不同肺炎衣原体抗体检测方法的临床比较

李　航，马春燕，丁真真

(开封市中心医院 检验科，河南 开封 475000)

不同肺炎衣原体抗体检测方法的临床比较

李航，马春燕，丁真真

(开封市中心医院 检验科，河南 开封 475000)

摘要：目的比较临床常用3种肺炎衣原体(CP)血清学诊断方法并分析其应用价值。方法分别采用间接荧光法(IIF)，酶免法(ELISA)及胶体金法对采集的180份血清标本进行肺炎衣原体IgM抗体的测定，并对结果进行比较分析。结果应用 SPSS 17.0统计软件进行数据分析，卡方检验间接荧光法与酶免法结果比较，χ2=118.5，P<0.05，差异有统计学意义；与胶体金比较，χ2=26.9，P<0.05，差异有统计学意义。Spearman分析CP感染阳性血清抗体滴度与病情分级之间关系，r=0.76，P<0.05，二者呈正相关。结论3种免疫学方法对血清CPIgM抗体检测结果两两比较均有差异，胶体金法和酶免法由于方法简单，成本低廉更适合临床大批量筛查及流行病学调查；间接荧光法特异性强，且抗体滴度和病情呈正相关，依此可帮助临床医师将临床症状与实验室结果相结合，对疾病病情进行更准确的分级，指导临床制定个体化诊疗方案，从而为得到良好愈后效果提供合理依据。

关键词：肺炎衣原体;间接免疫荧光法；酶免法；胶体金法

肺炎衣原体(chlamydia pneumoniae, CP)是常见社区感染的呼吸道病原体之一[1]，起病缓慢，老人与幼儿较成人易感染该病原体[2]，临床常表现为咽痛、咳嗽、咳痰、发热等，一般症状较轻。但在有基础疾病的前提下，CP感染不但可以引起非典型肺炎，还可引起神经、循环等肺外其他系统的并发症，如心内膜炎、脑炎、中耳炎、关节炎、甲状腺炎等。肺炎衣原体肺部感染的临床症状及X线表现均无特异性，难以和其他病原体感染引起的非典型肺炎相区别，尤其是肺炎支原体肺炎，故确诊有赖于实验室诊断。最可靠的方法是采集咽拭子、气管、支气管分泌物及肺泡灌洗液等做病原体的培养，但由于肺炎衣原体的培养条件高，一般医院实验室很难开展该项检测。另外，可应用PCR方法采用特异性引物，对基因序列进行扩增定量检测，但对标本采集有严格要求，质量控制较难把握，易出现假阳性或假阴性结果。因此，目前临床实验室常采用血清免疫学方法对肺炎衣原体特异性抗体进行检测，用以肺炎衣原体感染的辅助诊断。我国临床实验室常用的3种检测肺炎衣原体抗体的方法分别为间接免疫荧光法(IIF)、酶免法(ELISA)及胶体金法。我们收集180份临床诊断疑似为肺炎衣原体致病的呼吸道感染患者血清标本，分别采用3种方法进行检测，并对结果分析比较，所得结果如下。

1材料和方法

1.1　仪器和试剂

全自动酶标仪2010型(郑州安图生物)；全自动洗板机(美国热电)；荧光显微镜(德国莱卡)；呼吸道病原体谱检测试剂盒(IIF，德国欧蒙)；肺炎衣原体IgM抗体检测试剂盒(ELISA，德国欧蒙)；肺炎衣原体IgM抗体检测试剂盒(胶体金，山东潍坊康华生物制品公司)。

1.2　方法

收集2013年10月至2014年4月期间，以疑似肺炎衣原体感染为诊断住院的呼吸道患者血清标本180份，于入院第一日空腹采集静脉血3 mL，分离血清于-20 ℃冰冻保存。采用上述3种试剂对同一份标本分别进行检测，严格按照试剂盒说明书进行实验操作并判读结果。

1.3　统计学分析

应用 SPSS 17.0统计软件对所得结果进行分析，计数资料采用χ2检验，P<0.05，差异有统计学意义，资料采用Spearman等级相关分析，P<0.05，为正相关。

