系统性红斑狼疮380例外周血淋巴细胞亚群变化及临床意义

杨宇峰，朱　剑，茹晋丽，车国柱，靳志勇，孙慧萍，靳雪琴，陈伟华，李小峰



系统性红斑狼疮380例外周血淋巴细胞亚群变化及临床意义

杨宇峰，朱剑，茹晋丽*，车国柱，靳志勇，孙慧萍，靳雪琴，陈伟华，李小峰

*共同第一作者

[摘要]目的探讨T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞及NK细胞的变化在系统性红斑狼疮(SLE)发生和发展中的作用。方法选取解放军264医院和山西医科大学第二医院诊治的SLE 380例及健康体检者58例，SLE患者分为稳定期组157例、轻度活动期组79例、中度活动期组82例、重度活动期组62例。检测各组外周血中T、B淋巴细胞、NK细胞、Th、Ts细胞计数及百分比，并分析SLE患者外周血淋巴细胞亚群与SLE疾病活动指数(SLEDAI)的相关性。结果活动期SLE T、Th及NK细胞计数及百分比、Ts细胞计数低于健康对照组和稳定期组，B细胞百分比高于健康对照组和稳定期组(P<0.05)。T、Th、Ts、NK细胞计数、T细胞百分比与SLEDAI评分呈负相关，B细胞百分比与SLEDAI评分呈正相关(r=-0.347、-0.311、-0.326、-0.351、-0.318、0.455，P<0.05)。结论外周血淋巴细胞亚群的变化可以为SLE患者病情评估及诊治效果提供依据。

[关键词]免疫系统疾病；红斑狼疮,系统性；淋巴细胞亚群

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus， SLE)是一种由多因素引起的以多脏器受累为特征的自身免疫性疾病[1]，全世界SLE患病率为17/10万～48/10万，我国有近100万的患者，好发于育龄期女性，因其高患病率、高病死率而对社会人群身心健康造成较大危害[2]。SLE病因未明，免疫系统紊乱贯穿整个发病过程，T淋巴细胞异常、B淋巴细胞过度活化最终导致免疫系统的异常免疫应答是其主要发病机制[3],而治疗SLE的传统或新的免疫抑制剂及生物制剂所针对的靶细胞多为体内增生过度活跃的淋巴细胞。随着基础免疫和细胞标记技术的发展，发现了越来越多的淋巴细胞亚型，这些淋巴细胞亚型在SLE的发病机制中发挥着不同的作用。以往对外周血淋巴细胞亚群与SLE病情相关性的研究大多样本量较小且仅检测淋巴细胞亚群百分比，结果不太一致[4-11]。本研究对380例不同活动期SLE患者外周血中T、B淋巴细胞、NK细胞、CD4+T(Th)、CD8+T(Ts)细胞计数及百分比进行检测，以探讨SLE病情活动期与上述淋巴细胞亚群之间的关系。

1资料与方法

1.1临床资料收集2009年1月—2014年6月解放军264医院和山西医科大学第二医院确诊的SLE 380例，均符合1997年美国风湿病协会(ARA)修订的SLE分类标准[12]。男26例，女354例，年龄7～75(32.6±11.9)岁。参照SLE活动性指数(SLE disease activity index， SLEDAI)评分作为病情活动判断标准[13](0～4分为稳定期，5～9分为轻度活动期，10～14分为中度活动期，>15分为重度活动期)分为：稳定期157例，男10例，女147例，年龄9～75(32.0±11.6)岁；轻度活动期组79例，男4例，女75例，年龄7～58(33.4±11.3)岁；中度活动期组82例，男10例，女72例，年龄16～66(35.5±13.3)岁；重度活动期组62例，男2例，女60例，年龄15～54(29.4±10.4)岁。选择同期上述医院门诊健康体检者58例为健康对照组，男14例，女44例，年龄14～66(39.4±10.1)岁；既往无重大疾病史，本人及其直系亲属无自身免疫性疾病史。各组性别、年龄等方面比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.2方法

