接种不同数量柔嫩艾美耳球虫卵囊对雏鸡的致病作用

郭全海，赵耀光（商丘职业技术学院动物工程系，河南商丘476000）



接种不同数量柔嫩艾美耳球虫卵囊对雏鸡的致病作用

郭全海，赵耀光
（商丘职业技术学院动物工程系，河南商丘476000）

摘 要：以15日龄罗曼蛋雏为对象，研究接种不同剂量柔嫩艾美球耳虫（E.tenella）卵囊对雏鸡的致病作用。试验共设4个组，其中3个球虫卵囊感染组和1个非感染对照组，球虫感染组鸡只分别接种E.tenella孢子化卵囊1×104、5×104、8×104个/只。结果显示，感染1×104、5×104、8×104个/只组的平均血便记分分别为0.750、1.825、2.500，致死率分别为10%、30%、60%，盲肠病变值分别为13.0、22.0、28.0，平均增重率分别为75%、56%、49%。试验表明，E.tenella卵囊具有很强的感染性，致病作用与其数量有关。

关键词：柔嫩艾美耳球虫卵囊；增重率；致死率；血便记分

鸡球虫病是由艾美耳属（Eimeria）球虫寄生于鸡肠道上皮细胞引起的消化道寄生虫病，主要侵害和破坏的是鸡的盲肠部位［1］。它是一种严重威胁养鸡业的常见病，对雏鸡危害很大，轻则造成鸡只的生长受阻，发育迟缓，生产性能下降；重则造成鸡只的大批死亡，尤其是雏鸡阶级，以15日龄～50日龄的雏鸡发病率为最高［2］，发病率可达50%～70%，病死率可高达80%，给养殖生产带来了巨大的经济损失［3-6］，全世界每年由鸡球虫病造成的损失达数10亿美元［7］。柔嫩艾美耳球虫是目前发现的9种中致病力最强的一种，而其卵囊也有较强的感染性［8］。不同数量的球虫卵囊感染鸡只的致病强度不相同，因而在研究中卵囊的接种剂量十分关键。为了能够比较准确地把握卵囊的接种剂量，进而可用来评价药物的抗球虫效果，本试验接种不同剂量卵囊对鸡致病作用进行研究。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1试验用动物 120只1日龄罗曼蛋用健康雏鸡购自开封正大种鸡场，分笼饲养于经严格消毒的笼舍中，按NRC（1994）禽的营养标准［9］，自配无抗球虫药饲料和抗菌药物的饲料，鸡只自由采食、饮水。

1.1.2球虫卵囊 纯种柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）卵囊由商丘市畜牧局动物疫病预防控制中心提供。试验前人工感染无球虫鸡继代1次，获得试验用卵囊，29℃孢子化，4℃保存备用。

1.1.3试剂及仪器 重铬酸钾（K2Cr2O7）、离心沉淀机为上海通用分析仪器厂产品；恒温振荡器为常州恒睿仪器设备厂产品；电冰箱为青岛海尔公司产品；显微镜为上海光学仪器厂产品；60目铜筛、玻璃棒、烧杯、滴管及三角烧瓶等。

1.2方法

1.2.1试验分组及处理 13日龄时，选择80只体重相近的健康鸡只，并做粪便化验确定未感染球虫，随机分为4组，每组20只。其中前3组为感染组，分别标记为Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组；第4组为非感染对照组，标记为Ⅳ组。15日龄时，Ⅰ组、Ⅱ组及Ⅲ组鸡只每只分别接种E.tenella孢子化卵囊1×104、5× 104、8×104个，Ⅳ组不接种卵囊。接种球虫后每天称重，观察和记录各组鸡的发病情况、临床症状。感染后第4天开始每天检查粪便，记录血粪情况，同时进行克粪卵囊计数，第8天时剖检所有试验鸡，统计增重率、致死率及病变值［10］。

1.2.2判定标准

1.2.2.1相对增重率 相对增重率（%）=（感染组的平均增重/不感染组的平均增重）×100%

1.2.2.2致死率 致死率=（因球虫感染死亡鸡只数/组内总鸡数）×100%

1.2.2.3血便记分 接种攻毒卵囊后第4天至第8天，参照Morehouse（1970）［11］的方法，按以下标准记分。0分：100%粪便不带血；1分：1%～25%粪便带血；2分：26%～50%粪便带血；3分：51%～75%粪便带血；4分：76%～100%粪便带血。

