Akt、TGF-β1、mTOR在结直肠癌中的表达及意义

孙 琦

(河北省抚宁县人民医院，河北 抚宁 066300)

Akt、TGF-β1、mTOR在结直肠癌中的表达及意义

孙 琦

(河北省抚宁县人民医院，河北 抚宁 066300)

目的 探讨Akt、TGF-β1、mTOR在结直肠癌中的表达，分析其与结直肠癌的病理相关性。方法 选取手术后诊断为结直肠癌的标本40例为癌变组，另选取20例健康者的非结直肠癌变组织为健康组。基于免疫组化染色法检测所有入选组织中Akt、TGF-β1、mTOR阳性表达率，做组间比较；另统计癌变组患者癌变组织的TNM分期、分化程度、淋巴转移情况，做3种基因表达的相关性比较。结果 Akt、TGF-β1、mTOR三者的表达阳性率在癌变组与健康组间差异有统计学意义(P均<0.05)，在不同分期、分化程度及是否发生淋巴转移的病理分型间差异均有统计学意义(P均<0.05)；Akt、TGF-β1、mTOR三者联合用于结直肠癌诊断的准确度、特异性、准确性均显著高于三者单独诊断(P均<0.05)。结论 Akt、TGF-β1、mTOR三者的表达与结直肠癌发病具显著相关性，且随着TNM分期、分化程度、淋巴转移情况不同而表现出显著性差异，且三者联合用于结直肠癌病情程度的诊断具有较高的敏感性、特异性及准确度，因此三者联合检测可能对结直肠癌变病理程度判定及治疗有一定的指导意义。

Akt；TGF-β1；mTOR；结直肠癌

结直肠癌为常见的恶性肿瘤疾病，目前因较多的物理或化学致癌因子产生，以及人们饮食结构的改变，使结直肠癌的患病率呈上升趋势。据相关统计结果显示：结直肠癌的患病率增长速度占据所有癌症的首位，且发病时期直接影响着治疗效果[1]。对于常规切除手术来说，若于患者癌变组织分化严重或出现淋巴转移的发病晚期进行手术，则术后5年内的存活率只有50%左右[2]，而于患者发病早期，癌变组织分化尚未严重及淋巴未发生转移时进行手术，则术后5年内的存活率可达90%左右,因此尽早对该病进行确诊并及时采取治疗措施，是有效防止其恶化的途径[3]。所以，众多研究将结直肠癌的治疗关键放于病情判定指标上。Akt、TGF-β1、mTOR可能参与细胞增殖及分化的调控，本研究分析了Akt、TGF-β1、mTOR在结直肠癌中的表达情况，现报道如下。

1 临床资料

1.1一般资料 选取2013年3月—2014年4月于我院手术后诊断为结直肠癌的标本40例为癌变组，其中男23例，女17例；年龄26～67(42.1±13.2)岁；AJCC结直肠癌TNM分期Ⅰ+Ⅱ期14例，Ⅲ+Ⅳ期26例；分化程度高度12例，中度18例，低度10例；淋巴结转移18例，无转移22例。另选取同期20例健康者的非结直肠癌变组织为健康组，男11例，女9例；年龄25～67(41.7±12.8)岁。纳入标准：临床资料完整，手术后经经验丰富的医师鉴定确诊为结肠癌变；术后癌变组织标本完好保存，患者及家属自愿参与研究，签署自愿协议书。排除标准：排除结直肠癌家族史，及使用化疗、放疗或非甾体抗炎药物史的患者；排除并发其他部位恶性肿瘤的患者，排除临床资料不完整者及未签署自愿协议书者。

1.2 所用试剂与仪器 Akt、TGF-β1、mTOR兔抗人多克隆抗体购自美国Epitomics公司；DAB试剂盒、S-P试剂盒、链亲和素一过氧化物酶购自美国 cell signaling technology公司；切片机、烘干机、电子显微镜购自美国cell signaling technology公司，37 ℃恒温孵育箱等为国产。

1.3 方法

1.3.1 免疫组化染色 石蜡包埋、切片、洗液清洗脱蜡；乙醇浸泡、抗原还原、洗液清洗；滴加氧化酶阻断剂，洗液冲洗；滴加山羊血清工作液；滴加45 μL一抗，低温放置后洗液冲洗；滴加45 μL二抗，静置后洗液冲洗；滴加链亲和素一过氧化物酶，放置，洗液冲洗；滴加现配显色剂(DAB)；苏木素染色，水洗；乙醇脱水封片待用；于显微镜下观察Akt、TGF-β1、mTOR三者的表达阳性率。

