犬多发性混合性乳腺瘤的特殊染色鉴别

李瑞珍，宋高杰，赵俊江，梁莹莹，郝军红，苗盼盼，潘耀谦（河南科技学院动物科学学院，河南新乡453003）



犬多发性混合性乳腺瘤的特殊染色鉴别

李瑞珍，宋高杰，赵俊江，梁莹莹，郝军红，苗盼盼，潘耀谦＊
（河南科技学院动物科学学院，河南新乡453003）

摘 要：为了鉴别犬多发性混合性乳腺瘤的形态结构及其发生的关系，用特殊染色法对两例肿瘤进行了详细的病理学观察及分析。结果表明，多发性混合性乳腺瘤组织中除了有单纯性乳腺瘤结构外，还包括乳头状瘤和囊腺瘤的结构，间质中有大量的结缔组织增生，形成条索状的胶原纤维束，增生的结缔化生形成了软骨组织。当乳腺瘤上皮增生过快时，可形成乳腺癌样的组织团块。研究表明，多发性混合性乳腺瘤可继发于单纯性乳腺瘤，是乳腺瘤加重的形态表现；混合性乳腺瘤组织的软骨组织是由结缔组织化生而来。由于多发性混合性乳腺瘤中有多种组织成分不断增生，并可出现乳腺癌样的组织团块，所以该瘤易于发生恶变。

关键词：犬；混合性乳腺瘤；特殊染色；病理组织学

乳腺瘤是犬多发的一种良性肿瘤，不论公犬［1］和母犬均可发生，但母犬的发病率较高。据报道，犬乳腺瘤的发病率仅次于犬的皮肤瘤，其发病率约为1.988‰。在犬所有肿瘤性疾病中乳腺肿瘤发生率为50%左右，其中41%～53%为恶性肿瘤，容易通过腹股沟淋巴结转移至身体其他部位。一般认为恶性肿瘤大多来源于良性乳腺瘤的恶性变（乳腺癌）［2-4］。虽然本病的发生原因还不十分清楚，但大多研究表明，本病的发生与性激素的分泌失调有关［5-7］。据报道，本病多发生于10岁以上的老龄犬，常随母犬发情次数的增加而发生肿瘤的机率增大［8-10］。此外，从基因学上来分析，人类与犬的肿瘤生物学反应波谱和肿瘤发生学十分接近，而且生活环境和生活习性也相似，承担许多共同的风险因素。因此，深入研究犬的乳腺瘤可为控制人类乳腺瘤提供动物模型。

据报道，犬的乳腺瘤主要发生于后两对乳腺，其他乳腺发生较少［11-13］。目前，有关犬的多发性混合性乳瘤腺的报道较少。作者在临床实践中，发现两例多发性乳腺瘤，其中一只杂交德国牧羊犬甚为严重，全部乳腺均有大小不等的肿块。两例病犬的乳腺瘤经病理组织学特殊染色检查，确诊为混合性乳腺瘤，并根据特殊染色的结果对其特殊成分的来源及肿瘤组织的演变进行了分析。现将结果予以报道。

1　材料与方法

1.1材料

多发性乳腺瘤病例来自河南科技学院兽医院。病犬的多个乳腺均有大小不一肿块，前来就诊。确诊为乳腺瘤后，通过手术的方式，切除了肿块，用100mL/L福尔马林固定后进行病理组织学检查。

1.2方法

1.2.1切片及常规染色 按常规石蜡包埋切片法进行，即固定好的肿瘤组织，经眼观检查后，从肿瘤的多个部位取材，充分水洗，再经脱水、透明、浸蜡和包埋后，用Leica切片机制成5mm厚的切片并用常规染色法，即苏木素-伊红（HE）染色。

1.2.2特殊染色 为了鉴别肿瘤组织中不同的纤维和细胞成分，对组织切片分别做了汪吉松（VG）、马松三色（Masson）、磷钨酸苏木精（PTAH）和Schiff氏糖原（PAS）染色。各种染色方法和步骤分别按常规进行。

