4种犬棘球绦虫检查方法对比观察

胡广卫，蔡金山，马睿麟，赵全邦，马占全，李连芳，李　静（青海省动物疫病预防控制中心，青海西宁810001）中图分类号：S852.732　　文献标志码：B　　文章编号：0529- 6005（2015）10- 0043- 02

4种犬棘球绦虫检查方法对比观察

胡广卫，蔡金山，马睿麟，赵全邦，马占全，李连芳，李静
（青海省动物疫病预防控制中心，青海西宁810001）
中图分类号：S852.73+2文献标志码：B文章编号：0529- 6005（2015）10- 0043- 02

棘球蚴病（Echinococcosis）是由棘球属（Echino⁃coccus）绦虫的中绦期幼虫—棘球蚴寄生于动物和人的内脏所致的一类严重危害人体健康和阻碍畜牧业发展的人畜共患寄生虫病，又称包虫病（hydatid disease）。本病呈世界性分布，主要流行于欧洲、非洲北部、亚洲、南美洲和大洋洲，在我国主要见于新疆、宁夏、青海、西藏、甘肃、四川阿坝等放牧地区。棘球蚴病的终末宿主以犬科动物为主，棘球绦虫感染的诊断主要有粪便虫卵检查法、剖检法、氢溴酸槟榔碱泻下法、粪抗原ELI⁃SA法、粪便虫体DNA检查法[1]和血清抗体ELISA法等。几种检查方法中，目前使用较多的仍然为世界卫生组织（WHO）和世界动物卫生组织（OIE）推荐的作为检测标准的方法—常规的氢溴酸槟榔碱泻下法和剖检法，剖检法最为直观，也最为准确。除剖检法之外的另外几种方法在临床上也应用较多，各有优劣，但很少有人同时将几种方法应用同样的试验动物在一起进行比较。本试验以剖检法为标准，比较了粪便虫卵检查法、粪抗原ELISA法和氢溴酸槟榔碱泻下法的阳性检出率，为今后的犬棘球绦虫检测工作提供依据。

1　材料与方法

1.1材料氢溴酸槟榔碱，购自内蒙古赤峰兽药厂；蔗糖，犬粪细粒棘球绦虫抗原ELISA检测试剂盒，购自珠海海泰生物制剂有限公司；显微镜等。

1.2试验动物28条犬，来自于青海省泽库、贵南、互助、刚察、同德、海晏和兴海县，为牧羊犬和流浪犬。

1.3方法试验犬空腹后先进行氢溴酸槟榔碱泻下法进行检查，同时收集犬排出的粪便，然后进行剖检法检查。收集的粪便标记清楚后-20℃保存，先后在实验室进行粪便虫卵检查和粪抗原ELISA法检测。

进行所有检查时要求操作者以及助手穿防护服，戴口罩。操作过程中要避免被犬咬伤或抓伤，试验完毕后的废弃物集中进行无害化处理。

1.3.1氢溴酸槟榔碱泻下法选择比较安全的场地，将试验犬拴牢。给空腹12 h的犬灌服氢溴酸槟榔碱，40 min～60 min后，在被检犬排出大量正常粪便后，会排出标准粪便（无内容物的黏性液体），通过检查标准粪样中有无棘球绦虫而进行棘球绦虫病的诊断。

粪便收集完后，将犬继续固定12 h，排出的粪便深埋。所有地面上粪便清除干净，扔入废坑，撒入石灰，并用土埋实，以免小孩或犬将坑内废弃物弄出造成污染。凡被犬粪接触过的地面、铁锹、铁钎、铁链等一律用喷灯焚烧。

1.3.2粪便虫卵检查法饱和蔗糖漂浮法：称取0.5 g采集于试验犬的粪便，放入15 mL离心管中，加少量饱和蔗糖液，充分搅拌后，再加饱和蔗糖液至略隆起于试管口，静置30 min，镜检虫卵计数。

