HPLC法测定注射用倍他米松磷酸钠的含量和有关物质

徐 岩

(天津市儿童医院，天津 300074)

1.倍他米松磷酸钠 2.倍他米松 3.碱破坏杂质

1.倍他米松磷酸钠 2.倍他米松



HPLC法测定注射用倍他米松磷酸钠的含量和有关物质

徐 岩

(天津市儿童医院，天津 300074)

目的：建立HPLC法测定不同厂家注射用倍他米松磷酸钠的有关物质及含量，考查了2个规格6批产品的质量差异。方法：采用反相高效液相色谱法，色谱柱为C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(1∶1)，流速为1.0 ml/min，检测波长为254 nm和241 nm。结果：倍他米松磷酸钠在0.66～66.0 μg/ml (0.05%～5.0%)的浓度范围内与其峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9)，倍他米松在0.5～50.0 μg/ml (0.05%～5.0%)的浓度范围内与其峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9)。平均回收率为100.2%，RSD为0.4%(n=9)。结论：本方法结果准确，重复性好，能有效控制产品质量。

注射用倍他米松磷酸钠，有关物质，质量控制，高效液相色谱法

倍他米松磷酸钠为肾上腺皮质激素类药物，具有抗炎、抗过敏和抑制免疫等多种药理作用。其原料及注射液均在《中国药典》2010年版二部中收载[1]，目前注射用倍他米松磷酸钠仅在国家药品标准中收载，国外药典均无收载。本文采用HPLC法对注射用倍他米松磷酸钠的有关物质和含量测定进行了考查，以完善现有标准，保证产品安全、有效和质量可控。

1 仪器与试药

Aglient 1260 Infinity 高效液相色谱仪，倍他米松磷酸钠对照品(中国食品药品检定研究院化学药品检定所，批号100180-200902，按倍他米松磷酸钠计，含量为89.7%)；倍他米松对照品(中国食品药品检定研究院化学药品检定所，批号100118-200403，含量为100.0%)；注射用倍他米松磷酸钠供试品1#、2#(规格：5.26 mg，A药厂提供，批号110314-1、110314-2)；注射用倍他米松磷酸钠供试品3#、4#(规格：2.63 mg，B药厂提供，批号10090701、11041501)；注射用倍他米松磷酸钠供试品5#、6#(规格：5.26 mg，B药厂提供，批号10072001、110120001)；甲醇(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)，磷酸二氢钾(分析纯，天津市赢达稀贵化学试剂厂)，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(1∶1)；流速为1.0 ml/min；含量测定的检测波长为254 nm，有关物质检测波长为241 nm；柱温为40 ℃；进样量为20 μl。理论板数按倍他米松磷酸钠峰计算大于2 000，倍他米松磷酸钠峰与倍他米松峰的分离度为4.5。

2.2 溶液的制备

2.2.1 含量测定用溶液 取样品10支，分别加水适量使内容物溶解，并转移至50 ml(规格：2.63 mg)或100 ml(规格：5.26 mg)量瓶中，用水分次洗涤容器，洗液并入量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取倍他米松磷酸钠对照品适量，同法配制对照品溶液。

2.2.2 有关物质检查用溶液 取本品适量(相当于倍他米松磷酸钠13.2 mg)，置10 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取倍他米松对照品10 mg，精密称定，置10 ml量瓶中，加流动相适量使溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取该溶液和供试品溶液各1 ml，置100 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；精密量取对照溶液1 ml置50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度测试溶液。

2.3 专属性试验 分别取样品适量(相当于倍他米松磷酸钠13.15 mg)，置5个10 ml量瓶中，加水适量振摇使溶解，前3个量瓶分别加1 mol/L盐酸溶液1 ml、1 mol/L氢氧化钠溶液1 ml和30%过氧化氢溶液1 ml，摇匀，60 ℃水浴加热1 h，放冷，调节pH值至中性后用水稀释至刻度，摇匀，分别作为酸破坏、碱破坏和氧化破坏溶液；将第4个量瓶置100 ℃水浴中加热6 h，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，作为高温破坏溶液；将第5个量瓶用水稀释至刻度，摇匀，日光下放置1周，作为光照破坏溶液。分别量取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1。试验表明，样品在酸性及氧化条件下比较稳定；在碱性条件下杂质显著增加；在高温条件下倍他米松峰显著增加；在光照条件下主峰明显下降。在该色谱条件下，倍他米松磷酸钠峰与相邻杂质峰均可以达到良好分离，表明该方法的专属性良好，适宜有关物质检查。

