原发性肾病综合征与血小板活化因子水解酶的相关性分析*

田 鲁，胡亚琳，操 轩

(湖北省黄石市中心医院肾内科，湖北 黄石 435000)

PNS临床并不少见，其已成为肾小球疾病中最为常见类型。PNS发病机制并未十分明确，该病主要因肾小球滤过膜对蛋白等通透性增高，进而致蛋白大量丢失，引起一系列生理及病理变化［1］。PNS以蛋白尿、低蛋白血症、血脂升高及水肿等为主要临床表现，其病情进展严重影响患者的生活质量，并威胁人民生命健康。随着临床研究深入，发现PAF－AH水平变化与PNS发生发展具有密切关联，且与激素治疗疗效具有密切关联。血小板活化因子可促进免疫复合物沉积，降低肾小球率过滤及激活炎症细胞释放炎性物质，增强滤过膜通透性，PAF－AH为血小板活化因子水解酶，其水平变化对病情进展具有重要意义［2，3］。本研究旨在探讨PAF－AH与PNS之间相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料:选择本科室收治的初治PNS患者48例及同期健康体检人员30例入选本研究，均经研究对象及家属知情同意，且符合伦理委员会基本要求。48例PNS患者依据病理类型分为STNS组31例，男16例，女15 例，年龄 2～14 岁，平均(8.2±3.4)岁;NTNS组 17例，男10例，女7 例，年龄3～13 岁，平均(7.8±3.1)岁。48例患者确诊后均经激素治疗，并观察6个月，根据其对激素敏感程度分为SSNS组19例，男10例，女 9 例，年龄 2～11 岁，平均(7.9±3.0)岁;SRNS 组15 例，男 9例，女 6 例，年龄 3～13 岁，平均(8.3±3.5)岁;SDNS组14例，男7例，女7例，年龄2～12岁，平均(7.7±3.3)岁。30例健康人员作为对照组，年龄 3～15 岁，平均(8.4±3.5)岁。经分析，STNS 组、NTNS 组、健康对照组之间以及SSNS组、SRNS组、SDNS组、健康对照组之间一般资料如年龄、性别构成等比较无统计学差异，均 P＞0.05.

1.2 诊断标准:①原发性肾病综合征诊断标准依据2001年全国儿科肾病组《小儿肾小球疾病的临床分类、诊断及治疗》制定相关诊断标准:大量蛋白尿，24h尿蛋白含量≥50mg/Kg，血浆白蛋白＜30g/L，血浆胆固醇＞5.7mmoL/L，伴有不同程度水肿［4］。②激素敏感诊断标准:激素敏感型激素治疗≤8周尿蛋白转阴;激素耐药型激素治疗8周尿蛋白仍表现未阳性患者;激素依赖型患者对激素敏感，减量治疗或者停药后1个月复发，且重复两次以上者［5］。

1.3 病例纳入标准:①符合PNS诊断标准;②初治患者，且未应用激素治疗;③签署知情同意。

1.4 病例排除标准:①继发性NS;②合并先天性心脏病、肿瘤、严重肝功能下降患者;③癫痫等精神病史患者。

1.5 方 法

1.5.1 标本采取:48例PNS患者及30例健康人员均于激素治疗前抽取外周血2mL，应用复方枸橼酸钠ACD抗凝，静置，提取上清液，置于－20°C冰箱内保存。

1.5.2 PAF－AH 测定:具体操作严格按照 PAF－AH 试剂盒(购自美国Cayman公司)说明书进行，①设置无酶对照孔(空白孔)2孔，加入10ul DTNB及15ul化验用缓冲液;②设置2孔阳性对照孔，加入10ul DTNB及10ul PAF－AH、5ul化验用缓冲液;③设置样品孔，每样本3孔，加10ul DTNB及10ul样品、5ul缓冲液，加入PAF－AH且应使每 min增加的吸光度值于 0.01～0.1之间;④加入200ul底物溶液于每孔，均匀震摇30s，混匀;⑤于读板仪上414处读取一个时间周期吸光度值(至少5个时间点的值)，两个时间点最小值测定酶活性;⑥PAF－AH计算:使用酶水解底物显色法检测，于分光光度计上读取不同时间A值，并于读板仪414出读取一个周期吸光度值，计算PAF－AH活性。

1.6 观察指标:①观察不同类型肾病综合征患者血小板活化因子水解酶差异;②观察激素敏感性不同患者血小板活化因子水解酶差异;③分析不同类型原发性肾病综合征与血小板活化因子水解酶之间相关性。

1.7 统计学处理:采用SPSS13.0统计软件进行统计分析，采用χ2检验计数资料，计量资料以(±s)表示，并采取t检验，PAF－AH活性与原发性肾病综合征关系采取perason相关分析，P＜0.05，统计学差异显著。