1.3.3剖检法将试验犬解剖，从剖检犬内脏中取出小肠，肠内容物置于盆中用生理盐水漂洗沉淀，弃去上清数次后，用平皿逐份仔细检查肠内容物。肠管用剪刀剪开后，用生理盐水轻轻冲洗，然后肉眼或者放大镜观察肠壁内侧有无棘球绦虫并计数。

1.3.4粪抗原ELISA法应用犬粪细粒棘球绦虫抗原ELISA检测试剂盒，对采集于试验犬的粪便进行犬棘球绦虫病的检测。

2　结果

试验结果发现，剖检法的棘球绦虫检出率为64.29%；而泻下法为17.86%，粪抗原ELISA法为14.29%，粪便虫卵检查法最低，为3.57%，见表1。

表1　四种检查方法棘球绦虫阳性检出率对比

3　结论

从结果可以看出，作为评价其他检测方法的“金标准”[2]，剖检法的阳性检出率比其他几种方法高出很多，但是实际操作起来比较麻烦，可行性不大。相比之下，氢溴酸槟榔碱泻下法和粪抗原ELISA法的检出率要低很多，这可能与泻下法药物和ELISA检测试剂有一定关系，但两者的检出率比较相近，而且比粪便虫卵检查法要高，这与焦伟[3]等的研究比较相近。El-Shehabi F S[4]等在试验中发现，犬粪抗原ELISA阳性率为剖检法的61.5%，而本试验比较低，为22.2%（4/18）。这可能是犬体内棘球绦虫数量较少的因素，因为El-Shehabi F S等发现当犬体内棘球绦虫在100条以上时ELISA的敏感性较高。剖检法能比较直观的观察出犬有无棘球绦虫感染，但现实中意义不大，仅可作为某一地区流行病学调查的一个手段。氢溴酸槟榔碱泻下法是仅次于剖检法的检查方法，但有相当一部分犬只对槟榔碱不敏感，另外存在工作难度大、耗时费力、工作人员易感染虫卵的潜在危险和对周围生活环境污染的危险。所以，与氢溴酸槟榔碱泻下法检出率相近的粪抗原ELISA法应用起来就比较方便。黄燕[5]等在研究中指出，粪抗原ELISA法与剖检结果相比，敏感性为92.3% ,特异性为80%，粪抗原在感染后的第2～3周可检出，在早期诊断野生犬科动物自然感染棘球绦虫病中也具有很高的应用价值。粪便虫卵检查法阳性检出率不高，在实际应用中意义不大。

几种检查方法对犬棘球绦虫的阳性检出率差别较大，而且操作的可行性也不同，所以在犬棘球绦虫病的诊断中要多种检查方法互补，能有效的弥补不同检查方法的缺陷，尽可能使检查结果科学化。

参考文献：

[1]张亚楼，温浩，马旭东，等.家犬粪便中的细粒棘球绦虫DNA-PCR检测方法的建立[J] .中国病原生物学杂志，2006，1（5）：363-365.

[2] Eckert J . Predictive values and quality control of techniques for the diagnosis of Echinococcus multilocularis in definitive hosts [J].Acta Tropica，2003，85（2）：157-163.

[3]焦伟，柴君杰，伊斯拉音，等.现场应用粪抗原检测法诊断犬细粒棘球绦虫感染的效果评价[J].中国寄生虫病防治杂志，2003，3（16）：170-171.

[4] El-Shehabi F S，Kamhawi S A，Schantz P M，等.犬细粒棘球绦虫的诊断：北诺尔当犬及红狐的粪抗原检测与尸检法的对比〔英〕[J].国外医学寄生虫病分册，2007，7（2）：83-90.

[5]黄燕，David H D，Christine A J，等.犬粪便棘球绦虫抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法建立与应用[J].预防医学情报杂志，2008，24（6）：407-411.

作者简介：胡广卫（1982-），男，兽医师，硕士，从事动物防疫方向，E-mail：qhhgw@sina.com

收稿日期：2014-03-30