可能性等因素的患者。所有患者均从移植后1个月开始B超监测胚胎发育, 记录孕囊是否有胚芽以及胎心搏动，未见胚芽或胎心则1周后复查，如仍未见胚芽或胎心搏动，经门诊检查诊断为胚胎停止发育。根据孕囊中是否出现胚芽将胚胎分为无胚芽组和有胚芽组。85例胚胎中有51例是由体外受精联合胚胎移植技术(IVF)受精，34例由卵泡浆内单精子注射技术(ICSI)受精。

1.2标本处理行清宫术时,无菌条件下采集绒毛，用生理盐水浸泡，立刻送至实验室处理。在无菌操作台内剪取10～15 mg绒毛组织,在生理盐水中漂洗去除明显血块后剪碎，加入绒毛处理试剂(杭州博圣)，37℃消化10～20 min，直至组织块基本消失，用生理盐水漂洗2次后接种于培养皿中，加入培养基(AmnioMax-Ⅱ,Gibco)后置于37℃、5% CO2恒温箱培养，当细胞长至指数生长期，即可收获制片。收获时加入0.08 μg/mL秋水仙素处理2 h，贴壁细胞使用0.25%胰酶消化后离心去除培养基和消化液，向沉淀中加入0.075 MKCl，混匀后低渗10～15 min，甲醇：冰醋酸3 ∶1的固定液固定3次之后按常规方法滴片制备中期相，G显带后进行核型分析。

1.3核型分析每例标本至少检查2张玻片，共计数30个分裂相，分析3个核型，并按照《人类细胞遗传学命名的国际体制》ISCN 2005命名。

2结果

2.1流产绒毛染色体结果本研究共分析85例经ART治疗移植新鲜胚胎妊娠后流产的标本，绒毛染色体分析的结果见表1，正常核型42例，占49.4%，异常核型43例，占50.6%。异常核型全部为染色体数目异常，主要是非整倍体，共39例 (90.7%)，包括仅涉及一条染色体的非整倍体(2～8、13、15～18、21、22号染色体三体以及45,X0核型)，以及同时两条染色体异常的非整倍体(46,X0,+19、48,XX,+9,+21、48,XXX,+13)，多倍体共4例(9.3%)。

2.2不同核型胚胎的B超结果根据B超结果将停止发育的胚胎分为无胚芽和有胚芽两组，有胚芽组异常核型率为63.3%，显著高于无胚芽组(33.3%)，且差异有统计学意义(P=0.006)。详见表2。

2.3不同方式受精后流产胚胎的B超结果51例IVF受精胚胎及34例ICSI受精胚胎无胚芽的胚胎多数为IVF受精29(80.6%)，显著高于有胚芽组中IVF受精胚胎的比例22(44.9%)，且差异有统计学意义(P=0.001)。详见表3。

表1　流产绒毛染色体分析结果

表2　不同核型胚胎的B超结果(n=85)

表3　不同方式受精流产胚胎的B超结果(n=85)

2.4流产患者的年龄与流产胚胎B超结果85例不同B超结果的流产胚胎中，无胚芽组36例，平均年龄(33.0±4.4)岁；有胚芽组49例，平均年龄(33.4±5.2)岁，两组患者年龄差异无统计学意义(P=0.713)。

3讨论

孕早期是自然流产的高发阶段，而染色体异常是该时期流产的主要原因。绒毛滋养层细胞与胚胎其他细胞有着相同的遗传性状，并且具有相对旺盛的分裂能力，易于体外培养，是研究胚胎核型的理想材料。本研究共分析了85例ART治疗后自然流产胚胎的绒毛染色体，其中染色体异常胚胎43例，占50.6%，非整倍体核型以常染色体三体为主，从A组到G组的染色体均有三体核型被发现，16三体最为常见(共8例，占异常核型的20.51%)，此外，还有45,X0以及多倍体核型，与其他报道相同[1,5]。

