HPLC测定紫丁香叶中紫丁香苷的含量

章春宇庄程商量

（1长春市健康教育中心，吉林 长春130021；2长春市朝阳区卫生局卫生监督所；3吉林省肿瘤医院）

HPLC测定紫丁香叶中紫丁香苷的含量

章春宇1庄程2商量3

（1长春市健康教育中心，吉林 长春130021；2长春市朝阳区卫生局卫生监督所；3吉林省肿瘤医院）

目的：建立紫丁香叶中紫丁香苷含量的高效液相检测方法。方法：采用Apollo C18（250 mm×4.6 mm，5μm）色谱柱；流动相为甲醇-水（15∶85）；检测波长为265 nm；柱温：30℃；流速：0.8 m L/m in。结果：紫丁香苷进样量在0.144 48～0.722 4μg/mL范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系（r=0.999 99），平均加样回收率为100.00%，RSD=1.14%（n=6）。结论：该方法易于操作，结果准确，重现性良好，可用于紫丁香叶的质量控制。

高效液相色谱法；紫丁香苷；紫丁香叶；含量测定

紫丁香叶是可药用的丁香叶中的一种，为木犀科植物紫丁香（Syringa oblata Lindl.）的干燥叶。东北地区分布极广，主要用其叶，丁香叶的药效已得到肯定，是一种理想的广谱抗菌药，以其为原料生产的炎立消片剂和炎立消胶囊剂被《中华人民共和国卫生部药品标准》[1-2]所收载，主要治疗痢疾、急性黄疸型肝炎等，该药材的现行质量标准收载于《黑龙江省中药材标准》（2001年版），由于历史原因，该标准只有简单的显微鉴别及薄层色谱鉴别（TLC），尚无含量测定，为进一步提高药材的质量控制水平，本研究参考了有关文献[3-5]，以紫丁香苷为指标，采用高效液相色谱法（HPLC）测定其含量，为丁香叶药材质量标准的提高积累实验数据。

1 仪器与试药

岛津LC-2010A高效液相色谱仪；试剂：甲醇为色谱纯，水为纯化水，鉴别所用试剂均为分析纯，紫丁香苷对照品（批号：111574-200201，购自原中国药品生物制品检定所）。紫丁香叶（收集于吉林省通化市，经吉林省药检所鉴定为紫丁香叶）。

2 含量测定

2.1 色谱条件

色谱柱：Apollo C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；甲醇-水（15∶85）为流动相；检测波长为265 nm；柱温：30℃；流速：0.8 m L/m in。理论塔板数以紫丁香苷峰计算，应不得低于3 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取紫丁香苷对照品适量，加甲醇制成每1 m L含40μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液取本品，粉碎，过3号筛，混匀，取10 g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷50 m L，回流提取至无色，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，置具塞锥形瓶中，加入70%甲醇溶液50 m L，回流提取2小时，滤过，滤渣用70%甲醇溶液20 m L洗涤，合并滤液与洗液，蒸干，残渣加水20 m L使溶解，通过处理好的大孔吸附树脂柱（内径1.5 cm，高15 cm）用水200 m L洗脱，弃去水液，再用20%乙醇洗脱150 m L，弃去20%乙醇洗脱液，继用70%乙醇洗脱，收集洗脱液100m L，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10 m L量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得。

2.3 溶剂色谱峰干扰试验

精密吸取甲醇10μL，注入液相色谱仪，在与紫丁香苷色谱峰相应保留时间处，溶剂色谱峰无干扰。见图1。

图1 HPLC色谱图

2.4 线性关系考察

取紫丁香苷对照品适量，加甲醇制成每1 m L含0.072 24 mg/m L的溶液。精密吸取上述溶液2，4，6，8，10μL，分别注入液相色谱仪。以峰面积为纵坐标，对照品进样量为横坐标绘制标准曲线。测得回归方程为：

