一测多评法在参麦注射液7个成分检测中的应用

★　赵雯　龚千锋　许妍　(.江西省食品药品检验所/江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心　南昌 33009；.江西中医药大学药学院　南昌 330004)

一测多评法在参麦注射液7个成分检测中的应用

★赵雯1,2*第一作者：赵雯(1985—)，研究生在读，主管药师。研究方向：中药药物分析。E-mail：zhaowen0791@sina.com。龚千锋2许妍1*通信作者：许妍。E-mail：jxyjxuyan@sohu.com。(1.江西省食品药品检验所/江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心南昌 330029；2.江西中医药大学药学院南昌 330004)

摘要：目的：应用一测多评法建立同时测定参麦注射液7个成分的HPLC含量测定。方法：以人参皂苷Rg1作内参物，计算人参皂苷Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd的相对校正因子。利用相对校正因子，计算参麦注射液中各成分的含量。比较一测多评法与外标法测定结果的差异，以验证一测多评法的适用性。结果：各成分相对校正因子重现性良好。人参皂苷Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd按一测多评方法与外标法测定结果无显著差异。结论：一测多评法可以作为一种简便准确的质量评价模式用于参麦注射液多种人参皂苷类成分的含量测定。

关键词：一测多评；校正因子；高效液相色谱；人参皂苷；参麦注射液

参麦注射液是由红参和麦冬两味药材制备而成的中药复方制剂，临床使用率较高，主要用于气阴两虚型休克、冠心病、病毒性心肌炎、慢性肺心病、粒细胞减少症，能提高肿瘤病人的免疫能力，与化疗药物联合使用，能增加疗效并减少毒副反应。

参麦注射液中红参为处方中的君药，主要的活性成分为人参皂苷，包括原人参二醇类皂苷(人参皂苷Rc、Rd、Rb1、Rb2)、原人参三醇类皂苷(人参皂苷 Rg1、Re、Rf)[1]。据文献报道，参麦注射液中多种皂苷类成分的含量基本采用外标法测定[2-3]。对照品供需矛盾和多指标测定高昂的检测成本，限制了多指标质量控制模式在实际中的应用。建立成分间的相对校正因子，用一个对照品同步测定中药中多个成分的含量，该方法称为“一测多评”法[4]。以“一测多评”法进行多指标的含量测定，更能全面反应产品的质量。本文采用一测多评技术测定红参中七组分(人参皂苷Rb1、Rg1、Re、Rf、Rc、Rb2、Rd)的含量，进一步提升参麦注射液的质量控制水平。

1仪器与试药

仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪；Waters高效液相色谱仪；LC-20A高效液相色谱仪；Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μ)；Wondasil C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μ)；Capcellpak C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μ)；Sartorius CP 225D电子天平。

对照品：人参皂苷Rg1(批号：110703-200726)、人参皂苷Re(批号：110754-200822，含量以88.8%计)、人参皂苷Rf(批号：111719-200703)、人参皂苷Rb1(批号：110704-200420)、人参皂苷Rc(批号：111719-200502)、人参皂苷Rb2(批号：111715-200802，含量以94.8%计)、人参皂苷Rd(批号：111818-201001，含量以94.4%计)，均购于中国药品生物制品检定所，供含量测定用。

试剂：乙腈为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。

参麦注射液为2011年度国家药品评价性抽验样品。

2溶液制备

2.1混合对照品溶液分别称取人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd适量，精密称定，加20%乙腈制成浓度分别含100.5、98.6568、120.8、225.4、106.3、140.8728、92.04μg/mL的混合溶液，即得。