2结果

以间接荧光法所得结果作为金标准，分别对酶免法和胶体金法的检测结果进行评价，得出胶体金法阳性符合率为93.7%，阴性符合率为52.2%，假阳性率为2.32%，假阴性率为68.1%；阳性似然比为13.8，阴性似然比为0.701，总符合率为63.3%，二者结果比较，差异有统计学意义(P<0.05)。酶免法阳性符合率92.3%，阴性符合率11.2%，假阳性率8.13%，假阴性率10.6%；阳性似然比10.9，阴性似然比0.115，总符合率90.5%，二者结果比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1、表2。

表1　3种不同方法检测血清中CPIgM抗体结果比较

注:*与ELISA法比较，χ2= 118.5，P<0.05；△与胶体金法比较，χ2= 26.9，P<0.05。

依据临床症状表现不同，将患者病情分3级：①Ⅰ级(轻度)：仅表现为呼吸道症状、体征，胸部X线无明显改变。②Ⅱ级(中度)：以呼吸道症状、体征为主，胸部X线显示肺部有明显病理改变，呈双侧间质和肺泡浸润。③Ⅲ级(重度)：除临床表现以外，同时伴有严重肺外并发症。对84例已确诊病例进行临床病情分级，并采用Spearman分析血清抗体滴度与病情分级之间相关性，结果见表3。

CP感染的84例患者中按病情分级统计可见Ⅰ级(轻度)48例(54．3%)，Ⅱ级(中度)19例(24．3%)，Ⅲ级(重度)17例(21．4%)。CPIgM抗体滴度1∶32 45例(53.5%)，滴度1∶100 6例(7.1%)，滴度1∶320 21例(25%)，滴度1∶1 000 12例(14.2%)。应用Spearman等级相关分析，血清CP抗体滴度高低与患者的病情分级呈正相关(r=0.76，P<0.05)。

表2　3种方法评价指标的比较(%)

表3　病情分级程度与抗体滴度相关性分析

注：r=0.76,P<0.05。

3讨论

肺炎衣原体(chlamydia pneumoniae, CP)是一种严格寄生于人类真核细胞内的病原微生物，主要经人-人之间的呼吸道分泌物传播，在半封闭的环境中，如密切接触的家庭、学校、医院等人群密集的公共场所易引起小范围的流行。CP感染后可激活机体免疫系统产生特异性的免疫应答，主要是可激活B淋巴细胞生成IgM、IgG等抗体，但这种免疫效应持续时间短，保护性弱，在机体感染肺炎衣原体后不能获得终身免疫，临床则表现为反复持续感染或隐性感染[3-4]。

CP感染的潜伏期为15～23 d，初期常引起上呼吸道感染，常表现为发热、干咳、咽痛、头痛、胸部不适和易疲劳等不典型表现，随病情发展主要引起下呼吸道感染，如支气管炎和肺炎。CP感染不存在器官的特异性，它除引起急慢性呼吸道疾病外，大量研究表明,其与动脉粥样硬化、冠心病、心包炎、关节炎等疾病有关[5],尤其是老年感染患者合并慢性阻塞性肺疾病，心、脑、肾等神经循环系统疾病，代谢病等基础疾病时，临床症状表现则可能严重。近年来，随着实验室诊断技术的发展，肺炎衣原体已明确为社区获得性肺炎(CAP)的非典型病原体之一。有研究报道，在社区门诊以呼吸道感染就诊患者中肺炎衣原体的感染率高达32.6%，远远高于其他国家的统计数据[6]。由于CP感染初期临床症状不典型，常规对症治疗效果欠佳，因此,早期快速准确的实验室诊断，对于正确指导临床医生结合病情，制定合理诊疗方案，减少患者并发症、降低患者住院费用有重要意义。

