抑癌基因FHIT和WWOX与前列腺癌相关性的初步研究①

杨 振，高 琦，柳朝阳，张 涛

(佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007)

抑癌基因FHIT和WWOX与前列腺癌相关性的初步研究①

杨 振，高 琦，柳朝阳，张 涛

(佳木斯大学，黑龙江 佳木斯 154007)

目的：探讨FHIT和WWOXmRNA及其蛋白在前列腺癌及癌旁正常组织的表达，分析其与临床病理特征之间的相关性。方法：免疫组化法检测FHIT和WWOX蛋白在前列腺癌组织中表达；RT-PCR法检测FHIT和WWOXmRNA在前列腺癌及癌旁正常组织表达。结果：FHIT和WWOX蛋白表达在前列腺癌中与低分化组及高与低分化组间有统计学意义(P<0.05)。二者在分期中表达的缺失的差异都具有显著性(P<0.05)。FHITmRNA和WWOXmRNA的在前列腺癌的表达低于癌旁正常组织(P<0.05)。结论：FHIT与WWOX为抑癌基因，其表达与前列腺癌的发生发展具有相关性。

前列腺癌；FHIT；WWOX；RT-PCR；免疫组化

随着国人生活水平的提高，前列腺癌发病率也出现升高的趋势[1]。因此提高早期诊断率，才是提高治愈率的关键[2]。目前发现在多种肿瘤细胞的发生、进展过程中，都存在脆性组氨酸三联体(FHIT)和包含WW域的氧化还原酶(WWOX)基因表达的缺失或表达的降低。本课题初步研究了在前列腺癌组织中FHIT与WWOX阳性程度的表达，进一步为该病的诊断、治疗和判断预后提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 实验对象

对佳木斯市中心医院泌尿外科从2012～2014年的采用前列腺癌手术切除的病例随机抽取了35例前列腺癌的组织标本。所有患者均是第一次进行手术治疗，术后均进行了病理诊断，术前均未进行放疗、化疗、激素治疗及免疫治疗等抗癌治疗，同时病理结果经佳木斯中心医院病理科确定得出。

1.2 试剂

脆性组氨酸三联体及包含WW域氧化还原酶的兔抗人蛋白抗体, 免疫组化试剂盒。通过Genebank网查找FHIT与WWOX进行RT-PCR扩增所需的上下游引物。

1.3 方法

1.3.1 通过使用免疫组化法研究35例癌组织标本中FHIT与WWOX蛋白的表达与患者病例的多项指标之间的相关性。

1.3.2 以β-actin为内参照，通过采用RT-PCR方法对35例前列腺癌组织及其癌旁正常组织中的FHITmRNA和WWOXmRNA的电泳结果采取半定量检测并分析。

1.4 统计学方法

采用SPSS17.0版对FHIT与WWOX在实验中的表达情况进行χ2,t检验,等级相关分析。所得出的结果都以P<0.05为显著性差异，具有统计学意义。

2 结果

2.1 在35例前列腺癌中,FHIT与WWOX蛋白的阳性表达率在组织学分级中中分化和低分化及高分化和低分化组间都存在显著性的差异(P<0.05)。在临床病理分期中两者的表达缺失和降低均具有统计学意义(P<0.05)。但与年龄无显著性差异。见表1。

表1 FHIT与WWOX蛋白表达在前列腺癌中的临床病理关系

2.2FHIT与WWOX表达呈正相关性P<0 .05。见表2。

表2 FHIT和WWOX蛋白在前列腺癌组织中表达的相关性

2.3 在35例癌组织标本中FHITmRNA与WWOXmRNA表达与癌旁组织比较低者分别为11例与14例；较癌旁正常组织高者均有3例； 剩余的例数同癌旁组织相等。 两者在前列腺癌中的表达明显低于前列腺癌旁正常组织其差异具有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 在前列腺癌及癌旁正常组织中FHITmRNA与WWOXmRNA的表达

2.4FHITmRNA与WWOXmRNA在前列腺癌组织中是否相关。在前列腺癌标本中FHITmRNA与WWOXmRNA的低表达呈正相关性(P<0.05 ，r= 0.78)。