2.2供试品溶液取参麦注射液样品，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

1.人参皂苷Rg1；2.人参皂苷Re；3.人参皂苷Rf；4.人参皂苷Rb1；

3色谱条件

采用Diamonsil C18(4.6 mm ×250 mm，5μm)色谱柱，以乙腈(A)-水(B)为流动相，梯度洗脱(0～30min，19%A；30～45min，19%A→22%A；45～51min，22%A→31%A；51～75min，31%A；75～95min，31%A→50%A；95～96min，50%A→95%A；96～106min，95%A；106～107min，95%A→19%A；107～115min，19%A)，流速1mL/min，检测波长203nm，柱温25℃。在上述色谱条件下，取混合对照品溶液及供试品溶液各进样10μL，色谱图见图1。

4方法学考察

4.1线性关系考察精密吸取“2.1”项下混合对照品溶液40、30、20、10、5、2、1、0.5μL进样分析，每个浓度进样3次，取平均值，以色谱峰峰面积(X)为横坐标，进样量(Y，μg)为纵坐标绘制标准曲线，各成分回归方程、线性范围见表1。

表1　线性关系试验结果

4.2精密度试验精密吸取“2.1”项下混合对照品溶液10μL在上述色谱条件下连续进样6次。测得人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd峰面积的RSD分别为1.0%，1.0%，0.6%，0.8%，1.1%，1.6%，0.5%。表明仪器较为稳定。

4.3稳定性试验取同一供试品溶液，按上述色谱条件分别在0、4、8、12、18、24、48、72h进样10μL进行测定。测得72h内人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd峰面积的RSD分别为1.1%，1.9%，1.8%，0.5%，0.6%，0.6%，1.4%。表明供试品溶液在72h内稳定。

4.4重复性试验精密吸取同一样品6份，按“2.2”项下方法制备6份供试品溶液，在上述色谱条件下进样测定。测得人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd平均含量分别为101.5、52.7、47.6、384.3、237.1、165.8、80.1μg/mL，RSD分别为1.6%，2.0%，1.5%，0.6%，0.7%，1.0%，1.3%。结果表明试验方法的重复性较好。

4.5加样回收率考察精密吸取已知含量的样品6份，每份1mL，分别置于5mL量瓶中，精密加入每1mL含有人参皂苷Rg1101.2μg，Re 49.8μg，Rf 50.2μg，Rb 400.1μg，Rc 227.5μg，Rb2152.6μg，Rd 81.1μg的混合对照品溶液1mL，用水稀释到刻度。按上述色谱条件进样10μL进行测定，计算加样回收率，结果人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd的加样回收率分别为102.5%、101.0%、100.3%、101.4%、99.2%、98.0%、101.0%，RSD分别为1.3%，1.9%，1.7%，1.3%，1.0%，1.9%，1.3%。

5相对校正因子计算

5.1待测指标相对校正因子计算相对校正因子(relative correction factor，f)计算公式为：fsi= (As/Cs)/(Ai/Ci)[5]，As、Cs分别为内参物对照品的峰面积和浓度，Ai、Ci分别为待测成分对照品的峰面积和浓度。

表2　不同仪器和色谱柱测得的相对保留值

表3　一测多评法和外标法测定人参皂苷Rb1、Re、Rf的结果比较

依次精密量取“2.1”项下混合对照品溶液40、30、20、10、5、2、1、0.5μL分别进样，测定各成分色谱峰峰面积。以人参皂苷Rg1为内参物，计算人参皂苷Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd相对于人参皂苷Rg1的f，求得各成分8次测定所得f的平均值分别为1.0200、1.0232、1.4501、1.4229、1.3854、1.0044；RSD分别为2.7%，4.6%，3.8%，3.2%，5.4%，4.4%。

5.2一测多评法待测色谱峰的定位由于一测多评法只有一个对照品，在这种情况下如何实现其余指标性成分的指认是试验的关键[6-7]。本试验利用相对保留时间对各成分峰进行定位，结果见表2。由表2可知，RSD≤5%，表明利用相对保留时间进行峰定位是可行的。

5.3一测多评法与外标法测定结果的比较分别精密吸取各供试品溶液10μL注入高效液相色谱仪，测定峰面积。采用外标法和“一测多评”法分别计算参麦注射液中人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd的含量[6-7]，结果见表3、4。两种方法所得的含量值相对偏差都在3%以内，表明一测多评法可用于参麦注射液中多指标含量测定。

