EGF在子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义

卫艳芬王健

EGF在子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义

卫艳芬王健

【摘要】目的探讨EGF在子痫前期患者胎盘组织中的表达及其意义。方法采用化学组织免疫的方法，对正常孕妇34例(对照组)和42例有子痫前期的患者(其中轻度子痫前期患者25例，重度子痫前期患者17例)的胎盘组织中EGF的表达水平进行检测。结果在正常妊娠和子痫前期各组织中EGF都有表达，且更明显的部位的表达是在滋养细胞胞浆中，比较正常妊娠组与轻度子痫前期组，在胎盘组织中EGF的表达显著增强，其差异有统计学意义( P＜0．01) ;比较重度子痫前期组与正常妊娠组，EGF在重度子痫前期的胎盘组织中的表达显著增强，差异有统计学意义( P＜0．01) ;比较轻度子痫前期组与重度子痫前期组，EGF在胎盘组织中的表达变化不显著，其差异无统计学意义( P＞0．05)。结论EGF对正常妊娠的维持起到了一定的保护作用; EGF在胎盘组织中的表达明显下降，滋养细胞的浸润能力受到了影响，与子痫前期的发病可能有关。

【关键词】子痫前期;胎盘组织;免疫组化;表皮生长因子;妊娠高血压疾病

作者单位: 050051石家庄市，河北医科大学第三医院第一手术室(卫艳芬)，妇产科(王健)

子痫前期是产科的一个并发症，而且它是最常见及最严重的，它有极其复杂的病因，围产儿和孕产妇病死率升高的主要原因就是由于子痫前期导致的。研究发现，滋养细胞在子痫前期的浸润表浅、螺旋动脉在子

痫前期的重铸障碍是由于患者胎盘滋养细胞在子痫前期凋亡增加导致的［1］，子痫前期的发病与其紧密关联，其尚未完全清楚其中的病理原因。表皮生长因子( epidermal growth factor，EGF)在人类多种组织中都有，它是一种多肽，具有广泛生物学活性，其主要被颌下腺、十二指肠及胰腺分泌。胎儿、胎盘在生长发育过程中，增加了表皮生长因子和其EGFR(即受体)的含量，对胎盘和胎儿的生长发育的过程有着非常重要的作用，对胎盘功能的影响、影响调控着床、滋养细胞合成分泌及其分化有促进作用，如在妊娠期间EGF的含量下降可导致早期流产、胎盘发育不良、妊娠期高血压疾病( HDCP)等各种病理怀孕。此文章凭借检验测试在患者胎盘组织中尤其是在子痫前期中EGF的表达，探讨在子痫前期疾病发病机制中EGF所起的的作用。

1　资料与方法

1．1一般资料选择自2009年1月份到2011年3月份在本院住院且妊娠分娩的42例子痫前期患者作为其研究对象，其中轻度子痫前期患者25例，平均年龄( 28．25±1．37)岁;平均孕周( 38．03±1．42)周;重度子痫前期17例，平均年龄( 29．34±2．03)岁;平均孕周( 36．4±1．58)周。选择同期正常孕妇34例患者(因狭窄骨盆、胎儿宫内窘迫、产程的异常、臀位等指征需要做剖宫产分娩)作为对照组，平均年龄( 26．35 ±2．25)岁;平均孕周( 38．6±2．10)周。进行诊断子痫前期的标准以《妇产科学》(第7版)作为依据［1］。将2组孕妇中的孕周、孕次和年龄进行比较，差异无统计学意义( P＞0．05)，有可比性。

1．2试剂抗兔抗人表皮生长因子多克隆抗体——是从美国SNTA公司买来的试剂，鼠抗人ICAM-1单克隆抗体组化免疫SP试剂盒和DAB显色剂——是从北京中山生物技术有限公司买来的。

1．3采集标本及制作各标本剖宫产手术后等娩出胎盘后，在胎盘母体面的中央分别迅速取胎盘组织约1 cm×1 cm×1 cm大小，而且不能有坏死灶及钙化灶，先冲洗(用0．9%氯化钠溶液)干净后再固定(用中性甲醛)，最后经过脱水处理后常规进行包埋(必须用石蜡)，这样石蜡包块就做成了。