3 讨论

在所有人类个体细胞正常生长的过程中均发生着染色体的复制与分裂，而在复制和分裂过程之中染色体内的某些相对特殊的位点上可能会出现染色体的断裂或者缺口。研究人员于是将这些特殊的位点称为脆性位点。目前研究表明[3]，FHIT与WWOX在多数肿瘤中都有表达缺失。 抑癌基因FHIT[4]位于3q14.2区,此基因表达的丢失同肿瘤的发生发展关系十分密切[5],其编码的蛋白拥有水解酶的活性,若缺乏此酶会使细胞异常增殖,继而致使细胞癌变[6]。在正常组织中有FHIT的存在,在多数肿瘤组织中均发现该基因表达异常[7]。抑癌基因WWOX[3]位于16q23.3-24.1区，其经过信号转导途径使肿瘤生长受到抑制。Chang等[ 8]发现其活化后下调凋亡抑制因子，上调原凋亡蛋白,进一步提高肿瘤坏死因子的作用;还能与p53结合促使细胞凋亡。在此项研究的实验过程当中，我们发现在前列腺癌组织中FHIT蛋白和WWOX蛋白的表达分别是54.3%和51.4%，而在前列腺癌旁正常组织中FHIT蛋白和WWOX蛋白同时都有表达，此外，FHIT阴性的癌组织中有4例WWOX为阳性，而在WWOX阴性的癌性组织中存在5例FHIT阳性，可能是由于两者失活的作用机制不完全相同引起的。在进行了统计学相关性分析后表明，在前列腺癌中FHITmRNA与WWOXmRNA的低表达成正相关性，提示在前列腺癌组织中两者的DNA损伤过程中均受到了影响。综上所述，抑癌基因FHIT与WWOX在前列腺癌中阳性率表达明显低于癌旁正常组织，而在肿瘤的组织学分级和临床分期存在相关性，所以FHIT和WWOX检测对于前列腺癌的早期发现、诊断及治疗提供有力的帮助，在分子生物学领域也有着卓越的贡献，具有非常重要的意义 。

[1]胡存利，王超，牛文斌，等．血清EPCA-2联合尿液PCA-3检测在前列腺癌诊断中的临床意义[J]．黑龙江医药科学，2013，36(5)：37

[2] 韩旭，罗振国，杜丛林，等．血清EPCA-2与FPSA/TPSA值在前列腺癌诊断的关系[J].黑龙江医药科学，2014，37(4)：7

[3]BednarekAK,LaflinKJ,DanielRL,etal.WWOX,anovelWWdomain-containingproteinmappingtohumanchromosome16q23.3 -24.1,aregionfrequentlyaffectedinbreastcancer[J].CancerRes,2000, 60 (8):2140-2145

[4]OthaM,InoueH,CotticelliMG,etal.TheFHITgene,spanningthechromosome3p14.2fragilesiteandrenalcarcinoma-asociatedt(3;8)breakpoint,isabnormalindigestivetractcancers[J].Cell,1996,84 (4):587-597

[5]Zawacka-PankauJ,FerensB.Enlightenedprotein:FhittumorsuppressorproteinstructureandfunctionanditsroleinthetoxicityofprotoporphyrinIX-mediatedphotodynamicreaction[J].ToxicolApplPharmacol,2009,241(2):246 -252

[6]BurekeL,KhanMA,FreemannAN,etal.AllelicdeletionanalysisoftheFHITgenepredictspoorsurvivalinnonsmallcelllungcancer[J].CancerRes, 1998, 58(12) :2533-2536

[7]CantorJP,LiopoulosSD,RaoAS,etal.Epigeneticmodulationofendogenoustumorsuppressorexpressioninlungcancerxenograftssuppressestumorigenicity[J].IntJCancer,2007,120(1):24-31

[8]ChangNS,HsuLJ,LinYS,etal.Oxidoreductase:Acandidatetumorsuppressor[J].TrendsMolMed,2007,13(1):12-22

黑龙江省卫生厅科研项目，编号：2011-439；佳木斯大学科技重点项目，编号：Sz2011-009；黑龙江省普通高等学校青年学术骨干支持计划项目，编号：1252G059。

杨振 (1984～)男，山东高唐人，在读硕士研究生，中级检验师。

张涛(1971～)女，黑龙江嘉荫人，博士，教授，从事中草药抗肿瘤及对人体免疫调节方面的研究。E-mail：ztlzy888@163.com。

R737.25

B

1008-0104(2015)04-0020-02

2015-01-14)