2　结果

2.1临床病理学检查

两病犬均消瘦，体表的骨形标志明显，但食欲与精神尚可。它们共同的突出特点是多个乳腺同时有大小不一的肿块。其中一例10岁的杂交德国牧羊母犬的病情很重，左右两列8个乳腺同时检出大小不等、形态不一的肿块。病犬的后两对及前两对乳腺的肿瘤较大。后两对乳腺的肿瘤约拳头大，形似马铃薯，表面有多个结节，表皮紧绷；前两对乳腺的肿瘤约鸭蛋大，表面较光滑，右侧乳腺瘤隆突，左侧乳腺瘤则扁平；其余四对乳腺均有较小的隆起或扁平状的肿瘤。所有肿瘤的外表皮肤完整，无破溃出血情况（图1A）。触诊肿瘤组织，其质地较坚实，与腹部皮肤粘连，移动肿块时，似有一层完整的被膜包裹，基底可从腹壁部移动。腹股沟淋巴结稍肿大。

病犬麻醉后对前后两对较大的乳腺瘤进行了切除术。肿瘤组织易从腹壁切除，切除肿瘤后，腹壁的肌组织没有明显的损伤（图1B）。切除的肿瘤有较完整的包膜，但肿瘤组织的质地较坚实，有明显的结节和纤维束样结构（图1C）。

图1　犬多发性混合性乳腺瘤的临床病理学检查及手术Fig.1 Clinical pathological examination and operation of multiple mixed mastadenoma in a dog

2.2病理组织学检查

2.2.1普通染色观察 乳腺瘤组织被大量间质分成大小不等的小叶及腺叶，乳腺的正常结构完全破坏。小叶及腺叶内的组织成分完全不同。有的腺叶中乳腺腔的大小不一，腺腔中蓄积有脱落的上皮及乳汁，呈单纯性乳腺瘤样构造（图2A）。有的乳叶中腺腔特别悬殊，小者腺腔消失，大者腺腔极度扩张形成大囊腔，发生了囊性乳腺瘤（图2B），腺上皮呈立方或柱状，腺腔中含有大小不一的乳凝块，内含有大量脱落的上皮细胞。部分腺腔的上皮增生，呈柱状或多层状，腺壁的间质随着增生的上皮突向管腔，形成指状的乳头瘤（图2C）。少量腺叶中见腺上皮大量增生，形成大量原始型的乳腺组织，其腺腔很小，腺上皮呈立方形成，有较多的分裂像（图2D）。腺瘤组织中有大量结缔组织增生，呈条索状、片状或团块状不均匀性增生。在增生的结缔组织中，常见大片的软骨基质形成，瘤组织发生了化生，形成了软骨组织（图2E）。在高倍镜下，软骨基质中有大量由成纤维细胞转化而来的类软骨细胞和软骨细胞（图2F）。部分瘤组织发生黏液变性，瘤细胞呈星芒状，互相连接成网，网内填充黏液样分泌物。乳腺导管周围的结缔组织大量增生，使导管壁明显增厚，周围有大量胶原纤维，呈束状排列。由于胶原纤维的收缩和增生的结缔组织的挤压，使乳导管的管腔不规则或变小，甚至完全闭锁，从而影响了乳腺分泌物的排出。

2.2.2特殊染色观察 用Masson三色染色时瘤组织中增生的结缔组织和大量的胶原纤维被染成绿色，瘤组织中大小不一的小叶结构十分明显。发生化生的软骨组织，其周围有大量结缔组织包绕，淡绿色的软骨基质与深染的胶原纤维有明显的延续关系（图3A）。用PTAH染色时，瘤组织中呈条索状胶原纤维染成砖红色，而没有检出被染成蓝色的肌纤维。从而证明HE染色检查所发现的肌纤维样条索是成束状的胶原纤维，而不是增生的肌纤维。用VG染色法染色时，瘤组织中大片的胶原纤维被染成红色（图3B），大片的软骨组织周围有大量粉红色的胶原纤维围绕，并与淡染的软骨基质相融。在大血管周围见有被染成淡黄色的肌纤维（图3C），而其他的增生成分未被染成黄色或淡黄色，说明没有肌纤维或肌上皮细胞的增生。用PAS当色时，瘤组织中已化生为软骨组织的基质被染成淡染灰红色，而蓄积在扩张的乳腺腔或导管腔的乳汁样成分被染成深红色，其他组织被苏木素染成灰蓝色。

图2　犬混合性乳腺瘤普通染色的病理组织学检查Fig.2 Histopathological examination of mixed mastadenoma of dogs by general staining

图3　犬混合性乳腺瘤特殊染色的病理组织学检查Fig.3 Histopathological examination of mixed mastadenoma of dogs by special staining

