HPLC法测定副鼻窦颗粒中连翘苷的含量

刘彬果，任 涛，张 楠

(解放军第二五四医院，天津 300142)

1.连翘苷



HPLC法测定副鼻窦颗粒中连翘苷的含量

刘彬果，任 涛，张 楠

(解放军第二五四医院，天津 300142)

目的:建立高效液相色谱法测定副鼻窦颗粒中连翘苷的含量。方法:用ZORBAX SB-C18(150 mm×4．6 mm，5 μm)色谱柱；以乙腈-水(23∶77)为流动相，检测波长为278 nm测定连翘苷的含量。结果:连翘苷在7.35～235.2 μg/ml 范围内线性良好，平均回收率为98.4%，RSD为1.23%(n=9)。结论:该法快速、简便、准确、重复性好，结果可靠，可用于副鼻窦颗粒中连翘苷的含量测定，为全面控制副鼻窦颗粒的质量提供可靠方法。

副鼻窦颗粒,连翘苷,高效液相色谱法

副鼻窦颗粒为解放军第二五四医院多年的临床经验方，由金银藤、连翘、蒲公英等10味中药组成，具有清热解毒的功效，临床适用于急、慢性鼻窦炎，鼻炎，副鼻窦炎，过敏性鼻炎等症状。连翘具有清热解毒、消肿散结的功效，为方中臣药。现有的标准只有中药定性鉴别的方法，没有主要药味的含量测定方法，为了更好地控制副鼻窦颗粒的质量，采用HPLC法以连翘苷作为指标成分进行含量测定，经方法学考查，认为本法简便、准确、无干扰，可用于本品质量控制。

1 仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪，OpenLAB CDS色谱工作站，ZORBAX SB-C18(150 mm×4．6 mm，5 μm)色谱柱；连翘苷对照品(批号120821-201212，购自中国药品生物制品检定所)；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。副鼻窦颗粒由本院制剂室提供(批号14210137,14320115,15070137)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为ZORBAX SB-C18(150 mm×4．6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(23∶77)；流速：1.0 ml/min；柱温：室温；检测波长：278 nm，进样量：10 μl。理论塔板数按连翘苷峰计算不低于3 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取连翘苷对照品5.88 mg，置于25 ml量瓶中，加甲醇制成连翘苷标准储备液(0.235 2 mg/ml)。

2.2.2 供试品溶液的制备 取副鼻窦颗粒研细，取约5.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)40 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20 ml，蒸干，残渣用70%乙醇10 ml使溶解，加在中性氧化铝柱(100～120目，6.0 g，内径1 cm)上，用70%乙醇50 ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加适量50%甲醇溶解，转移至5 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得连翘苷供试品溶液[1,2]。

2.2.3 阴性对照液的制备 按照处方组成比例，制备不含连翘药材的阴性样品。并按供试品溶液制备方法制备不含连翘的阴性对照液。

2.3 专属性试验 分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件分别进行测定，记录色谱图。结果显示在与对照品相同保留时间处无色谱峰，说明本品中的其他成分对测定无干扰。见图1。

1.连翘苷

图1 对照品(A)

供试品(B)阴性对照(C)HPLC色谱图

2.4 线性关系的考查 精密称取连翘苷对照品储备液制成浓度为7.35、14.7、29.4、 58.8、117.6和235.2 μg/ml的溶液。按“2.1”项下的色谱条件测定，记录色谱图，以进样量(C)为横坐标，相应的峰面积(A)为纵坐标绘制标准曲线。回归方程为：A=771.2C-1.248 7(r=0.999 7)。结果表明，连翘苷在7.35～235.2 μg/ml范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密吸取连翘苷的同一对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定，连续进样6次，记录峰面积的RSD值为 0.78%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 分别取连翘苷的供试品溶液在室温下放置0、1、4、8、10、12和24 h，按“2.1”项下色谱条件分别测定，其峰面积RSD值为1.92%，结果表明样品液在24 h内基本稳定。

2.7 重复性试验 取同一批样品，按“2.2.2”项下方法平行制备样品溶液6份, 按“2.1”项下的色谱条件测定其含量，连翘苷平均含量为1.56 mg/袋。RSD值为1.72%，表明分析方法重复性较好。

2.8 加样回收率试验 取已知含量的同一批号的样品9份,研细，精密称取，精密加入定量的连翘苷对照品溶液,按供试品溶液制备方法制备连翘苷的样品溶液,并按“2.1”项下色谱条件分别测定。结果平均回收率为98.4%,RSD为1.23%。见表1。

表1 连翘苷加样回收率试验结果(n=9)

2.9 样品测定 取样品3批，按“2.2.2”项下方法分别制备供试品溶液，照上述色谱条件测定，外标法定量。计算样品中连翘苷的含量，结果见表2。

表2 样品测定结果(n=3)

3 讨论

副鼻窦颗粒为临床应用多年、疗效确切的颗粒剂，药材品种较多，化学成分复杂，其方中君药为金银藤，连翘为臣药。笔者考查了HPLC法测定方中金银藤活性成分绿原酸的含量，发现阴性干扰严重，专属性差，难以作为定量指标，而采用连翘中连翘苷的含量作为指标成分进行测定，专属性强，可达到质量控制的目的。本研究对副鼻窦颗粒中连翘苷的含量测定色谱条件进行了考查，经过对连翘苷对照品溶液的紫外吸收光谱测定,样品和对照品溶液均在278 nm处有最大吸收，故选择278 nm为检测波长。流动相的选择，采用《中国药典》方法，乙腈-水体系为流动相时，可达到很好分离效果。经考查本文确定色谱条件为乙腈-水(23∶77)为流动相，流速为1 ml/min，检测波长为278 nm。方法学考查结果表明，本方法操作简单,结果准确,重复性好,空白无干扰,可作为副鼻窦颗粒质量标准中含量测定的方法。

1 中国药典[].一部.2010：159-160

2 覃薛文,李志怀. RP-HPLC测定双黄连颗粒中连翘苷的含量[J].中国药师，2008，11(5)： 550-551

Determination of forsythin in Fubidou granules by HPLC

Liu Binguo, Ren Tao，Zhang Nan

(No 254 Hospital of PLA , Tianjin 300142)

Objective：To establish an HPLC method to determine the contets of forsythin in Fubidou granules. Methods：Forsythin was determined by HPLC with a ZORBAX SB-C18column(4.6 mm×150 mm,5 μm)at 25 ℃. The mobile phase was composed of acetonitrile and water at a ratio of 23 to 77, and detection wavelength was set at 278 nm. Results：The method was linear for the concentrations of forsythin over the range of 7.35～235.2 μg/ml with the average recovery of 98.4%(n=9). Conclusion：This methods is simple and reliable. It is suitable for the content control of forsythin in Fubidou granules.

Fubidou granules，forsythin，HPLC

2015-07-06

R927.2

A

1006-5687(2015)05-0022-02