1.2.2.4病变记分 参照Johnson和Reid （1970）［12］的标准，根据剖检后肠道病变的严重程度记分。0分：无肉眼病变；1分：盲肠壁有很少散在的瘀血点，肠壁不增厚，内容物正常；2分：病变数量较多，盲肠内容物明显带血，盲肠壁稍增厚，内容物正常；3分：盲肠内有多量血液和肠芯，血凝块可见灰白色干酪样的香蕉型块状物，盲肠壁明显增厚，盲肠中粪便含量少；4分：盲肠中充满大量的血液和肠芯，盲肠肿大，肠芯中含有粪渣或不含，因球虫感染死亡鸡也记为4分。

1.2.2.5卵囊排出情况 按照McMaster's法计算克粪便卵囊数（oocyst per gram，OPG），在攻毒后的第4天至第8天收集粪便，将收集到的粪便搅匀后，称取2g，加适量饱和食盐水搅匀，用60目网筛充分过滤。将滤液稀释至60mL，然后用麦氏计数板记数，最后求其平均值。如果卵囊的数量太多，则按照梯度稀释，然后计数，再乘以稀释倍数。

2　结果

2.1接种不同数量E.tenella卵囊对雏鸡发病情况的影响

在整个试验中，非感染对照组精神状态、采食和饮水均正常。卵囊接种后第4天，Ⅱ组及Ⅲ组的鸡开始拉出水样稀粪，下午即有血便排出。卵囊接种后第5天和第6天，接种Ⅱ组及Ⅲ组的鸡只表现出精神状况差、沉郁、嗜睡、畏寒扎堆、翅膀下垂、消瘦、采食量减少或食欲废绝等严重症状，排出大量带黏液性血便，并出现死亡，而接种Ⅰ组鸡只的精神状态相对接种Ⅱ组及Ⅲ组要好。在接种后的第4天，感染E.tenella卵囊Ⅱ组和Ⅲ组鸡只开始排出血便，血便记分为1；第5天接种Ⅰ组鸡只也开始出现血便，血便记分为1；接种Ⅱ组鸡只血便记分为2，接种Ⅲ组的鸡只血便记分达到了3。第6天感染各组的血便记分达到最大，到第7天，接种Ⅰ组和Ⅱ组血便记分分别下降到0和1，而接种Ⅲ组血便记分仍然保持在3。接种E.tenella卵囊鸡只的平均血便记分以Ⅲ组鸡只最高，达到了2.500，而接种Ⅰ组的平均血便记分最低，仅为0.750（表1）。

表1　各组试验鸡血便记分结果Table 1 The bloody feces scores in experimental chicks after E.tenellainoculation

2.2雏鸡接种E.tenella卵囊后每克粪便中卵囊数量

接种球虫后第5天，卵囊开始从粪便中排出，第6天达到高峰，第7天和第8天开始下降。在卵囊排出量上和接种球虫的数量并不成正相关的关系，其中接种Ⅰ组鸡只排出的卵囊数最高，第6天时排出的粪便卵囊数量达到0.813×106个/g，而接种Ⅲ组的鸡只排出的卵囊数最低，仅仅为0.689×106个/g（表2）。

表2　雏鸡接种球虫卵囊后每克粪便中卵囊数量Table 2 The number of oocysts per gram feces（OPG）in experimental chicks after E.tenellainoculation OPG，×106/g

2.3不同数量E.tenella卵囊接种对雏鸡平均增重和盲肠病变的影响

接种E.tenella卵囊的鸡只的生长严重受阻，平均增重显著低于不感染对照组（88.60g），其中，Ⅲ组平均增重最低，仅仅为42.98g，相对增重率为49%，其次为Ⅱ组和Ⅰ组鸡只，从剖检鸡只的盲肠病变程度可以看出：Ⅲ组的盲肠病变严重，盲肠病变值达到了28.0。感染Ⅰ组盲肠病变值在攻毒组中最低为13.0，而Ⅱ组盲肠病变值介于两者之间，为22.0（表3）。

表3　接种不同剂量E.tenella卵囊对雏鸡平均增重和盲肠病变记分的影响Table 3 Effects of inoculation with different doses of E.tenellaoocysts on the weight gain and cecal lesion score in experimental chicks