2 结果

2.1 不同类型肾病综合征患者血小板活化因子水解酶差异分析:STNS组 PAF－AH 活性为(51.9±8.3)umoL·min－1·L－1，均高于 NTNS 组及健康对照组，均P＜0.05;且NTNS组PAF－AH活性高于健康对照组，均 P＜0.05。见表 1。

表1 不同类型肾病综合征患者血小板活化因子水解酶差异分析(±s)

表1 不同类型肾病综合征患者血小板活化因子水解酶差异分析(±s)

tSTNS NTNS=6.351;tSTNS对照组 =19.656;tNTNS对照组 =11.754;P＜0.05

组别 例数 PAF－AH(umoL·min－1·L STNS 组 31 51.9±8.3 NTNS 组 17 37.1±6.5对照组 30 17.8±4.7 F 21.896

2.2 激素敏感性不同患者血小板活化因子水解酶差异分析:SSNS 组 PAF－AH 活性为(56.7±8.9)umoL/min·L，均高于 SRNS 组、SDNS 组、对照组，P＜0.05，且SRNS组、SDNS组PAF－AH活性均高于对照组，P＜0.05。见表2。

表2 激素敏感性不同患者血小板活化因子水解酶差异分析(±s)

表2 激素敏感性不同患者血小板活化因子水解酶差异分析(±s)

tSSNS SRNS=4.762;tSSNS SDNS=7.705;tSSNS对照组 =20.009;tSRNS SDNS=3.569;tSRNS对照组=15.414;tSDNS对照组=10.509;P＜0.05

组别 例数 PAF－AH(umoL·min－1·L－1)SSNS 组 19 56.7±8.9 SRNS 组 15 43.7±6.4 SDNS 组 14 35.4±6.1对照组 30 17.8±4.7 F 29.854

2.3 不同类型原发性肾病综合征与血小板活化因子水解酶活性之间相关性分析:经perason分析，PAFAH活性与原发性肾病综合征之间有明显相关分析，其中，rSTNS=0.618;rNTNS=0.524;rSSNS=0.717;rSRNS=0.567.;rSDNS=0.327，P＜0.05。

3 讨论

原发性肾病综合征发病机制并未明确，可分为STNS及NTNS。目前，临床主要以STNS多见，病理类型主要为微小病变肾炎，NTNS主要见于学龄期儿童，病理类型主要为非微小病变肾炎［6～8］。PNS严重影响患者生活质量，并威胁机体健康。临床针对PNS，多采取糖皮质激素治疗。相关研究表明，不同类型PNS对激素治疗反应并不一致，STNS多为激素完全效应，而NTNS多位部分效应，或无反应［9］。患者对激素治疗敏感性不一致，不利于无反应类型患者治疗。因此，研究PNS发病机制及不同类型对激素治疗敏感性差异机制极为必要，以期对临床干预提供可能性指导。

随着临床研究深入，发现血小板活化因子(platelet activating factor，PAF)在PNS疾病进展中起着重要作用［10］。相关研究表明，PAF可促进免疫复合物沉积、降低肾小球率过滤及诱导炎症细胞肾内浸润等，增加肾小球基底膜对蛋白的通透性。有报道表明，PAF水平与PNS活动密度具有密切关联。PAF－AH可水解PAF，使其失活，对维持PAF机体内水平具有重要作用，因此，PAF－AH水平变化对PNS发生发展具有重要意义。相关研究表明，PAF通过改变膜通透性参与PNS进展，其甘油骨架sn－2位置的乙酰基团为其生物学活性的重要基团及活性中心，而PAF－AH可水解PAF的sn－2位置的乙酰基团，进而降解异常表达的PAF。本研究经测定不同类型PNS患者PAF－AH活性，结果表明，STNS组及NTNS组均高于健康对照组，且STNS组患者高于NTNS组，与国外研究较为一致。PNS患者PAF－AH活性增高，可能因PAF激活PAFAH启动子相关，导致活性升高。NTNS组PAF－AH活性低于STNS组，导致PAF降解不完善，此可能为NTNS患儿肾脏损伤严重，且临床干预较难取的较佳效果原因之一。本研究进一步测定对激素敏感性不一致患者PAF－AH活性差异，结果表明SSNS组高于SRNS组、SDNS组、对照组，相关研究表明，此可能与激素激活PAF－AH活性相关，导致PAF降解理想，疾病更易控制。SDNS组患者PAF－AH活性低于SSNS组，可能为机体内PAF增高，但PAF－AH活性相对不足，需更多外源性PAF－AH活性才能完全降解，故表现为激素治疗仍然敏感，但减量或停药后病情反复。本研究经perason分析，PAF－AH活性与不同类型原发性肾病综合征之间有明显相关，表明不同类型PNS患者机体内PAF－AH活性不一致。

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