2.4 线性关系试验 精密称取倍他米松磷酸钠对照品13.2 mg和倍他米松对照品10 mg，置同一100 ml量瓶中，加流动相适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液；精密量取适量，加流动相稀释制成浓度为0.66、1.32、6.6、13.2和66.0 μg/ml(按倍他米松磷酸钠计)的系列溶液。分别精密量取上述溶液20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，进行线性回归。结果表明，倍他米松磷酸钠线性方程为：Y=12.83X+18.60(r=0.999 9，n=5)，在0.66～66.0 μg/ml浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系(对应杂质限度为0.05%～5.0%)；倍他米松线性方程为Y=10.51X+13.92(r=0.999 9，n=5)，在0.5～50.0 μg/ml浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系(对应杂质限度为0.05%～5.0%)。

2.5 溶液稳定性试验 将“2.2.2”项下的对照溶液及供试品溶液在室温下分别放置0、2、4、8、12和24 h后依法进样20 μl测定，观察主峰及各杂质峰面积的变化，RSD分别为0.6%和0.4%。试验结果表明对照品溶液及供试品溶液在24 h内基本稳定。

1.倍他米松磷酸钠 2.倍他米松 3.碱破坏杂质

图1 酸破坏(A)碱破坏(B)氧化破坏(C)

高温破坏(D)和光照破坏(E)HPLC色谱图

2.6 重复性试验 取5#样品6份，按“2.2.1”项下方法配制供试品溶液，依法测定，倍他米松磷酸钠的平均含量为101.8%，RSD为0.42%。

2.7 回收率试验 精密称取倍他米松对照品10 mg置100 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照品储备液；分别精密称取空白辅料9份，置50 ml量瓶中，加流动相适量，分别精密加入对照品储备液4、5和6 ml各3份，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。平均回收率为99.8%，RSD为0.4%(n=9)，结果见表1。

表1 回收率试验结果

2.8 样品的测定

2.8.1 含量测定 精密量取“2.2.1”项下供试品溶液和对照品溶液各20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算每瓶的含量，并计算10支的平均含量，即得。按上述方法对6批样品进行含量测定，结果分别为92.9%、93.7%、94.9%、92.9%、101.8%和99.9%。

2.8.2 有关物质检查 照含量测定项下的色谱条件，检测波长为241 nm。精密量取“2.2.2”项下灵敏度测试溶液20 μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的信噪比不小于10，再精密量取“2.2.2”项下供试品溶液与对照溶液各20 μl，分别注入液相色谱仪，记录供试品溶液色谱图至主成分峰保留时间的3倍，色谱图见图2，结果见表2。

1.倍他米松磷酸钠 2.倍他米松

图2 对照品(A)

3 讨论

本方法在同一色谱系统中测定样品的含量及有关物质，但检测波长不同。含量测定的检测波长为254 nm，沿用《中国药典》2010年版二部倍他米松磷酸钠注射液的方法。有关物质检测波长为241 nm，在该波长下杂质检出的个数和杂质量最大。

1 中国药典[].二部.2010:844

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Determination of betamethasone sodium phosphate for injection and its related substances by HPLC

Xu Yan

(Tianjin Children' Hospital,Tianjin 300074)

Objective： To establish an HPLC method for determination of the related substances and the content in betamethasone sodium phosphate for injection and evaluate the quality variations. Methods： An RP-HPLC system,including a C18column (250 mm×4.6 mm，5 μm) and the solution of methanol-0.05 mol/L potassium dihydrogen phosphate(1∶1)(mobile phase), was used. The flow rate of mobile phase was 1.0 ml/min, and detecting wavelengths were 254 nm and 241 nm. Results： The assay displayed a good linearity of betamethasone sodium phosphate over the concentration range of 0.66～66.0 μg/ml(r=0.999 9)，and a good linearity of betamethasone over the concentration range of 0.5～50.0 μg/ml(r=0.999 9).The average recoveries were 100.2% and RSD was 0.4% (n=9). Conclusion： The established method is accurate and simple，and is a guarantee for quality control of betamethasone sodium phosphate for injection.

betamethasone sodium phosphate for injection，related substances，quality control，HPLC

2015-04-07

R927.2

A

1006-5687(2015)05-0012-03