S. longicaudum X—7线虫对草坪地下害虫小云斑鳃金龟幼虫的致病力

范芳芳++张宗豪++徐成体

摘要：室内测定了不同浓度S. longicaudum X-7线虫对小云斑鳃金龟不同龄期幼虫的侵染效果，结果表明，线虫侵染剂量、侵染时间对致死小云斑鳃金龟幼虫具有重要意义。该线虫对小云斑鳃金龟1龄幼虫的感染活性较高，致死时间主要集中在48 h内，当线虫浓度为3 000 IJs/mL时，线虫对1龄小云斑鳃金龟幼虫的致死率可达92.86%；该线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率较低，当线虫浓度为2 500 IJs/mL时，致死率仅为40%，当线虫剂量为3 000、3 500 IJs/mL时，该线虫对1龄幼虫的致死率均极显著高于3龄幼虫。通过提高线虫用量、延长致死时间，在小云斑鳃金龟幼虫1龄期可达到预期的防治效果。

关键词：线虫；小云斑鳃金龟；致死率

中图分类号： S433.5文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）09-0162-02

蛴螬（Polyphylla gracilicornis）为危害青海省西宁地区草坪的主要地下害虫，主要咬食草坪草根部，导致草坪草枯黄，且草坪地下害虫蛴螬的隐蔽性很强，使用化学药剂往往难以取得理想的防治效果，而且容易导致“3R”问题的产生，加上人们对草坪开发利用强度越来越大，极大地限制了化学药剂的使用。西宁地区蛴螬危害极为严重，最高可达37头/m2，主要以小云斑鳃金龟（Polyphylla gracilicornis）幼虫为主，S. longicaudum X-7线虫是安全、高效的生物制剂，能专性寄生并快速杀死昆虫，目前在我国南方地区已将其成功应用于草坪地下害虫的防治[1-3]。本研究探讨S. longicaudum X-7线虫对小云斑鳃金龟幼虫的致病力，旨在为开发利用草坪提供依据。

1材料与方法

1.1供试线虫

由广东省昆虫研究所提供。

1.2供试害虫

小云斑鳃金龟幼虫采集于西宁地区周边草坪地，选用虫龄大小一致的小云斑鳃金龟幼虫。

1.3供试线虫的制备与计量

将贮存S. longicaudum X-7线虫的海绵块取出后放入烧杯中，用灭菌水反复冲洗，得到线虫稀释液。用微量取样器吸取线虫液25 μL，滴于培养皿上，镜检解剖镜视野内的线虫数，计算线虫浓度。

1.4方法

1.4.1不同侵染剂量对小云斑鳃金龟1龄幼虫的毒力测定制备S. longicaudum X-7线虫梯度浓度溶液，浓度分别设置为2 000、2 500、3 000、3 500 IJs/mL。

选取虫龄一致的 1龄幼虫，使用硬塑料杯，每杯底垫2层中速滤纸，滴加无菌水使滤纸保持湿润，每孔放入1头1龄幼虫，并放入数块马铃薯，每孔滴加1 mL相应浓度S. longicaudum X-7线虫至虫体上，每处理 10头 幼虫，重复3次，设置清水对照。24 h观察1次，统计死虫数目，及时补充更换饲料。饲养条件：温度为（25± 2） ℃，相对湿度为80%～85%，无光照。连续观察144 h，记录幼虫的死亡数目。

1.4.2不同侵染剂量对3龄幼虫的毒力测定制备线虫梯度浓度液配，浓度设置为1 000、1 500、2 000、2 500、3 000 IJs/mL。选取虫龄一致的 3龄幼虫，使用硬塑料杯，每孔垫2层中速滤纸，滴加无菌水使滤纸保持湿润，每孔放入1头3龄幼虫，并放入数块马铃薯，每孔滴加1 mL相应浓度S. longicaudum X-7 线虫至虫体上，每处理 5头幼虫，重复3次，设置清水对照，及时补充更换饲料。饲养条件：（25± 2） ℃，相对湿度为80%～85%，无光照。连续观察10 d，观察并记录幼虫的死亡数目。

2结果与分析

2.1S. longicaudum X-7线虫不同侵染剂量对小云斑鳃金龟1龄幼虫的致死效果

由表1可知，144 h线虫剂量为2 000、2 500、3 000、3 500 IJs/mL 时，S. longicaudum X-7对小云斑鳃金龟1龄幼虫的较正死亡率分别为50.00%、53.58%、82.14%、9286%。线虫剂量为2 000、2 500 IJs/mL时，线虫对小云斑鳃金龟1龄幼虫的致死率差异不显著；线虫剂量为 3 000、3 500 IJs/mL时，S. longicaudum X-7线虫对小云斑鳃金龟1龄幼虫的致死率差异不显著，但显著高于线虫剂量为2 000、2 500 IJs/mL 时的致死率。当线虫剂量大于 3 000 IJs/mL 时，线虫对小云斑鳃金龟1龄幼虫具有很高的致死率。