1.2.1仪器与试剂：四色流式细胞仪，四色免洗T细胞亚群分析试剂以及FACS溶血素,均购于美国BD公司。荧光标记单克隆抗体和同型对照均购自法国Immunotech公司。Beckman Coulter EPICS XL型流式细胞仪购自美国Beckman-Coulter公司。

1.2.2检测方法：抽取静脉血1 ml于乙二胺四乙酸(EDTA)-K3抗凝管中，充分摇匀。在各测定管中分别加入荧光标记单克隆抗体CD3-PECY5/CD4-异硫氰酸荧光素(FITC)/CD8-藻红蛋白(PE)、CD-19-FITC和CD16CD56-PE各20 μl，待测全血标本100 μl，调节细胞浓度约10×109/L。每份标本设同一型对照，对照管中加入鼠抗人(IgG1-PECY5/IgG1-FITC/IgG1-PE)20 μl，待测全血标本100 μl，混匀，室温避光反应20 min后，以Q-Prep仪溶血，上机检测。流式细胞术(FCM)激光为冷亚激光，波长488 nm，采用气体流向检测仪(flow-Check)调整光路，用同型对照调电压，以侧向角散射(SSC)为横坐标，前向角散射(FSC)为纵坐标，构建散点图，在散点图上采用设门技术分析淋巴细胞群中T细胞(CD3+)、Th细胞(CD3+CD4+)、Ts细胞(CD3+CD8+)、B细胞(CD19+)和NK细胞(CD16+CD56+)百分数，每份标本计数1×105个细胞。

2结果

2.1外周血淋巴细胞亚群计数T细胞计数SLE组及SLE稳定期组、轻、中、重度活动期组均低于健康对照组，SLE轻、中、重度活动期组均低于稳定期组，且SLE重度活动期组低于轻、中度活动期组(P<0.05)。B细胞计数SLE中度活动期组高于稳定期，重度活动期组高于健康对照组、稳定期组、轻度活动期组(P<0.05)。Th细胞计数SLE组及SLE稳定期组、轻、中、重度活动期组均低于健康对照组，SLE轻、中、重度活动期组均低于稳定期组，且SLE重度活动期组高于轻度活动期组(P<0.05)。Ts细胞计数SLE组低于健康对照组(P<0.05)，SLE轻、中、重度活动期组均低于健康对照组、稳定期组，SLE重度活动期组低于轻度活动期组(P<0.05)。Th/Ts计数比值SLE组及SLE稳定期组、轻、中度活动期组均低于健康对照组，SLE中度活动期组低于稳定期组(P<0.05)。NK细胞计数SLE组及SLE稳定期、轻、中、重度活动期组均低于健康对照组，SLE轻、中、重度活动期组均低于稳定期组，且SLE重度活动期组低于轻、中度活动期组(P<0.05)。总淋巴细胞计数SLE组及SLE稳定期、轻、中、重度活动期组均低于健康对照组，SLE轻、中、重度活动期组均低于稳定期组，且SLE重度活动期组低于轻度活动期组(P<0.05)。其余指标各组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

±s)

注：SLE为系统性红斑狼疮；与健康对照组比较，aP<0.05;与SLE稳定期组比较，cP<0.05;与SLE轻度活动期组比较，eP<0.05;与SLE中度活动期组比较，gP<0.05

2.2外周血淋巴细胞亚群百分比T细胞百分比SLE组低于健康对照组，SLE轻、中、重度活动期组均低于健康对照组、稳定期组，且SLE重度活动期组低于轻、中度活动期组(P<0.05)。B细胞百分比SLE组高于健康对照组，SLE轻、中、重度活动期组均高于健康对照组、稳定期组，且SLE中度活动期组高于轻度活动期组，SLE重度活动期组高于中度活动期组(P<0.05)。Th细胞百分比SLE组低于健康对照组，SLE轻、中、重度活动期组均低于健康对照组、稳定期组(P<0.05)。Ts细胞百分比SLE稳定期组、中度活动期组均高于健康对照组，SLE重度活动期组低于稳定期组、轻、中度活动期组(P<0.05)。NK细胞百分比SLE组及SLE稳定期、轻、中、重度活动期组均低于健康对照组，且SLE轻、中、重度活动期组均低于稳定期组(P<0.05)。见表2。