Y=3 169 624.2X－5 533.7（r=0.999 9）；

表明紫丁香苷进样量在0.144 48～0.722 4μg/m L范围内呈良好的线性关系。

2.5 稳定性试验

取同一供试品溶液（序号 1）10μL，分别在0，8，13，26，31 h，照2.2方法测定，按紫丁香苷峰面积计算，RSD为2.75%，结果未发生明显变化，表明供试品溶液稳定。

2.6 精密度试验

取同一供试品溶液（序号1），连续进样6次，测得峰面积积分值RSD为0.32%，结果表明，本方法所用仪器精密度良好。

2.7 重复性试验

取同一供试品（序号1）6份，依法独立测定，结果紫丁香苷平均含量为0.003 7%，RSD为1.38%。

2.8 回收率试验

取经同法测定的已知含量的样品（序号1）6份，每份5 g，精密称定，精密加入紫丁香苷对照品适量，依法测定，计算回收率，测定结果见表1。

表2 紫丁香叶回收率试验结果

2.9 样品含量测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定样品3批，含量分别为0.003 6%，0.004 4%，0.003 2%。

3 讨论

3.1 测定成分选择

丁香属植物主要含有环烯醚萜、苯丙素酚、黄酮、苯乙醇和生物碱类等成分，紫丁香苷和丁香苦苷为其代表性成分，丁香苦苷含量高于紫丁香苷，但丁香苦苷国家无标准对照品，故以紫丁香苷为指标，采用HPLC测定其含量。

3.2 测定波长的选择

检测波长的选择通过紫外扫描及二极管阵列检测器（DAD）检测，紫丁香苷在220 nm和265 nm处有最大吸收，由于220 nm处测定有干扰，故选择265 nm为检测波长。

3.3 色谱柱的选择

本试验考察了Kromasil C18（4.6mm×250mm，5μm)柱；Agilent-Tc C18（4.6 mm×250 mm，5μm)柱；Apollo C18（250 mm×4.6 mm，5μm）柱，只有Apollo C18（250 mm×4.6 mm，5μm）柱峰形正态，分离良好，说明该物质对色谱柱有一定选择性。

3.4 提取溶剂的选择

本试验考察了甲醇和70%甲醇两种溶剂，结果70%甲醇含量较高，故选择70%甲醇作溶剂。

本试验中各项测定结果说明建立的紫丁香叶中紫丁香苷的HPLC测定方法易于操作，结果准确，重现性良好，可用于紫丁香叶的质量控制。

[1] 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准[M].中药成方制剂第九册.北京：人民卫生出版社，1990.

[2] 卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准[M].中药成方制剂第二十册.北京：人民卫生出版社，1990.

[3] 张莲秀.丁香叶的研究进展[J].海峡药学，2009，21（6）：20-23.

[4] 杨红.刺五加胶囊中紫丁香苷含量的HPLC测定[J].时珍国医国药，2013，24（2）：404-405.

[5] 张崇禧，张莹莹，田芯，等.HPLC测定不同产地刺五加中紫丁香苷的含量[J].中成药，2008，30（11）：1648-1651.

Content Determ ination of Syringin in Lilac Leaves by HPLC

Zhang Chunyu1，Zhuang Cheng2，Shang Liang3（1 Health Education Institute of Changchun City，Jilin Changchun 130021，China；2 Agency for Public Health Inspection of Chaoyang Health Bureau of Changchun City；3 Tumor Hospital of Jilin Province）

Objective：To develop a method to determ ine the content of syringin in lilac leaves by HPLC.Methods：Apollo C18（250 mm×4.6 mm，5μm）was adopted w ith mobile phase of methanol-water（15∶85），the detection wavelength was at 265 nm，the column temperature was at 30℃ and the flow rate was 0.8 mL/min.Results：A good linear correlation of syringin was observed w ithin the range of 0.144 48～ 0.722 4μg/m L （r= 0.999 99）and the average recovery was 100.00%w ith RSD 1.14% （n=6）.Conclusion：The method is convenient，sensitive and accurate.It can be used for the quality control of lilac leaves.

HPLC；Syringin；Lilac Leaves；Content Determ ination

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.03.007

2014-12-29）

章春宇，女，副主任药师。研究方向：药品质量标准。E-mail：526416900@qq.com