由图1可知，24 h线虫剂量为2 000、2 500、3 000、3 500 IJs/mL 时，S. longicaudum X-7线虫对小云斑鳃金龟1龄幼虫的致死率分别为20.69%、27.59%、55.18%、4828%，其中3 000 IJs/mL时，线虫对小云斑鳃金龟1龄幼虫的致死率极显著高于线虫剂量为2 000、2 500 IJs/mL时的致死率。48 h线虫剂量为2 000、2 500、3 000、3 500 IJs/mL时，线虫对小云斑鳃金龟1龄幼虫的致死率分别为37.93%、41.38%、72.41%、82.76%，其中线虫剂量为3 000、3 500 IJs/mL 时的致死率极显著高于线虫剂量为2 000、2 500 IJs/mL 时的致死率。144 h线虫剂量为2 000、2 500、3 000、3 500 IJs/mL时，线虫对小云斑鳃金龟1龄幼虫的致死率分别为50.00%、53.58%、82.14%、92.59%，其中线虫剂量为3 000、3 500 IJs/mL时小云斑鳃金龟1龄幼虫的致死率极显著高于线虫剂量为2 000、2 500 IJs/mL时的致死率。可见在各个时间段线虫浓度大对小云斑鳃金龟1龄幼虫的致死率也较高，线虫对小云斑鳃金龟1龄幼虫的致死时间主要集中在48 h之内。

2.2S . longicaudum X-7线虫不同侵染剂量对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死效果

由表2可知，第10天线虫剂量为2 000、2 500、3 000、3 500、4 000 IJs/mL时，S. longicaudum X-7线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率分别为26.27%、26.67%、33.33%、40.00%、40.00%。线虫剂量为3 000、3 500、4 000 IJs/mL时，线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率显著高于线虫剂量为 2 000、2 500 IJs/mL时线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率，且随着线虫浓度的增加，线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率有所提高，直至线虫浓度为3 500 IJs/mL时，致死率最高达40%，线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率不再随浓度的增加而提高。S. longicaudum X-7线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率比较低，即S. longicaudum X-7线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的侵染力较低。

由图2可知，当第2天线虫剂量为1 000、2 000、3 000 IJs/mL 时，S. longicaudum X-7线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率分别为13.33%、26.67%、26.67%，线虫剂量为2 000、3 000 IJs/mL时线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率高于线虫剂量为1 000 IJs/mL时的致死率，差异不显著。第6天线虫剂量为1 000、2 000、3 000 IJs/mL时，对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率分别为26.67%、33.33%、40.00%，线虫剂量为3 000 IJs/mL时，线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率高于线虫剂量为2 000 IJs/mL时的致死率，线虫剂量为2 000 IJs/mL时线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率高于线虫剂量为 1 000 IJs/mL 时的致死率，但差异不显著。第10天当线虫剂量为1 000、2 000、3 000 IJs/mL时，线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率分别为26.70%、40.00%、4000%，线虫剂量为3 000、2 000 IJs/mL 时线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率极显著高于线虫剂量为1 000 IJs/mL时的致死率。第2—6天，线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率呈缓慢提高趋势，第6—10天，线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率几乎不再提高。

2.3S. longicaudum X-7线虫对不同龄期小云斑鳃金龟幼虫的侵染效果

由图3可知，线虫剂量为2 000 IJs/mL时，线虫对小云斑鳃1龄幼虫、3龄幼虫的致死率分别为53.33%、26.67%。当

线虫剂量为2 500 IJs/mL时，S. longicaudum X-7线虫对小云斑鳃金龟1龄、3龄幼虫的致死率分别为56.67%、26.67%，当线虫剂量为3 000 IJs/mL时，线虫对1龄、3龄幼虫的致死率分别为83.33%、40.00%，其中线虫对小云斑鳃1龄幼虫的致死率极显著高于3龄幼虫。当线虫剂量为3 500 IJs/mL时，线虫对小云斑鳃1龄、3龄幼虫的致死率分别为93.33%、40.00%，其中线虫对小云斑鳃1龄幼虫的致死率极显著高于3龄幼虫，可见随着小云斑鳃金龟幼虫虫龄的增长，其抵抗线虫的能力也在逐渐增强，说明龄期是影响线虫侵染小云斑鳃金龟幼虫的重要因素。

3结论与讨论

本研究测定了不同浓度S. longicaudum X-7线虫对小云斑鳃金龟1龄、3龄幼虫的致死效果，结果表明，增大线虫浓度或延长施用时间对小云斑鳃金龟1龄、3龄幼虫都会产生更高的致死率。刘树森研究表明，不同线虫品系对不同龄期线虫具有不同的侵染效果[4]。本研究结果表明，S. longicaudum X-7线虫对小云斑鳃金龟1龄幼虫的侵染率最高可达92.86%，极显著高于对3龄幼虫的侵染率，且线虫对小云斑鳃1龄幼虫的致死率主要在48 h内，之后致死率变化缓慢。线虫对小云斑鳃金龟3龄幼虫的致死率较低，第10天浓度为 3 500 IJs/mL 时，致死率最高可达40%，当线虫浓度增大到 4 000 IJs/mL 时，致死率不再变化，致死效果不明显，因此选用线虫防治时应根据小云斑鳃金龟幼虫的生物学特性在1龄期进行防治。

参考文献：

[1]丛斌，刘维志，杨怀文. 昆虫病原线虫研究和利用的历史、现状与展望[J]. 沈阳农业大学学报，1999，30（3）：343-353.

[2]Georgis R. Commercialization of Steinernematid and Heterorhabditid entomopathogenic nematodes[J]. Brighton Crop Prot Conf Insectic Fungic，1990，1：275-280.

[3]Zimmerman R J，Cranshaw W S. Compatibility of three entomogenous nematodes（Rhabditida） in aqueous solutions of pesticides used in turfgrass maintenance[J]. J Econ Entomol，1990，83：97-100.

[4]刘树森. 昆虫病原线虫的筛选鉴定及其对蛴螬的致病性研究[D]. 北京：中国农业科学院，2009.欧克芳. 再力花叶枯病病原菌鉴定[J]. 江苏农业科学，2015，43（9）：164-165.