榆林市某县奶牛结核病和布鲁菌病检测与分析

武　燕，盛　江，武青茂，贾凤菊，刘院平，曹彩莉，于三科（1.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌71100；.靖边县动物疫病预防控制中心，陕西靖边718500）



榆林市某县奶牛结核病和布鲁菌病检测与分析

武燕1，2，盛江2，武青茂2，贾凤菊2，刘院平2，曹彩莉2，于三科1＊
（1.西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌712100；2.靖边县动物疫病预防控制中心，陕西靖边718500）

摘 要：为了解榆林市某县2010年-2014年期间奶牛结核病和布鲁菌病的发生情况，应用结核病国家检测标准（GB/T18645-2002）-结核菌素皮内变态反应检测奶牛结核病，应用虎红平板凝集试验和试管凝集试验检测奶牛布鲁菌病。结果表明，奶牛结核病平均阳性率为0.72%；奶牛布鲁菌病平均阳性率为1.19%，虎红平板凝集试验和试管凝集试验2种检测方法的符合率一致。

关键词：奶牛；结核病；布鲁菌病；检测

牛结核病（Bovine tuberculosis）和布鲁菌病（Brucellosis）是呈全球分布的重要人兽共患病［1-3］，牛结核病和布鲁菌病在世界范围内普遍流行，不仅严重危害畜牧业的发展，而且对人类的健康带来巨大威胁［4］。近年来，我国畜牧业发展迅速，动物的流动和交易日益频繁，牛结核病和布鲁菌病的流行在某些地方有加重的趋势［5］，是人结核病和布鲁菌病的重要传染源［6］。作者对榆林市某县奶牛结核病和布鲁菌病进行检测与分析，以期为当地结核病和布鲁菌病的防控提供参考资料。

1　材料与方法

1.1材料

榆林某县各乡镇2010年-2014年期间所养奶牛共11515头牛。提纯结核菌素（哈药集团生物疫苗有限公司，批准文号：兽医字（2006）080078024），游标卡尺（精度为0.02mm）、毛剪、酒精棉、注射器，工作服、帽、口罩、胶靴、登记表等。

虎红平板凝集抗原（青岛易邦生产生，批准文号：兽药生字（2011）150138017）、试管凝集抗原（青岛易邦生产生，批准文号：兽药生字（2011）150138011）、标准阳性血清、标准阴性血清、被检血清、一次性反应板、0.1mL吸管或微量加样器、混合棒或牙签等。

1.2方法

1.2.1奶牛结核病检测

1.2.1.1检测方法 奶牛结核病检测方法按照国家标准GB/T18645-2002进行。①牛结核菌素皮内变态反应检测对每头奶牛编号，在颈部左侧中部上三分之一处剪毛约10cm（提前1d剃毛），用游标卡尺量术部中央皮皱厚度，作好记录，皮内注射稀释好的提纯结核菌素0.1mL。②结核菌素试验结果观察皮内注射后72h判定，局部有无明显的炎性反应。阳性反应为局部有明显的炎性反应，肉眼即可判定；阴性反应为无炎性反应；有些反应只有针眼处有红色肿胀，一般为注射时针眼处感染引起，如果不确定也可判定为可疑；凡判定为可疑反应的牛，即刻在另一颈侧以同一批结核菌素同一剂量进行第2次注射，再经72h观察反应。

1.2.1.2结果判定 严格按照农业部《牛结核病提纯结核菌素变态反应操作规程》判定标准［7］执行。1.2.2 奶牛布鲁菌病检测

1.2.2.1虎红平板凝集试验 此次检测按照国家标准“布鲁菌血清学检验（GB/T18648-2002）”选用虎红平板凝集试验（BPAT）进行检测。检测方法如下：在一次性反应板上加0.03mL被检血清，然后加入虎红平板抗原0.03mL，充分混匀，在5mL～10min观察结果。

1.2.2.2虎红平板试验判定标准 出现可见的凝集反应就判为阳性。

1.2.2.3试管凝集试验 对虎红平板凝集阳性样品进行试管凝集试验，具体操作步骤为：①按照1∶50，1∶100，1∶200和1∶400比例对待检血清进行稀释，标记编号；②向已稀释好的待检血清中加入0.5mL抗原（1∶20），并振摇均匀，各反应管反应总量为1mL。

1.2.2.4 试管凝集试验判定标准 根据各管中上层液体的清亮程度记录结果，特别是50%清亮度（++）对判定结果关系较大。判定标准必须建立在两组对照管成立的情况下进行判定，即阴性血清对照为清亮透明无沉淀，阳性抗原对照为均匀混浊，才可判定试验管。确定每份血清滴度是以出现“++”及以上的凝集现象的最高血清稀释度。具体诊断标准如下：没有进行过菌苗接种的牛血清试验的标准是，牛血清为1∶100（即第二管）为（++）及以上者为阳性，1∶50（即第一管）为（++）为可疑。即用试验管第二管与比浊管第三管对比，若比它清为阳性，比他浊为阴性。

2　结果

2.1榆林市某县奶牛结核病检测结果

2010年-2014年间，共检测奶牛11 515头，其中检出阳性共83头，平均阳性率为0.72%。2010年，检测368头，无阳性检出。2011年-2014年，均有阳性检出，阳性率依次为2.69%、0.12%、0.50% 和0.18%。其中2011年，该县奶牛检出率达到高峰，2011年后出现下降，但在2013年有小幅升高（表1）。