通过表1数据结果可见，胶体法与酶免法作为临床常用的快速诊断肺炎衣原体感染的检测方法，二者有实验方法成熟简便、试剂成本低、无须专职培训即可在普通实验室开展检测的优点，但其结果与间接荧光法比较还是存在差异。通过表2数据可见，胶体金法阳性似然比值最大(+LR=13.8)，说明此方法所得结果为阳性时为真阳性的概率最大，阳性结果可靠。酶免法阴性似然比值最小(-LR=0.115)，说明此方法结果阴性时为真阴性的可能性最大，所得阴性结果更为可靠且真实。间接荧光法作为金标准，对于采用以上两种方法检测后得出和临床表现不符的异常检测结果，应采用间接荧光法重新判定。以此为据，临床可根据患者实际病情，来选择恰当的实验方法。通过表3数据可见，间接荧光法可以根据镜下观测到的荧光反应强度，来推测患者体内抗体滴度的高低，应用Spearman等级相关统计方法对病情分级和抗体滴度之间进行统计学分析，得出二者之间成正相关，因此，在诊断报告中，可依照抗体滴度的变化来反映病情发展程度，提示临床医师结合患者临床表现制定出个体化的诊疗方案。

参考文献：

[1] Eisolh A A, Niederman M S, Drinka P. Nursing home-acquiredpneumonia:a review of risk factors and therapeutic approaches[J].Curr Med Res Opin,2010,26(12):2 707-2 714．

[2] 谢红梅，胡必杰，马艳，等．1 647例呼吸道感染病原体的IgM抗体检测结果分析[J]．中华医院感染学杂志，2012，22(12)：2 696-2 698．

[3] 莫丽亚，蒋玉莲，邓永超，等．两种肺炎衣原体检测方法的比较研究[J]．实用预防医学，2010，17(11)：2 287-2 288．

[4] Hannu T,Puolakkainen M, Leirisalo-repo M.Chlamydia pneu-moniae as a triggering infection in reactive arthritis[J].R heuma-tology(Oxford),1999,38(5):411-414.

[5] 陈锐，刘伟，刘建平，等．肺炎衣原体肺炎发生的相关危险因素研究[J]．中国现代医生，2011，49(20)：39-40.

[6] 刘志广，齐海宇，郑晓燕，等.发热门诊呼吸道感染患者中的肺炎衣原体感染调查[J]．中国人兽共患病学报，2015，30(5)：418-422.

[责任编辑时红]

Clinical comparative study on detection of chlamydia pneumoniae antibody

LI Hang, MA Chunyan, DING Zhenzhen

(DepartmentofInspection,CentralHospitalofKaifengcity,Kaifeng,Henan475000,China)

Abstract:ObjectiveTo compare the clinical resuls of three kinds of serological diagnosis methods of Chlamydia pneumoniae ( CP ) and analyze its application value.MethodsRespectively by indirect immunofluorescence (IIF), enzyme immunoassay (ELISA) and colloidal gold method of 180 serum samples couected to determine the pneumoniae chlamydia IgM antibody and the results are compared.ResultsUsing SPSS 17.0 statistical software for data analysis, using the chisquare test is more indirect fluorescence methor and enzyme immunoassay results χ2=118.5， P<0.05, the difference is statistically significant; and the gold standard method to compare χ2=26.9， P<0.05, the difference has statistical significance. The relationship between Spearman CP and the severity of the disease was positively correlated with P<0.05， r=0.76.ConclusionThree kinds of immunological methods of serum CPIgM antibody test results of pairwise comparisons were difference, colloidal gold colloid immunochromatography assay and enzyme immunoassay since the method is simple and low cost is more suitable for clinical screening in large quantities and epidemiological investigation; indirect immunofluorescence specificity is strong, and antibody titers and the illness was positively correlated, and help clinicians will be combined with clinical symptoms and laboratory results, of the disease were more accurate classification, clinical guidance formulate individualized treatment plan so as to get a good effect after cure provides reasonable basis.

Key words:chlamydia pneumoniae;indirect immunofluorescence;enzymatic immunoassay;colloidal gold

作者简介：李航(1977-)，女，河南开封市人，主治医师，从事临床免疫学研究工作。

基金项目：2013年开封市科技公关计划项目(130308)。

收稿日期：2015-04-20

文章编号：1672-7606(2015)03-0213-03

中图分类号：R446.61

文献标识码：A