3　讨论

3.1混合性乳腺瘤中的软骨是由结缔组织化生形成

软骨组织是混合性乳腺瘤的重要组成部分，是诊断混合性乳腺瘤的重要标志，但对乳腺瘤中软骨组织的来源问题至今还没有完全搞清。在佘锐萍主编［14］的动物病理学中，认为化生只能发生于同源细胞之间，即上皮细胞之间和间叶细胞之间。在间叶组织中结缔组织可化生为软骨组织或骨组织。而在陈怀涛等［15］主编的兽医病理学中，认为混合性乳腺瘤内软骨来源于肌上皮细胞。他们认为分布在乳管和腺泡周围的肌上皮细胞发生异常增生，形成细胞团块并突入基质，使乳管和腺泡受压变成薄的条索状。细胞之间为肌上皮细胞分泌的基质，是透明软骨的前身。增生的肌上皮细胞变圆，形似透明软骨细胞。本研究通过VG、PTAH和Masson三色等特殊染色证明，混合性乳腺瘤组织中的软骨组织是来源于瘤间质的结缔组织。软骨组织的外膜与瘤间质中的结缔组织相互延续，软骨细胞是由成纤维细胞化生而来。通过PTAH染色，发现肿瘤组织中的肌组织和肌上皮细胞很少，而大量条索状的组织则为瘤间质中的胶原纤维，后者与软骨相延续。从细胞的分化程度来看，肌上皮细胞的分化程度高，化生的可能性较小；而结缔组织的分化程度低，其内常潜有大量原始间叶细胞，这是化生为软骨组织或骨组织的主要成分。因此，笔者认为，混合性乳腺瘤中的软骨组织来源于瘤间质中的结缔组织，而不是肌上皮细胞。

3.2混合性乳腺瘤易发生癌变

研究证明，犬乳腺肿瘤中，恶性肿瘤的发病率较高，可高达45%或50%以上［2-4］。本研究通过多种染色对混合性乳腺瘤组织进行了详细观察，发现混合性乳腺瘤是一种极易恶变的肿瘤，或者说具有恶变的潜质。混合性乳腺瘤虽然是一种良性肿瘤，但其内的组织成分多样，且在不断的分裂、化生和增殖。在对多种瘤组织成分的观察中，作者注意到在乳腺上皮增生较快的部位，常形成一些腺腔较小甚至无腺腔的原始的乳腺样组织。此处常能检出较多的腺上皮分裂像，具有恶性肿瘤的一些特点。因此，混合性乳腺瘤的这种不断进行分裂、增生和化生的动态变化，很易导致肿瘤组织的恶变。

3.3多发性混合性乳腺瘤继发于单纯性乳腺瘤

单纯性乳腺瘤多是良性肿瘤，主要由腺泡和导管部异常增生所组成，腺瘤中的间质比较发达，小叶结构比较明显［2，4，12］。乳腺瘤的腺泡腔大小不一，腺上皮多呈立方形。腺导管增生，管腔扩张，上皮多呈柱状。这些变化多见于混合性乳腺瘤的初期。随着肿瘤性病变的持续发生，腺上皮和导管上皮常出现乳头状增生，形成乳头瘤样的构造。肿瘤间质的大量增生，形成大量条索状的胶原纤维束，用普通染色时很难将之与肌纤维相互区别。随着大量间质的增生，部分腺导管的受压迫而闭锁，使得腺腔中的分泌物排出障碍，于是大量的分泌物在腺腔或导管腔中积聚，而使腺泡腔或导管腔不断扩张，继之形成内含大量分泌物及脱落上皮的腺囊肿。当大量瘤间质中结缔组织不断增生时，常化生而形成软骨组织，甚至骨组织。本研究所观察的多发性乳腺瘤，后两对和前两对大的腺瘤均为混合性乳腺瘤，而中间的两个小乳腺瘤的病理组织学检查为单纯性乳腺瘤。这说明单纯性乳腺瘤发展为混合性乳腺瘤的过程，是病情加重的形态学表现。

由此可见，单纯性乳腺瘤可自然过度为混合性乳腺瘤。如果病因不除，混合性乳腺瘤可继续发展而导致恶变。

参考文献：

［1］ Saba C F l，Rogers K S，Newman S J，et al.Mammary gland tumors in male dogs［J］.J Vet Intern Med，2007，21（5）：1056-1059.