±s)

注：SLE为系统性红斑狼疮；与健康对照组比较,aP<0.05；与SLE稳定期组比较,cP<0.05；与SLE轻度活动期组比较,eP<0.05;与SLE中度活动期组比较,gP<0.05

2.3外周血淋巴细胞与SLEDAI相关性分析T、Th、Ts、NK细胞计数均与SLEDAI呈负相关(P<0.05)。T细胞百分比与SLEDAI呈负相关，B细胞百分比与SLEDAI呈正相关(P<0.05)。见表3～4。

表3　各组外周血淋巴细胞亚群计数与系统性

表4　各组外周血淋巴细胞亚群百分比与系统性

3讨论

人体正常免疫应答过程有赖于各种免疫细胞之间的相互协作和相互制约，SLE患者外周血中出现大量自身抗体说明自身反应性B细胞的存在和活化，而B细胞增殖活化有赖于调节细胞的调节，淋巴细胞亚群紊乱与SLE发生、发展密切相关。根据T细胞在免疫应答中的功能不同，将T细胞分为辅助性T细胞(helper T lymphocyte， Th/CD4+)和抑制性T细胞(supressor T lymphocyte， Ts/Tc/CD8+)。有研究认为，Th淋巴细胞具有辅助B细胞生成抗体和巨噬细胞活化等功能，辅助诱导细胞及体液免疫，目前认为Th淋巴细胞的异常凋亡与SLE的发展和进展有着密切的联系，并在自身抗体的形成过程中起着关键作用[14]。

国内外对SLE患者T细胞亚群的研究较多，但结果都不太一致。本研究结果发现，SLE组Th细胞计数及百分比低于健康对照组，且其计数与SLEDAI评分呈负相关，与国内研究一致[4-7]。由于SLE疾病活动患者体内产生大量自身抗体通过不同途径进入淋巴细胞，导致细胞周期紊乱，引起Th淋巴细胞凋亡，比例降低。本研究发现，SLE组Ts细胞计数低于健康对照组，与SLEDAI呈负相关，与孙家祥等[7]报道一致。究其原因可能是Ts淋巴细胞抑制T细胞活化、抑制B细胞产生抗体和细胞毒作用，起抑制细胞及体液免疫的作用，而Ts细胞下降引起了B细胞多克隆激活及体液免疫异常,继而加重SLE病情[15]。但任娜等[4]、Yang等[9]研究发现Ts细胞升高，成传芳等[6]、Lee等[8]研究表明Ts细胞变化无统计学意义。本研究结果与上述不一致，可能与彼此研究的样本量有关，具体原因仍需进一步探讨。本研究发现，SLE组Th/Ts计数比值低于健康对照组，与吴冰文等[5]、孙家祥等[7]和董剑[16]研究结果一致。王晓乐等[17]报道，T细胞亦可分为CD4+CD28+、CD4+CD28-、CD8+CD28+、CD8+CD28-具有不同表型和功能的亚群，SLE患者外周血T细胞CD28分子表达水平显著降低，包括CD4+CD28+和CD8+CD28+ T细胞亚群细胞均明显减少，而以CD4+CD28+细胞降低更为明显，故出现Th/Ts比值降低。Th与Ts细胞的相互制约及平衡对机体免疫应答具有重要的调节作用，两亚群比例失调会产生免疫功能失常，因此Th/Ts比值代替了整体的免疫平衡[18]。

CD19+淋巴细胞即为B细胞，其功能为分泌抗体和激活T细胞。激活的T细胞可以辅助B细胞活化，其中可能包括自身反应性B细胞，后者分泌更多的自身抗体，最终加重SLE病情。已有研究证实，SLE患者血中与病情活动有关的B细胞以及分泌自身抗体的B细胞数量增加，从而导致自身抗体增多[10]。本研究发现，SLE组B细胞百分比高于健康对照组，SLE轻、中、重度活动期组B细胞百分比均高于健康对照组、稳定期组，B细胞百分比与SLEDAI评分呈正相关，与以往的报道一致[5，6，10，16]。

