高效液相色谱法测定复方丙睾凝胶剂中丙酸睾酮的含量

王桂英，杨湘君，杨新建

(天津市中医药研究院附属医院，天津 300120)



高效液相色谱法测定复方丙睾凝胶剂中丙酸睾酮的含量

王桂英，杨湘君，杨新建

(天津市中医药研究院附属医院，天津 300120)

目的：测定复方丙睾凝胶剂中丙酸睾酮的含量。方法：用高效液相色谱法，采用Kromasil C18柱，以甲醇-水(85∶15)为流动相，流速为0.8 ml/min，检测波长为254 nm，柱温为25 ℃。结果：丙酸睾酮在0.030 3～0.161 6 mg/ml内呈现良好的线性关系(r=0.999 9)。结论：本法可灵敏、快速、准确测定复方丙睾凝胶剂中丙酸睾酮的含量。

丙酸睾酮，凝胶剂，高效液相色谱法，含量测定

复方丙睾软膏是由本院临床医生根据多年临床实践经验，用于治疗外阴白色病变具有较好疗效的制剂。本制剂被收入《天津市医院制剂规范》(1995版)，具有皮肤软化、粘连松解、止痒和消炎作用。但复方丙睾软膏所使用的油溶性基质吸水性较差，不适用于急性炎症及有渗出液的湿疹患者[1]。为此本文试制了复方丙睾凝胶剂，弥补了软膏剂的缺陷，更加能够满足临床需要。为更有效地控制和提高本制剂的质量，建立了高效液相色谱法测定复方丙睾凝胶剂的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津高效液相色谱仪LC-10A；Anastar色谱工作站；TIANHE Kromasil C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；十万分之一分析天平(日本岛津)；数控超声波清洗器(KQ3200DB型，昆山超声仪器有限公司)；丙酸睾酮标准品(中国药品生物制品检定所，批号100008-200505)；复方丙睾凝胶剂(天津市中医药研究院附属医院自制，批号140709，140803，140804)；甲醇为色谱纯；其他试剂均为市售分析纯，重蒸水自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为TIANHE Kromasil C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水(85∶15)，紫外检测波长为254 nm，流速为0.8 ml/min，柱温为25 ℃，进样量：20 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取丙酸睾酮标准品40.4 mg，置于10 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配成浓度为3.94 mg/ml的标准储备液，置冰箱保存。精密量取标准储备液0.5 ml，置于10 ml量瓶中，用甲醇溶解，并稀释至刻度，配成浓度为0.202 mg/ml的测定液，置冰箱保存。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取样品1 g，置于100 ml烧杯中，加入甲醇50 ml，超声15 min后取出，置冰水浴中冷冻10 min，上清液经滤纸过滤，滤液置于100 ml量瓶中，再向烧杯中加入甲醇20 ml，超声15 min后取出，迅速冷冻10 min，上清液经滤纸过滤，与之前滤液合并，再向烧杯中加入甲醇10 ml，超声15 min，迅速冷冻10 min，上清液经滤纸过滤，与之前滤液合并，用甲醇冲洗滤纸，将洗涤后的甲醇液合并至量瓶中，加甲醇至刻度，定容摇匀制得供试液的储备液。吸取0.05 ml该储备液至10 ml量瓶中，加入甲醇至刻度，得到供试品溶液，备用。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 精密称取复方丙睾软膏基质1 g，按照“2.2.2”项下操作，定容摇匀制得阴性对照液的储备液。吸取0.05 ml该储备液至10 ml量瓶中，加入乙醇至刻度，定容，摇匀，即可进样。

2.3 专属性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各20 μl，按照“2.1”项下色谱条件进样分析，记录色谱图。结果显示阴性对照在丙酸睾酮相同保留时间处无干扰峰，见图1。

1.丙酸睾酮

2.4 线性关系考查 分别精密量取丙酸睾酮测定液0.15、0.20、0.30、0.40、0.60和0.80 ml，置10 ml量瓶中，甲醇定容，进样量20 μl，以丙酸睾酮浓度(X)为横坐标，丙酸睾酮的峰面积(Y)为纵坐标，进行统计学处理，得出回归方程：Y=96.168X+0.025 6(r=0.999 9)，结果表明，丙酸睾酮在0.030 3～0.161 6 mg/ml范围内呈现良好的线性关系。

2.5 日内精密度和日间精密度 ①日内精密度：以次低、中和次高3个浓度点，一天内平行进样6次，按峰面积计算，RSD分别为0.57%、0.42%和0.45%；②日间精密度：以次低、中和次高3个浓度点，每天进样1次，连续6天，按峰面积计算，RSD分别为0.48%、0.56%和0.78%。

2.6 稳定性考查 以中间浓度点0.080 8 mg/ml，分别在0、2、4、6、8、10、12和24 h进样，峰面积的RSD为1.58%。

2.7 加样回收率试验 随机取批号140709的样品，照“2.2.2”项下方法制备9份样品，分别加入80%、100%和120%(各3份)的对照品溶液，按照“2.1”项下色谱条件进样测定，计算回收率，平均回收率为100.04%，RSD为0.38%，结果见表1。

表1 加样回收率测定结果(n=9)

2.8 样品含量测定 照“2.2.2”项下方法制备样品，每个批号称取3份，测定含量，RSD为1.881 3%，结果见表2。

表2 不同批号复方丙睾软膏中丙酸睾酮的含量测定结果

3 讨论

3.1 提取注意事项 合并提取液后，用甲醇沿滤纸边缘冲洗滤纸，使滤纸上残留的样品冲洗完全。

3.2 色谱条件选择 根据《中国药典》(2010)年版二部[2],丙酸睾酮含量测定所选流动相为甲醇-水(80∶20)，进样测定，结果分离效果和柱效不理想。先后改变甲醇与水的比例，最后确定以甲醇-水(85∶15)[3-6]为流动相。

1 边瑞民，刘明华，张循格，等.外阴营养不良药物治疗进展[J].药学研究，2014，33(5)：292-294

2 中国药典[S].二部.2010：102

3 冯碧敏，叶云，张昊. 丙酸睾酮搽剂的制备与含量测定[J].中国药业， 2012,21(1)：38-39

4 周筠，余敏灵，魏长勇，等. 高效液相色谱法测定丙酸睾酮注射液的含量[J].现代医药卫生, 2013,29(12)：1811-1812

5 卢结文.三合激素注射液中三组分的HPLC测定[J].中国医药工业杂志，2006，37(5)：338

6 冯代全，冯碧敏，张昊.高效液相色谱法测定鱼丙涂剂中丙酸睾酮的含量[J]. 中国药房，2006，17(3):213

Determination of testosterone propionate in compound testosterone propionate gels by HPLC

Wang Guiying，Yang Xiangjun，Yang Xinjian

(Tianjin Academy of Traditional Chinese Medicine Affiliated Hospital,Tianjin 300120)

Objective： To quantitative analysis of testosterone propionate in the compound testosterone propionate gels.Methods： HPLC method was employed with a Kromasil C18column used as stationary phase and methanol-water solution(85∶15) as mobile phase.The flow rate was 0.8 ml/min and the detection wavelength was at 254 nm. The temperature of the column was set at 25 ℃. Results： The standard curve of testosterone propionate reference was well linear over the range of 0.030 3～0.161 6 mg/ml(r=0.999 9).Conclusion： This method is simple and fast,and the results are credible. HPLC method could be used as determination the content of testosterone propionate in compound testosterone propionate Gels.

testosterone propionate，Gels，HPLC method，content determination

2014-12-08

R927.2

A

1006-5687(2015)03-0007-02