［2］ 王彤光，陈 谊，侯加法.犬乳腺肿瘤显微和超微病理组织学观察［J］.西北农业学报，2010，19（4）：33-36.

［3］ 闰妮娜，冯士彬，杨雪艳，等.犬乳腺肿瘤的病理分析和标志物测定［J］.畜牧与兽医，2013，45（10）：82-85.

［4］ 崔 文，向 毅，冯国锋，等.10例犬乳腺瘤病理组织学分析［J］.中国兽医杂志，2009，45（2）：66-67.

［5］ Santos A A，Lopes C C，Marques R M，et al.Matrix metalloproteinase-9expression in mammary gland tumors in dogs and its relationship with prognostic factors and patient outcome ［J］.Am J Vet Res，2012，73（5）：689-697.

［6］ Gracanin A，Voorwald F A，van Wolferen M，et al.Marginal activity of progesterone receptor B（PR-B）in dogs but high incidence of mammary cancer［J］.J Steroid Biochem Mol Biol，2014，144（2）：492-499.

［7］ Mainenti M，Rasotto R，Carnier P，et al.Oestrogen and progesterone receptor expression in subtypes of canine mammary tumours in intact and ovariectomised dogs［J］.Vet J，2014，202（1）：62-68.

［8］ 王彤光，陈 谊，侯加法.60例犬乳腺肿瘤病例的临床调查与分析［J］.上海农业学报，2012，28（3）：52-54.

［9］ Rismanchi S，Yadegar O，Muhammadnejad S，et al.Expression of vimentin filaments in canine malignant mammary gland tumors：A simulation of clinicopathological features of human breast cancer［J］.Biomed Rep，2014，2（5）：725-728.

［10］ Radmehr S，Javad J，Nahid A.Diagnosis，classification and grading of canine mammary tumours as a model to study human breast cancer：a clinico-cytohistopathological study with environmental factors influencing public health and medicine ［J］.Cancer Cell Int，2013，13：79-84.

［11］ 张红梅，韩 聃，包海荣.犬乳腺瘤治疗的观察分析［J］.吉林畜牧兽医，2013（6）：30-31

［12］ 刘清华.15例犬乳腺肿瘤的发病情况与病理组织学分析［D］.陕西杨凌：西北农林科技大学，2013.

［13］ 阮 涌，嵇辛勤，文 明，等.一例犬乳腺纤维肉瘤的诊治体会［J］.动物医学进展，2012，33（4）：135-136.

［14］ 佘锐萍.动物病理学［M］.北京：中国农业出版社，2007：54-55.

［15］ 陈怀涛，赵德明.兽医病理学［M］.北京：中国农业出版社，2013：1399-1041.

Differentiation of Multiple Mixed Mastadenoma in Dogs by Special Staining

LI Rui-zhen，SONG Gao-jie，ZHAO Jun-jiang，LIANG Ying-ying，HAO Jun-hong，MIAO Pan-pan，PAN Yao-qian
（College of Animal Science，Henan Institute of Science and Technology，Xinxiang，Henan，453003，China）

Abstract：To identify the morphological structure and incidence relationship in multiple mixed mastadenoma of dogs，two tumor cases were observed and analyzed pathologically in detail by special staining.The results revealed that in the tissues of multiple mixed mastadenoma，except for simple mastoncus structure，there were the structures of papilloma and cystadenoma，there were a mass of hyperplastic connective tissues in tumor mesenchyme，formed cord-like collagenous fiber and cartilaginous tissue by the metaplasia. Breast cancer-like block masses were examined in tumor tissue when the epithelia of breast tumor were rapidly growing.In conclusion，multiple mixed mastadenoma might be secondary onset from simple mastadenoma and was an aggravating manifestation.Its cartilaginous tissue came from the metaplasia of connective tissue.Multiple mixed mastadenoma was apt to malignant transformation because there were a lot of continuous proliferative cells and the breast cancer-like tissue masses were found in its tissues.

Key words：dog；multiple mixed mastadenoma；special staining；histopathology

作者简介：李瑞珍（1990-），女，河南中牟人，硕士研究生，主要从事动物病理学研究。＊通讯作者

基金项目：河南省科技攻关项目（132102110118）

收稿日期：2014-11-12

中图分类号：S858.292；S857.26

文献标识码：B

文章编号：1007-5038（2015）06-0178-05