NK细胞是体内非特异性免疫效应细胞，对多种细胞，尤其是T、B淋巴细胞具有免疫调节作用，SLE活动期NK细胞减少，对T、B淋巴细胞免疫调节作用减弱，从而导致多种自身抗体产生[19]。活动期SLE患者经过治疗，NK细胞计数有所增多，提示NK细胞在一定程度可以反映机体免疫失衡状态。本研究结果显示，SLE组NK细胞计数及百分比低于健康对照组，SLE轻、中、重度活动期组患者NK细胞计数均低于健康对照组、稳定期组，NK细胞计数与SLEDAI呈负相关，这与吴冰文等[5]、成传芳等[6]和Puxeddu等[11]的研究结果相近。

综上所述，SLE患者体内存在淋巴细胞平衡紊乱，T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞及NK细胞数量、百分比和(或)功能改变在SLE发生、发展各阶段发挥着重要的作用，淋巴细胞亚群的监测不仅可以从细胞水平反映疾病病情，还可以帮助我们进一步探讨SLE的发病机制，从而为临床诊断与治疗提供应用价值。

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(收稿时间：2014-12-02修回时间：2015-01-05)

·论著·

Changes and Clinical Significance of Peripheral Blood Lymphocyte Subsets in 380 Patients with Systemic Lupus Erythematosus

YANG Yu-feng1， ZHU Jian1， RU Jin-li2， CHE Guo-zhu2， JIN Zhi-yong2， SUN Hui-ping2, JIN Xue-qin2, CHEN Wei-hua2, LI Xiao-feng3(1. Department of Rheumatology and Immunology, General Hospital of PLA, Beijing 100039, China; 2. Department of Rheumatology and Immunology, 264 Hospital of PLA, Taiyuan 030001, China; 3. Department of Rheumatology, the Second Hospital of Shanxi Medical College, Taiyuan 030001, China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the effects of T lymphocyte cell subsets, B-lymphocytes and NK cells changes in the pathogenesy and development of systemic lupus erythematosus (SLE). MethodsA total of 380 inpatients with SLE and 58 healthy controls taking medical examination were recruited in this study, and then the SLE inpatients were divided into inactive SLE subgroup (subgroup A,n=157), gentle active SLE subgroup (subgroup B，n=79), midrange active SLE subgroup (subgroup C,n=82) and severe active SLE subgroup (subgroup D,n=62). The counts and percentages of T-lymphocytes, B-lymphocytes, Th, Ts and NK cells in peripheral blood were detected in the four groups. The correlations between peripheral-blood lymphocyte subsets and disease activity indexes of SLE (SLEDAI) in SLE patients were also analyzed. ResultsIn active subgroups, the values of counts and percentages of T, Th and NK cells and Ts cell count were significantly lower than those in control group, while B-lymphocytes percentage was significantly higher than those in control group and inactive SLE subgroup (P<0.05). The counts of T, Th, Ts, NK cells and percentage of T cell were negatively correlated with SLEDAI score, while percentage of B cell was positively correlated with SLEDAI score (r=-0.347, -0.311, -0.326, -0.351, -0.318, 0.455，P<0.05). ConclusionThe changes of lymphocyte subsets in peripheral blood of SLE patients may be helpful in evaluating pathogenetic condition and diagnosis of the SLE.

[Key words]Immune system diseases； Lupus erythematosus, systemic； Lymphocyte subsets

[DOI]10.3969/j.issn.2095-140X.2015.05.019

[文献标志码][中国图书资料分类号]R593.241A

[文章编号]2095-140X(2015)05-0069-04

[通讯作者]朱剑，E-mail:jian.jzhu@gmail.com

[基金项目][作者单位]100039 北京，解放军总医院风湿免疫科(杨宇峰、朱剑)；030001 太原，解放军264医院风湿免疫科(茹晋丽、车国柱、靳志勇、孙慧萍、靳雪琴、陈伟华)；030001 太原，山西医科大学第二医院风湿科(李小峰)