表1　2010年-2014年榆林市某县奶牛结核病检测结果Table 1 Detection results of bovine tuberculosis from 2010to 2014in a county of Yulin

2.2榆林某县奶牛布鲁菌病检测结果

对2010年-2014年采集11 515份奶牛血清样品进行虎红平板凝集试验检测，共检出阳性血清137份，平均阳性率为1.19%（表2）。其中，2011年检出62份阳性血清，阳性率达到峰值，为2.69%；2014年共检出阳性血清7份，阳性率降到最低，为0.20%。2010年-2011年奶牛布鲁菌感染率升高，此后3年间，逐渐降低至2014年最低值。

将虎红平板凝集试验阳性血清，再进行试管凝集试验检测。结果表明，试管凝集试验与虎红平板凝集试验的阳性数和阳性率相同，符合率100%。因此虎红平板凝集试验结果也是可靠的。

表2　2010年-2014榆林市某县奶牛布鲁菌病虎红平板凝集试验结果Table 2 BPAT results of bovine brucellosis from 2010to 2014in a county of Yulin

3　讨论

奶牛结核病和布鲁菌病属于慢性消耗性疾病，临床症状复杂，不能仅依靠结核病的临床症状进行确诊［8-9］。传统的细菌学检测方法费时费力、检出率低、灵敏度差；免疫学检测虽操作简便，但代价较高、试剂昂贵；分子生物学检测技术灵敏度高、检出率高、需要复杂的仪器设备；均无法适应基层大规模检测的需要，推广普及仍有一定困难［10］。截止目前，结核菌素试验是公认的临床检测奶牛结核病的标准，但也存在一定的局限性［11］。传统的试管凝集试验、平板凝集试验应其诊断简便、费用低廉，仍然是许多发展中国家进行布鲁菌病检测和诊断的首选方法。在此次试验中，先用虎红平板凝集试验进行检测，对阳性血清再用试管凝集试验复核，两种试验的符合率100%。因此，在日常工作中应该把两种试验结合起来，以准确判断。

2010年-2014年间，该县奶牛结核病和布鲁菌病病例时有发生，主要原因是有些农户、牛场盲目引进奶牛。该县通过宣传教育、加强检疫、及时淘汰阳性牛等措施有效控制了奶牛结核病和布鲁菌病发生与流行，近3年奶牛结核病阳性率处于较低水平，布鲁菌病的阳性数和阳性率明显下降。

参考文献：

［1］ 王国栋，刘书梅.国内外牛布鲁氏菌病防治研究进展［J］.安徽农学通报，2013，19（16）：134-137.

［2］ 王国栋，刘书梅.牛布鲁氏菌病防控研究进展［J］.现代农业科技，2013（17）：273-277.

［3］ Rubach M P，Halliday J E，Cleaveland S，et al.Brucellosis in low-income and middle-income countries［J］.Curr Opin Infect Dis，2013，26（5）：404-412.

［4］ Xu H B，Jiang R H，Li L.Treatment outcomes for Mycobacterium avium complex：a systematic review and meta-analysis ［J］.Eur J Clin Microbiol Infect Dis，2014，33（3）：347-358.

［5］ 杨 丽，寇增强，毕振旺，等.山东省2004-2012年布鲁氏菌病时空分布特征分析［J］.中华流行病学杂志，2014，35（8）：925-927.

［6］ 王忠仁.牛结核病与人结核病的相互关系［J］.中国防痨杂志，2005，27（2）：124-125.

［7］ 王桂枝，毕丁仁.兽医防疫与检疫［M］.北京：中国农业出版社，1998：135-137.

［8］ 王云霞，于三科，翟军军.牛结核病的现状及诊断研究进展［J］.动物医学进展，2006，27（6）：38-41.

［9］ 雷程红，冉多良，余佳琳，等.牛结核病监测与分析研究［J］.新疆农业科学，2012，49（1）：150-154.

［10］ 李 蓉.牛结核病的诊断研究进展［J］.现代畜牧兽医，2014 （3）：49-51.

［11］ 刘金晔，郝永清.牛结核病检疫方法研究进展［J］.中国畜牧兽医，2011，38（5）：146-148.

Detection and Analyses of Dairy Cow Tuberculosis and Brucellosis in a County of Yulin

WU Yan1，2，SHENG Jiang2，WU Qing-mao2，JIA Feng-ju2，LIU Yuan-ping2，CAO Cai-li2，YU San-ke1
（1.College of Veterinary Medicine，Northwest A&F University，Yangling，Shaanxi，712100，China；2.Animal Disease Prevention and Control Center of Jingbian，Jingbian，Shaanxi，718500，China）

Abstract：In order to understand the occurrence status of tuberculosis and brucellosis of dairy cows in a county of Yulin during 2010to 2014，the national testing standards（GB/T18645-2002）-tuberculin intradermal allergic reaction for detecting tuberculosis，and Bengal plate agglutination test and tube agglutination test for detecting brucellosis in dairy cows were applied respectively.The results showed that the average positive rate of tuberculosis in dairy cows was 0.72%.The average positive rate of brucellosis in dairy cows was 1.19%，and the test results of two methods（Bengal plate agglutination test and tube agglutination test）were the same.

Key words：dairy cow；Tuberculosis；Brucellosis；detection

作者简介：武 燕（1986-），女，陕西靖边人，兽医硕士，主要从事动物疫病防控工作。＊通讯作者

收稿日期：2015-01-28

中图分类号：S852.61

文献标识码：B

文章编号：1007-5038（2015）06-0186-03