1．4检测定性组化免疫在各组胎盘组织中进行对EGF的表达染色，其过程及结果依照SP试剂盒上的说明执行，采用已知的阳性标本做阳性对照，阴性对照采用PBS代替一抗。

1．5判定标准在光镜下棕黄色颗粒存在于细胞内且在排除非特异性着色情况下，为EGF的阳性表达。此过程由两名病理医师来完成，他们采用双盲法阅片来共同完成。半定量分析的进行按照Fromowitz等的组化免疫综合计分法。采用高倍镜( 1×40) ( 5个)，且用不设任何条件，随意的视野的阳性细胞的百分比平均数作为阳性细胞的百分比。表示着色强度用多数阳性细胞的染色的情况计算得分。首先，打分根据阳性细胞占细胞总数的百分数进行:记0分代表没有阳性细胞;记1分代表阳性细胞占细胞总数的1%～25%，记2分代表阳性细胞占细胞总数的26%～49%;记3分代表阳性细胞占细胞总数≥50%。然后再根据其染色的深浅程度进行打分即阳性细胞的染色强度，记0分为阴性;记1分代表浅黄色;记2分为棕黄色;记3分表示棕褐色。最后把二者的分数进行相加，(－)为0～1分; ( + )为2分; ( + + )为3～4分; 5 ～6分为( + + + )。其中以(－)、( + )视为低表达，( + + )、( + + + )视为高表达。

1．6统计学分析将应用SPSS 13．0统计软件，计数资料采用χ2检验，P＜0．05为差异有统计学意义。

2　结果

EGF在妊娠高血压疾病各组和正常妊娠组的胎盘组织中都有显著阳性表达，其染色特别是在滋养细胞胞浆中尤其很明显，而在细胞核中却没有明显染色。比较正常妊娠组与轻度子痫前期组，胎盘组织中EGF的表达也显著增强，差异有统计学意义( P＜0．01) ;将正常妊娠组与重度子痫前期组作比较，胎盘组织中表皮生长因子的表达显著增强，差异有统计学意义( P ＜0．01) ;将轻度子痫前期组与重度子痫前期组作比较，在胎盘组织中EGF的表达没有明显变化，差异无统计学意义( P＞0．05)。见表1。

表1　EGF在3组胎盘组织中的表达，其结果的比较例( %)

3　讨论

HDCP是妊娠常见并发症之一，其母婴健康受到严重威胁，其有复杂的病因和发病机制，到现在为止还无明确概念，而可以基本上认可的观点是:胎盘或滋养细胞缺血是子宫失血的实质，其原因是重铸的螺旋小动脉数量明显降低，阻碍了螺旋小动脉的重铸过程，而且大部分仅限于只是在管径只有正常妊娠的1/ 2的蜕膜层内部血管进行重铸，而在子宫浅肌层的螺旋动脉内，滋养细胞的浸润并不发生，胎盘的灌流量明显降低了。HDCP即妊娠期高血压疾病患者的胎盘滋养细胞的浸润表浅、螺旋动脉的重铸过程被限制，导致

子宫-胎盘发生缺氧和缺血，此病理变化是妊高征的特征性病理变化之一［2］。人类胎盘从无到有的发生，是滋养细胞吸附在已经蜕膜化了的子宫内膜上，碰撞上了子宫小螺旋动脉，紧接着入进到血管腔反向转移，其顺着血管内皮细胞，然后子宫肌层和蜕膜的浅1/3 ～1/2也同时跟着浸润，然后血管内皮细胞分化而且被更换掉，进而导致血管的低电阻高流量的的形态变化的促成，胎儿的血流供应因此而也大大地在幅度上增加了，这样保证提供给了胎儿所需要的营养物质，所以理论上说的“生理重铸螺旋小动脉”的过程就是这样发生的，在固定胎儿母体和胎盘间血液循环起着举足轻重的作用［3］。在正常妊娠时，螺旋动脉被滋养细胞侵入，继而发生生理性血管重铸，此过程发生在位于蜕膜和子宫肌层内1/3段的螺旋动脉，提供了绒毛间隙的血液流动量;通过滋养细胞母体和胎儿进行有规律的交换着充足的氧气、营养物及其代谢产物，维持着整个有机循环。