表4　一测多评法和外标法测定人参皂苷Rc、Rb2、Rd的结果比较

6讨论

0.9578，0.6925；RSD分别为3.9%，3.0%，1.4%，5.0%，8.5%，1.1%。从数据中可看出，以人参皂苷Rg1为内参物计算f的RSD相对较小，为了减少试验误差，兼顾易得、廉价、稳定的内参物选择原则，故选择人参皂苷Rg1为内参物。

表5　不同仪器及色谱柱测得的相对校正因子

6.2一测多评法的耐用性考察试验考察了Agilent 1200、Waters、LC-20A三种高效液相色谱系统及Diamonsil C18(4.6mm×250mm，5μm)、Wondasil C18(4.6mm×250mm，5μm)、Capcellpak C18(4.6mm×250mm，5μm)三种色谱柱，结果表明不同的仪器、色谱柱的相对校正因子差异并不明显。见表5。

6.3结论中药多成分、多功效的作用特点，决定着单一成分难以表征中药的质量[4]。本试验建立了“一测多评”法测定参麦注射液中多种皂苷类成分含量，即通过测定其中一个成分(人参皂苷Rg1)，建立该成分与其他有效成分(人参皂苷Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd)间的相对校正因子，计算各成分的含量，实现多指标组分的同步测定[6]。利用相对保留时间对各色谱峰进行了定位。多批样品测定的结果显示，“一测多评”法与外标法在多指标成分定性、定量上无显著性差异。“一测多评”法可以作为一种简便准确的质量评价模式，用于参麦注射液多种人参皂苷类成分的含量测定。

参考文献

[1]肖培根. 新编中药志第一卷[M].北京：化学工业出版社，2002：2-3.

[2]曹树萍，聂黎行，王刚力，等.HPLC法同时测定参麦注射液中9个人参皂苷的含量[J].药物分析杂志，2011(3)：476-478.

[3]马静，李学林，唐进法，等.HPLC法测定不同厂家参麦注射液中人参皂苷Rg1和Re的含量[J].中国实验方剂学杂志，2013(11)：79-81.

[4]张慧. 川芎及黄藤药材质量研究[D].沈阳：辽宁中医药大学，2011.

[5]李安平，杨锡，丁永辉，等.一测多评HPLC法测定丹参注射液中7个水溶性成分含量[J].药物分析杂志，2012，32(9)：1 534-1 540.

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[7]吴铁荣. 肿节风注射液质量标准及物质基础研究[D].南昌：南昌大学，2012.

Quantitative Analysis of Seven Components in Shenmai injection by QAMS Method

ZHAO Wen1,2，GONG Qian-feng2，XU Yan1

1.JiangxiProvincialInstituteforFoodandDrugControl,Nanchang330029,China;

2.Schoolofpharmacy,JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330004,China.

Abstract:Objective：To establish a new quality evaluation method for Shenmai injection，the content of seven components being calculated by using quantitative analysis of multi-components by single-marker(QAMS)of HPLC. Methods：With ginsenoside Rg1 as internal material，the relative correction factor(RCF) of ginsenoside Re,Rf,Rb1,Rc,Rb2,Rd were evaluated. The content of each component in the Shenmai injection were calculated by its' RCFs. The QAMS method and external standard method were compared to determine differences in results, to verify the applicability of QAMS method. Results：The RCFs showed good reproducibility in a certain ranges. For all components, there was no significant difference between the quantitative results of the two methods. Conclusion：The QAMS method is feasible and credible, and could be used to determine the multiple components of ginsenoside in Shenmai injection.

Key words:Quantitative analysis multi-components by single marker(QMAS); Relative correction factor; HPLC; Ginsenoside; Shenmai injection

收稿日期：(2014-08-20)编辑：薛铁瑛

中图分类号：R286.0

文献标识码：B