大量收集旋毛虫成虫的改良方法探讨

郭梦南，宋冬冬，张晓敏，石亚楠，孟卫新，王丽娜☒

（1.承德医学院基础医学院2013级，河北承德 067000；2.承德医学院基础医学院2011级；3.指导教师）

大量收集旋毛虫成虫的改良方法探讨

郭梦南1，宋冬冬1，张晓敏1，石亚楠2，孟卫新2，王丽娜3☒

（1.承德医学院基础医学院2013级，河北承德 067000；2.承德医学院基础医学院2011级；3.指导教师）

旋毛虫；成虫；收集

目前，旋毛虫病流行程度加重，流行区在不断扩大，发病率有逐步升高的趋势［1-2］。旋毛虫抗原具有特异性，成分极其复杂，而且患者的临床表现较为复杂，因此，给旋毛虫病免疫诊断及预防带来困难［3］。有研究显示，成虫抗原和新生幼虫抗原具有更好的免疫原性，而成虫抗原有可能成为较理想的免疫疫苗来源［4］。若要对成虫抗原进行研究，前提就是收集大量而又纯净的旋毛虫成虫作为研究材料。因此，我们对旋毛虫的收集方法进行了研究，找到了一种大量收集旋毛虫成虫的方法，现介绍如下。

1 材料与方法

1.1 旋毛虫来源 旋毛虫种由本院病原生物学教研室小鼠传代保种。

1.2 实验动物 昆明雄性健康成年小鼠，20-25g，购自承德医学院实验动物中心；SD雄性健康成年大鼠，180-220g，购自河北医科大学实验动物中心。

1.3 主要试剂及仪器 胃蛋白酶（1：3000），上海生工生物工程有限公司；浓盐酸，天津市标准科技有限公司；氯化钠，天津市佳兴化工玻璃仪器有限公司。组织捣碎机，江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司；恒温水浴箱，上海跃进医疗器械厂；恒温培养箱，上海恒科学仪器有限公司。

1.4 旋毛虫囊包幼虫的分离 处死旋毛虫保种的昆明小鼠，分离出全身肌肉，将肌肉剪碎，置于组织捣碎机，2000r/ min，15s捣碎。用1%胃蛋白酶-1%盐酸的消化液按1：30（肌肉：消化液）比例配制，置于7℃水浴箱中，消化小鼠肌肉4-6h。待肌肉消化完全后，消化液经100目筛网过滤到锥形量筒中，水洗自然沉淀后获取旋毛虫囊包幼虫并计数。

1.5 旋毛虫成虫的收集 用收集到的囊包幼虫经口感染大鼠，10000条/只。第6d禁食，第7d在乙醚麻醉下处死大鼠，取其全部小肠，纵向剪开，在无菌生理盐水中轻轻漂洗，除掉肠内容物。将小肠片段铺在悬于烧杯上的4层纱布上（纱布低于烧杯口5cm左右），加入孵育液（无菌生理盐水），以刚好没过小肠为准。将烧杯置于37℃恒温箱孵育4h，这期间大部分成虫主动从小肠粘膜内钻出，并穿过纱布进入到生理盐水中。3h后可见烧杯底部有大量白色团块状沉淀，即为旋毛虫成虫。移去纱布及小肠，将孵育液倒入锥形量筒中，自然沉淀30min，弃上清，无菌生理盐水反复洗涤沉淀2-3次，200目筛网过滤，将筛子倒置，用无菌生理盐水冲洗纱网，洗下成虫，将滤液自然沉淀10min，弃上清，收集干净成虫。镜下观察活力并计数。

2 结果

10只成年大鼠，每只大鼠感染10000条旋毛虫囊包幼虫。共获得纯净的成虫约53810条，回收率53.81%。镜下观察，成虫运动活泼，脱落的肠粘膜极少。

3 讨论

旋毛虫孵育时间太短则溢出的成虫量少，孵育时间太长则小肠容易腐败变性，增加细菌污染的机会。刘俊琴等［5］研究显示，成虫在孵育4h过程中基本从肠粘膜钻出，所以本研究取4h为旋毛虫孵育时间。

虽然刘俊琴等［5］对旋毛虫成虫无菌分离和体外培养方法进行了改进，但由于其过程比较繁琐，操作起来有一定的难度。我们的这次实验不但收集方法得到了简化，同时能够有效地收集纯净的成虫，而且操作时间短，虫体活力保持较好，这也有利于下一步旋毛虫成虫的体外培养及新生幼虫的收集，有利于旋毛虫的免疫学及分子生物学等方面的研究。

［1］许隆祺，蒋则孝，余素梅，等.当前我国人体寄生虫病流行的趋势和特点［J］.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1995，13（3）：214-217.

［2］温艳，张月清.聚合酶链反应技术检测旋毛虫DNA的实验研究［J］.中国人兽共患病杂志，2001，17（1）：61-62.

［3］Orlega-Pienes MG，Yepez-Mulia L，Human W， et al.Workshop on a detailed characterization of Trichinella spiralis antigens：A platform for future studies on antigens and antibodies to this parasite［J］.Parasite Immunol，1996，18（6）：273-284.

［4］涂涛，安桂珍，杨树森.旋毛虫成虫、新生幼虫和肌幼虫抗原的保护性免疫研究［J］.中国人兽共患病杂志，2001，17（2）：66-69.

［5］刘俊琴，李科荣，申丽洁.无菌分离和体外培养旋毛虫成虫方法的改进［J］.中国病原生物学杂志，2008，3（8）：623-624.

（学生园地栏目编辑：张 健）

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1004-6879（2015）02-0169-02

2015-01-26）