EGF属于一种由53个氨基酸残基组成的单链多肽，其分子质量相对为6 045 Da，它在人体多种组织中都存在，人体胃肠道腺体、颌下腺、生殖器官以及多种肿瘤组织等都有EGF。它是细胞生长调节因子，且是最重要的细胞生长调节因子之一，刺激细胞增生和分化，表皮的生长和角化是其最主要的功能。孕妇在妊娠期间及胎儿许多组织和尿、血浆、羊水中都有EGF的表达，并具有生理作用多种如促进滋养细胞增殖、分化、胚胎着床及胎儿器官发育和功能成熟等等，其在胎儿、胎盘的生长发育过程中起着极其重要的作用［4］。另外有研究证明EFG作为胎盘分泌的生长因子，EGF必须与其受体( EGFR)结合，其生物学效应才能发挥，两者之间具有高度特异性以及其亲和力，在滋养细胞中由于低表达的EGFR使得表皮生长因子不能更有效地发挥其正常的生物学之效应，因而滋养细胞的增殖、分化和侵入被大大地影响了［5］。在正常细胞分裂增殖和恶性转化中EGF和EGFR具有重要作用［6］。临床研究表明，先兆子痫发病的重要因素之一就是绒毛外细胞滋养层细胞对子宫螺旋动脉的侵入不足以及滋养层细胞的异常凋亡［7，8］，Leach等［9］发现，采用原位杂交技术和组化免疫方法，HB-EGF蛋白及其mRNA在先兆子痫胎盘组织中的表达较在正常妊娠者中下降将近5倍。Sawicki等［10］通过作实验，检测在胎盘表面滋养细胞的代谢产物，按照组织化学免疫的方法，发现表皮生长因子的正常表达能够促使滋养细胞的增殖速度加快，把细胞滋养细胞分化诱导成合体滋养细胞。由于在胚泡的植入以及滋养层细胞的增殖、分化和侵入的所有过程中EGF都参与在其中，因此各种病理情况如早期流产、妊娠期高血压疾病及胎盘发育不良等的发生就是由于EGF功能缺陷或表达过度导致的。EGF的表达低水平，影响降低了滋养细胞表面整合素的表达水平，紧接着滋养细胞的迁移及侵蚀的过程也受到了影响，分化程度不好的滋养细胞，重铸过程受阻的螺旋动脉，都不能正常地发挥作用，阻碍了子宫胎盘的血流供应，因此导致了HDCP的发生。本研究结果表明，EGF在子痫前期患者胎盘组织中的表达强度均显著低于对照组( P＜0．01)。这表明，表皮生长因子表达水平的下降，阻碍了滋养细胞的浸润能力，进而螺旋小动脉的生理重铸过程发生了障碍，继而降低了胎盘的灌注量，滋养细胞的失血进一步加重，最终胎盘浅着床形成了，导致子痫前期的发生，构成了子痫前期的发病机制之一。

综上所述，EGF对维持正常妊娠起着重要作用，且在胎儿生长发育过程中也有着至高无上的作用，滋养细胞浸润能力受其严重影响着，EGF通过各种途径发挥其效应，EGF在子痫前期患者胎盘组织中表达降低，“胎盘浅着床”形成了，子痫前期的发病与其可能相关密切。所以，临床上为预防及治疗子痫前期的发生可以采用通过实施一定的方法来促使表皮生长因子的表达水平达到正常，并随即一直保持来达到预期的目的，即对子癫前期的发生达到预防和治疗的目的。

参考文献

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10Sawicki G，Radomski MW，W inkler LB，et al．Polarized release of-matrix e-tall-oproteinase-2 and-9-from-cultured-human-placental-syncytiotrophoblasts．Biol Reprod，2000，63: 1390-1395．

·论著·

收稿日期:( 2014－08－29)

通讯作者:王健，050051河北医科大学第三医院妇产科; E-mail: leeaik2004@163．com

doi:10．3969/j．issn．1002－7386．2015．04．029

【中图分类号】R 714．245

【文献标识码】A

【文章编号】1002－7386( 2015) 04－0556－03