丹皮酚对佐剂性关节炎大鼠IL-1β、TNF-α的影响①

石 磊，孙庆治，王建杰

(佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003)

丹皮酚对佐剂性关节炎大鼠IL-1β、TNF-α的影响①

石 磊，孙庆治，王建杰

(佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003)

目的：对患有类风湿性关节炎(RA)的实验大鼠应用丹皮酚，并检测治疗后实验大鼠IL-1β、TNF-α水平，得出丹皮酚对RA的作用，探讨丹皮酚针对RA的作用机制。方法：采用弗式完全佐剂的实验方法，制备佐剂性类风湿性关节炎(AA)的大鼠模型，一周后对实验大鼠应用低剂量丹皮酚(8mg/kg)、以及高剂量丹皮酚(32mg/kg)每日1次，一共应用21d。治疗后，应用了丹皮酚的RA大鼠对足肿胀有一定的抑制作用，采用ELISA方法，得出RA实验大鼠IL-1β、TNF-α的水平。结果：和正常组比较，模型组在造模15d后立即出现了后肢的足肿胀，关节炎指数升高(P<0.05)；实验显示丹皮酚很明显使实验大鼠的对侧足的肿胀时间延后，并减轻RA实验大鼠足的肿胀度(P<0.05)，并且高剂量丹皮酚可以减少IL-1β、TNF-α水平(P<0.05)。结论：对患有RA的实验大鼠应用丹皮酚可以降低IL-1β和TNF-α的水平，提示丹皮酚可以抑制RA的发展。

RA；IL-1β；TNF-α；丹皮酚

RA中，在抗原的刺激下，T淋巴细胞增多，并且使关节内的滑膜吞噬细胞产生活性，一系列的免疫反应使细胞因子明显增多，RA受累关节炎细胞浸润而发生炎症改变。TNF-α产生的炎症反应损伤受累的软骨和骨，最终形成RA病变的关节畸形[1]。牡丹皮中含有的丹皮酚及其糖苷类物质均有消炎的作用，对中枢神经系统有控制作用，对心血管系统有防止动脉粥样硬化的作用，还可以利尿、防止组织溃疡效用。先前的研究表明，丹皮酚对动物实验性关节炎具有抑制作用，可以缓解因类风湿性关节炎所导致的肺损伤[2～4]。本实验以先前的已知理论为基础，进一步对丹皮酚治疗RA中IL-1β、TNF-α水平的影响，阐明丹皮酚治疗RA的作用机制 。

1 材料和方法

1.1 制备大鼠AA模型

在大鼠足跖注射弗氏完全佐剂(Sigma公司产品)，每只注射0.1mL，共15d。期间观察大鼠后足的活动，及未注射组的前肢活动、体重等指标。

1.2 实验动物分组及给药剂量

选择实验大鼠共32只，不限雌雄。分4组，A组为空白对照组。B组为模型对照组，注射生理盐水。C组为丹皮酚大剂量治疗组，注射丹皮酚量为32mg/kg·d。D组为丹皮酚小剂量治疗组，注射丹皮酚量为8mg/kg·d。B、C、D组分别在大鼠后肢足跖关节内注射弗氏完全佐剂0.1mL/只，共15d，在造模第7天起，每日注射低剂量(8mg/kg)、高剂量丹皮酚(32mg/kg)共21d。

1.3 指标测定

1.3.1 实验大鼠后肢足跖肿胀程度、关节炎指数

21d后，测量后足跖容积，并统计肿胀程度。标注每组实验大鼠各个关节的RA病变程度，关节炎指数按5级评分法来评价。

1.3.2 测定大鼠IL-1β、TNF-α

每只取4～5mL血于试管中, 静置30min后，用冷冻离心机以2500r/min的速率离心15min, 然后移取上清液0.3mL到冻存试管中,-20℃ 保存待用，应用ELISA方法测血清中IL-1β和TNF-α的水平。实验均按照试剂盒说明书仔细操作。