早孕的12周是胚胎发育的关键时期，胚芽、胎心均在此阶段间出现，缺乏这些特征的胚胎可认为已停止发育。本研究中经ART妊娠后的自然流产胚胎B超显示的主要形态包括无胚芽和有胚芽无胎心两类。为了解异常核型对胚胎发育的影响，我们比较了不同B超表现的停育胚胎核型，无胚芽的空孕囊异常核型率33.3%明显低于出现胚芽的胚胎63.3%(P=0.006)，提示出现胚芽的胚胎停止发育多数由于染色体异常造成，而未出现胚芽的胚胎流产更可能由其他原因造成。这一结果与其他对自然妊娠流产胚胎研究结果的报道不同。在自然妊娠患者中，出现胚芽和未出现胚芽的流产胚胎染色体异常率并未发现明显区别[5,6]。我们推测自然妊娠和ART妊娠患者之间该结果的差异可能由于多数ART妊娠患者受子宫内膜容受性、炎症、免疫等因素影响，宫腔环境并不利于胚胎发育，造成许多染色体正常的胚胎在胚芽出现前就停止发育，因而流产胚胎染色体异常率降低。

本资料分析了不同受精方式下流产胚胎的B超表现，结果显示，无胚芽的胚胎多数为IVF受精(80.6%)，显著高于有胚芽组中IVF受精胚胎的比例(44.9%，P=0.001)。由于IVF患者多数为女方不孕症， ICSI患者中多数由于男方不育但女方健康状况较好，推测可能是女方不孕症对胚胎早期发育中胚芽的出现有影响。

年龄是影响胚胎质量进而造成流产的重要因素，随年龄增加不断下降的卵子质量是高龄孕妇胚胎染色体异常率升高的主要原因[2，8]。我们比较了两组胚胎停止发育患者的年龄，无胚芽组患者36例，平均年龄(33.0±4.4)岁；有胚芽组49例，平均年龄(33.4±5.2) 岁，差异无统计学意义(P=0.713)，说明患者年龄并不影响胚胎各组织结构发育。

本研究目前国内报道较少。由于①不孕症患者妊娠率本身较自然怀孕低；②为排除胚胎冷冻的因素对胚胎发育的影响，本研究选择鲜胚移植后妊娠流产的胚胎进行分析；③排除了因夫妻双方染色体异常或多态性等对胚胎核型影响有争议的因素等原因，本文的样本量较少，故需要进一步积累病例进行更深入的分析。

总之，本研究结果表明染色体数目异常是经ART妊娠后胚胎的主要染色体异常；经ART妊娠后的流产胚胎中有胚芽的胚胎染色体异常率较未出现胚芽的胚胎高；年龄对胚胎组织结构的发育无显著影响。

参考文献

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(2014-09-22 收稿2015-01-15 修回)

Analysis of karyotype and ultrasound findings in miscarriage embryo following assisted reproductive technology

SongYaxian,HeGuoping,LiuWen,etal

ReproductiveMedicineCenter，theAffiliatedProvincialHospitalofAnhuiMedicalUniversityHefei230001,China

[Abstract]ObjectiveTo analyze the factors affecting embryo development in first trimester following assisted reproductive technology (ART). MethodsSpontaneous abortion embryos from 85 conceptions following ART were analyzed by karyotype, ultrasound findings, the mode of conception and age. ResultsIn 85 abortion embryos, abnormal karyotype consisted 50.6%, all of which were numerical disorders; the percentage of abnormal karyotype in embryos with embryonic pole was significantly higher than that without embryonic pole (63.3%vs33.3%,P=0.006); most embryos with empty sac was fertilized by IVF (80.6%), which was significantly more than that in embryos with embryonic pole (44.9%,P=0.001); between infertile patients with two different embryo morphology, no age effect was found (P=0.929). ConclusionMost abnormal karyotype in miscarriage following ART is numerical disorder and contributes more in abortion embryos with embryonic pole. Most embryos with empty sac come from IVF. No age effect is found in different ultrasound findings of abortion embryo.

[Key words]Infertility; Spontaneous abortion; Assisted reproductive technology; Karyotype; Ultrasound

doi:10.3969/j.issn.1000-0399.2015.05.016

通信作者：何国平，13865943124@126.com