佳木斯三江地区孕早期胚胎停育196例染色体核型分析①

张玉萍，杨欣艳，孙盛梅，何春久，张淑红，朱金玲，王长山

(佳木斯大学基础医学院，黑龙江 佳木斯 154007)

佳木斯三江地区孕早期胚胎停育196例染色体核型分析①

张玉萍，杨欣艳，孙盛梅，何春久，张淑红，朱金玲，王长山

(佳木斯大学基础医学院，黑龙江 佳木斯 154007)

目的：研究染色体异常与孕早期胚胎停育的关系。方法：对196例孕早期胚胎停育患者的绒毛细胞进行原位培养，染色体制备与核型分析。结果：196例胚胎停育患者的胚胎绒毛组织，细胞培养失败9例，检出异常核型62例，染色体异常比率31.6%。结论：染色体异常是孕早期胚胎停育的重要因素。

孕早期；胚胎停育；染色体异常

胚胎停育是指在妊娠早期由于各种可能的原因所致的胚胎或胎儿在孕妇子宫内停止发育的临床征象。临床B超检查显示妊娠囊内胎芽或胎儿形态欠规则，无胎心搏动或表现为妊娠囊萎缩。造成胚胎停育发生的原因很多，包括激素水平的失调、染色体的异常、自身抗体的产生，子宫内环境的影响、生殖道病毒感染[1]等等，而孕早期胚胎停育一个很重要的因素就是染色体异常[2]。本研究收集了196例孕早期胚胎停育患者的绒毛组织，进行了细胞原位培养，染色体制备和染色体异常情况的分析。

1 材料与方法

1.1 材料

材料来源于佳木斯大学附属各医院，患者大多来自佳木斯市区及所属的三江平原地区。采集时间为2012-05～2014-12，收集了196例临床B超报告提示胚胎停育孕妇清宫所得到的新鲜、无菌的绒毛组织，患者年龄20～36岁。

1.2 方法

1.2.1 细胞的原位培养 ：⑴选取每例孕妇的绒毛组织15mg，放置在无菌的培养皿中，PBS冲洗绒毛组织凝血，移入试管中；⑵加酶解液10滴混匀，放入二氧化碳培养箱消化10min，离心弃上清；⑶加培养液(含小牛血清10%)5mL混匀，移入无菌培养瓶中，放入37℃、5%CO2培养箱中培养7d，观察细胞贴壁情况，贴壁后继续培养3d；⑷终止培养前2h，用1mL注射器5号针尖向培养液中加入秋水仙碱2滴(使终浓度为0.07μg/mL)。

1.2.2 染色体制备：⑴收集细胞：用消毒的吸管吸取培养液将贴壁的细胞吹起、吹匀，连同培养液转入无菌的刻度离心管中，以800rpm离心10min，去上清液；⑵低渗：向刻度离心管中加入37℃的低渗氯化钾8mL,混匀，放置在37℃水浴锅中27min；⑶预固定：向离心管中加入固定液1mL混匀，离心去上清；⑷固定：加入新配置的固定液5mL，混匀，室温固定30min，离心去上清，再固定一次；⑸滴片：离心去上清，加入1mL固定液，轻轻混匀，用冰水玻片滴片，然后放入60℃烤箱中烘烤2h； ⑹G显带：取出干燥的片子冷却后进行消化、染色、G显带。

1.2.3 核型分析：每例标本荧光显微镜下观察30个分裂相，检测染色体的结构和数目是否异常，若出现核型异常，增加观察70个分裂相，按照人类细胞遗传学国际命名体制标准，用捷克生物信息科技有限公司提供的400G染色体图像分析系统分析。

2 结果

196例孕早期胚胎停育患者绒毛细胞中，培养失败9例，检出125例正常核型和62例异常核型，染色体核型异常率为31.6%。异常核型中，13、16、18、21、22三体型32例，占异常核型的51.6%；45，XO为8例，三倍体为7例，四倍体为3例，其他异常核型为12例。见表1。

表1 62例胚胎停育异常染色体核型

3 讨论

我们收集了196例胚胎停育患者的绒毛组织细胞进行染色体检测，取绒毛组织进行细胞的原位培养，培养失败9例，细胞培养成功率达到了95.4%，优于直接法制备染色体[3]，获取的细胞分裂相比较多，染色体形态完整，便于观察和分析[4]。装片观察采用捷克生物信息科技有限公司提供的400G染色体图像分析系统，配套使用高分辨的荧光显微镜进行核型分析，对图像的处理简便、快捷，对染色体分裂相分辨和分析更加准确和科学。我国目前孕早期胚胎停育发病率有上升的趋势，对于染色体的细胞遗传学分析和检测显得尤为重要和任务艰巨。染色体异常是引起胚胎停育一个很重要原因，本实验研究中染色体异常核型检出率达31.6%，低于文献报道50%[5]。染色体异常包括染色体结构异常和染色体数目异常。本实验研究中非整倍体核型数目异常，三体型共计32例，占异常核型51.6%，常染色体三体的形成，是由于染色体不分离所致，染色体不分离可能由于两种情况造成造成形成的配子染色体数目增加，二是在合子卵裂过程中，有丝分裂不分离所导致的三体型。45，XO共计8例，占异常核型的12.9%，与文献报道10%[6]。接近。染色体三倍体和四倍体共计10例，导致三倍体和四倍体的原因相对复杂，是直接导致孕早期胚胎停育而自然流产。其他染色体结构异常相对比例较少，为19.4%。本实验研究中的数据部分与文献报道存在差异，可能是由于收集的样本数量不够多，或者是存在地域的差异。

我们教研室从事细胞遗传学分析近50年，为黑龙江三江平原地区有效的开展优生优育工作，保障人口的质量，通过临床细胞遗传学检测和筛查，将对胚胎停育的病因、诊断及再次妊娠有着重要的临床指导意义。

[1]潘章颖， 段志强，龙亮，等.佳木斯地区43例Down综合征患儿的细胞遗传学研究及优生对策[J].黑龙江医药科学，2005，24(5)：72-73

[2]田丽，霍琰，牛凤霞，等.26对胚胎停育患者的染色体分析[J].中国优生与遗传杂志，2008,16(6)：59

[3]李伟，郝娜，周京，等.胚胎停育绒毛染色体培养与分析[J].中国优生与遗传杂志，2010,18(10)：48-50

[4]王秀岩，魏凤香，李向伟，等.124例先天愚型研究与分析[J].黑龙江医药科学,2002,25(3):72

[5]刘爽，张金波，李月秋，等.9号染色体臂间倒位的遗传学效应分析[J].黑龙医药科学，2007,30(3):46

[6]孙秋颖，冯照伟，杨冬玲，等.影响选择早期流产方法的因素[J].黑龙江医药科学，2005,28(1):93

黑龙江省教育厅科学技术研究项目,编号:12541813。

张玉萍(1966～)女，黑龙江佳木斯人，硕士，教授，硕士研究生导师。主要研究方向：多基因病发病机制。

朱金玲(1967～)女，黑龙江佳木斯人，硕士，教授，硕士研究生导师。E-mail：zhujinling6656@163.com。

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