2 结果

2.1 丹皮酚对实验大鼠RA指数影响

各组经过不同药物处理后，模型组AI指数高于NC组(P<0.05)。给药后，Pae低、高剂量组AI显著低于Model组(P<0.05)，见表1。

表1 丹皮酚对RA大鼠AI的影响

注:与NC组比较,▲P<0.05；与Model组比较，☆P<0.05。

2.2 丹皮酚对大鼠IL-1β、TNF-α的影响

关节炎模型组IL-1β、TNF-α明显高于NC组(P<0.05)。给药后，Pae高剂量组IL-1β、TNF-α显著低于Model组(P<0.05),见表2。

表2 丹皮酚对AA大鼠IL-1β、TNF-α的影响

注:与NC组比较,▲P<0.05；与Model组比较，☆P<0.05。

3 讨论

RA是一种进行性、多个关节受累为体现的免疫系统疾病。RA的病理表现主要是炎症刺激导致关节内滑膜的增生、单核细胞浸入，以及在病理情况下新生血管的形成。至今，尚没有根治RA的有效方法，更没有有效的预防。现今对于RA患者，主要通过非甾体抗炎药、激素和抗风湿药等治疗[5]。前期工作证实了，中药牡丹皮中含有的丹皮酚具有抑制实验性、佐剂性关节炎大鼠足肿胀的作用, 我们在这个研究基础上，用丹皮酚调节AA大鼠中细胞因子IL-1β和TNF-α进行深入研究。在RA病患中, 刺激机体免疫系统机制，并导致体内炎细胞活跃已得到公认,RA和血清中IL-1β和TNF-α的水平显著升高相关。单核细胞以及吞噬细胞分泌的IL-1β是炎症开始以及推动的因素，过多分泌的IL-1β可以刺激滑液、软骨释放PGE2和胶原酶, 促动滑膜炎症反应的发生、骨基质的崩解;另外,IL-1β还可以使嗜中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞聚集，从而加重炎症反应[6]。试验显示，高剂量丹皮酚组与各组比较显示：高剂量丹皮酚可以显著抑制佐剂性关节炎大鼠血清IL-1β因子的水平，所以丹皮酚可以明显降低血清中IL-1β的水平，可以延缓RA的发生、发展。单核巨噬细胞产生的TNF-α可参与疾病活动期或进展期, 在此期间TNF-α高水平表达分泌，如果TNF-α增多，提示疾病处于活动期，疾病的严重程度增高。TNF-α与IL-1β很相似，其作用的靶细胞几乎相同，刺激受累关节内的滑膜和软骨，促进合成PGE2和胶原酶，从而进一步引起骨质和软骨的吸收，关节内的组织如关节软骨、骨质、滑膜破坏，并促进成纤维细胞增生。TNF-α可以增加巨噬细胞自身生成，促进IL-1β的合成。通过实验证实：高剂量丹皮酚可以明显降低TNF-α的水平，在RA后期高剂量丹皮酚还可以控制病情的进展，高剂量丹皮酚与RA密切相关。

[1]朱江,谢文利,晋玉章,等.栀子对类风湿性关节炎大鼠血清TNF-α与IL-1β的影响[J].中成药，2005，27(7)：801-803

[2]倪强强,罗文哲,王建杰.丹皮酚对大鼠佐剂性关节炎致肺功能损伤的影响[J].黑龙江医药科学, 2012, 35(1): 82-83

[3]罗文哲,王建杰,乔晓峰,等.川芎嗪对类风湿关节炎所致肺功能损伤的调整作用[J].中国老年学杂志，2014,34(3):701-702

[4]王建杰,罗文哲,齐建祥,等.川芎嗪对类风湿关节炎模型大鼠关节滑液RANK/RANKL/OPG表达的影响[J].中国老年学杂志，2011,31(05): 833-835

[5]陈哲,李瑞林,涂胜豪,等.雷公藤治疗类风湿关节炎细胞和分子生物学机制的研究与进展[J].中国中西医结合杂志, 2009, 29(2): 183-185

[6]王勇,章敏,李羚青,等.热痹颗粒对AA大鼠Bcl-2蛋白表达及IL-1、TNF-的影响[J]. 中国中医骨伤科杂志，2009,17(6): 8-9

The Paeonol impact of Paeonol on IL-1β、TNF-α adjuvant arthritis in rats IL-1β、TNF-α with adjuvant arthritis

SHILei,SUNQing-zhi,WANGJian-jie

(The First Affiliated Hospital of Jiamusi University,Jiamusi 154003, China)

Objective:To explore the mechanisms of Paeonol on RA by applying Paeonol on On rrats who sufferinged from rheumatoid arthritis (RA) and applications paeonol, After the detectioning rats’ IL-1β, TNF-α levels. and treatment of rat experiments IL-1β, TNF-α levels, draw action Paeonol RA explore mechanisms for Paeonol of RA. Methods: Experimental Methods of Freund's complete adjuvant was usd to make the rat model of adjuvant arthritis (AA) ,A week later, rats were given on low-dose rats Paeonol (8mg / kg), and high doses of paeonol (32mg / kg) once daily for 21 days,For those RA rats whoe applicationed of RA Paeonol, their foot swelling were inhibited to some in rats a certain extent, by The method of ELISA was used to work out, come RA rats IL-1β, TNF-α levels of RA ratsin. Results: Compared with the normal group, rats in model group appeareds hind paw swelling immediately duringin the modeling of the 15 days immediately hind paw swelling, and arthritis index increased (P<0.05).ExperimentsshowedthatPaeonolobviouslymakesratscontralateralfootswellingtimedelayafterRAandreducedexperimentalratpawswelling(P<0.05).andhighdosesofpaeonolcanreduceIL-1β,TNF-αlevels(P<0.05).Conclusion: The application of Paeonol on rats with RA can reduce the level of application Paeonol IL-1β and TNF-α, suggesting Paeonol can inhibit the development of RA.

RA；IL-1β；TNF-α；Paeonol

黑龙江省卫生厅科研课题项目，编号：2013250。

石磊(1968～)男，黑龙江佳木斯人，硕士，主任医师。

孙庆治(1978～)男，黑龙江佳木斯人，硕士，主治医师。E-mail:sqz_sun@163.com。

R285. 5

A

1008-0104(2015)04-0016-02

2015-03-26)