2.4接种不同数量E.tenella卵囊对雏鸡致死率的影响

由表4可以看出，3个剂量的球虫卵囊感染后均有鸡只死亡，其中以感染E.tenella卵囊最多的Ⅲ组致死率最高，达到60%。随着接种剂量降低，球虫感染鸡的致死率降低，接种最少卵囊的低剂量Ⅰ组致死率仅仅为10%。试验结果还表明鸡只感染球虫后死亡高峰为感染后第5天和第6天，到第7天致死率开始下降，到第8天后不再有鸡只死亡。

表4　接种不同剂量E.tenella卵囊对雏鸡致死率的影响Table 4 Effects of inoculation with different doses of E.tenellaoocysts on mortality in experimental chicks

3　讨论

鸡柔嫩艾美耳球虫为肠道性寄生虫，主要引起盲肠上皮细胞破裂，肠道出血，盲肠组织病理性损伤。在试验中，雏鸡感染1×104、5×104、8×104个孢子化卵囊均能引起不同程度的临床症状，其中以接种5×104个/只、8×104个/只的剂量组的症状较为严重。试验发现球虫感染鸡的血便记分以第5天和第6天最高，这是因为球虫进行了第2代裂体生殖，破坏大量的肠上皮细胞所致。同时，感染球虫后的第5天和第6天鸡只的致死率也是最高的，其中以接种剂量为8×104个/只组的致死率最高，达到60%，低剂量卵囊接种组的致死率最低，仅为10%。可见球虫感染引起肠上皮细胞大量破坏，脱落，消化代谢紊乱，鸡只食欲降低，甚至废绝，自体中毒而死亡。

试验结果还表明，接种高剂量的球虫孢子化卵囊对盲肠病变的损伤，大于接种剂量低的组，因此接种低剂量卵囊组的病变记分最低。但是在卵囊排出量上，试验发现接种球虫的粪便排出卵囊数量并不成正相关的关系，其中接种1×104个/只卵囊组排出的卵囊数最高，第6天时排出的粪便卵囊数量达到0.812×106个/克，而接种8×104个/只卵囊组排出的卵囊数最低，仅仅为0.688×106个/克。可能是接种卵囊的量太大，出现了“拥挤”效应［8］，球虫在鸡只盲肠内相互影响生长，所以高剂量接种E. tenella卵囊，鸡只的死亡率和盲肠病变率高，但盲肠内容物中的克卵囊数和卵囊排出量低。与对照组相比，感染鸡增重率不高，可能球虫损伤肠道后，引起鸡体强烈的应答反应所致［13］。

综合考虑，我们认为感染E.tenella卵囊5× 104个/只的试验组，致死率为30%，血便记分1.825、卵囊排出量0.769×10、盲肠病变值22.0，可以选择作为球虫药物疗效试验研究的接种剂量，也可为此类试验提供有价值的参考依据。

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文献综述

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Study on Pathogenicity of Inoculation with Different Number of E.tenella Oocysts in Chicks

GUO Quan-hai，ZHAO Yao-guang
（Animal Engineering Department，Shangqiu Polytechnical College，Shangqiu，Henan，476000，China）

Abstract：The experiment studied on pathogenicity of inoculation with different number of E.tenella oocysts in 15days old Roman chicks.The test consisted of 4groups：the 3 E.tenella oocyst infected groups and 1control group，E.tenella oocysts were inoculated respectively with 1×104，5×104，8×104in each chicks for infected one.The results showed average bloody feces scores were 0.750，1.825，2.500；mortality were 10%，30%，60%，cecal lesion values were：13，22，28；average weight gain rates were 75%，56%，49%，respectively in three infected groups.The conclusion showed that E.tenella oocysts had very strong infectivity，and pathogenicity was relevant to its number.

Key words：E.tenellaoocyst；weight gain rate；mortality；bloody feces score

作者简介：郭全海（1980-），男，河南淮阳人，讲师，硕士，主要从事分子生物学、免疫学及动物疫病防治等研究。

基金项目：商丘市科技计划项目（20122023）

收稿日期：2015-01-07

中图分类号：S852.723

文献标识码：A

文章编号：1007-5038（2015）07-0074-04