1.3.2 阳性判断 依照文献[4-6]方法：Akt、TGF-β1、mTOR三者表达蛋白染色成功的标志均为细胞液被染成颗粒状棕黄色物质。于光镜下取1 000个细胞观察，最终结果以染色面积与染色程度的乘积得分进行综合评定，其中染色面积得分规定为若染色成功细胞率为0则计分为0分，<25%计分为1分，25%～40%计为2分，41%～80%为3分，超过80%为4分。染色程度则按照棕褐色、棕黄色、黄色、无显色分别为3分、2分、1分、0分。最终染色面积得分与染色程度得分若为0分则为阴性，以“-”表示；1～2分则为弱阳性，以“+”表示；3分为阳性，以“”表示；≥4分为强阳性，以“”表示。(+～)记为阳性。

1.4 统计学方法 应用SPSS 21.0软件处理数据。计数资料以率表示，组间进行卡方检验；计量资料以“均数±标准差”表示，组间比较进行t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.12组Akt、TGF-β1、mTOR表达阳性情况比较 癌变组Akt、TGF-β1、mTOR阳性率较健康组明显上升。见表1。

表1 2组Akt、TGF-β1、mTOR表达阳性情况比较 例(%)

2.2 癌变组不同病理分型间Akt、TGF-β1、mTOR表达阳性率比较 对于结直肠组织癌变患者，Ⅲ+Ⅳ期患者的癌变组织中Akt、TGF-β1、mTOR表达阳性率均明显高于Ⅰ+Ⅱ期(P均<0.05)；而随着癌变组织分化程度的升高，Akt、TGF-β1、mTOR表达阳性率均呈现显著上升趋势(P均<0.05)；有淋巴转移的结直肠癌患者的Akt、TGF-β1、mTOR表达阳性率均明显高于无淋巴转移的患者(P<0.05)。见表2。

表2 癌变组不同病理分型间Akt、TGF-β1、mTOR表达阳性率比较

2.3 Akt、TGF-β1、mTOR分别及联合用于结直肠癌诊断的性能比较 Akt、TGF-β1、mTOR三者联合诊断结直肠癌的准确度为92%，敏感性为90%，特异性为95%，显著高于三者单独用于诊断的准确度、敏感性及特异性(P均<0.05)。见表3。

表3 Akt、TGF-β1、mTOR分别及联合用于结直肠癌诊断的性能比较 %

3 讨 论

3.1Akt与结直肠癌 Akt为丝氨酸与苏氨酸类的蛋白激酶，也叫B类蛋白类激酶(PKB)[7]，包括480个左右的氨基酸残基，对机体细胞的繁殖及凋亡起着重要的调控作用。Akt主要通过磷酸活化一些细胞的关键调控因子(白介素家族、mTOR等因子)间接对细胞的生理代谢与凋亡起到调节作用。而pAkt则为Akt磷酸活化调控因子后的产物，当前众多研究将Akt及pAkt共同作为癌变组织诊断的评定指标[8]，且诊断的特异性、敏感性及准确度均较高。本次研究也证实了这一观点，研究中发现Akt在结直肠癌组织癌变组的表达阳性率明显高于健康组，且在各分期、分化程度、是否淋巴转移的病理分型中均表现出显著性差异，由此可以认为Akt与结直肠癌及病情发展有明显相关性。

3.2 TGF-β1与结直肠癌 TGF-β1为一种对癌细胞生长增殖分化周期等具有调控作用的多肽链，其主要通过与受体结合后发挥作用。TGF-β1与相应受体结合后主要通过介导smads的信号通路以间接对细胞起到调控作用[9]，但其作用机制尚未明确。TGF-β1对癌变细胞具有双重调控作用，其在恶性肿瘤早期会对肿瘤细胞的分裂、扩散、生长等起的抑制作用；而当肿瘤细胞累积到一定的范围与数量时，TGF-β1对肿瘤细胞失去调控能力，肿瘤细胞开始无限制生长及分裂，与此同时，TGF-β1能够刺激肿瘤血管的生长，为肿瘤细胞的繁殖提供足够的养料和血液。由此可以推测，TGF-β1可能与癌变组织的病情发展程度相关。TGF-β1蛋白的表达与结直肠癌变、前列腺癌变、膀胱癌变、乳腺癌变、宫颈癌变等多种恶性肿瘤疾病有关，癌变组织中TGF-β1的蛋白表达阳性率明显高于非癌变组织。本研究中结直肠癌变组的TGF-β1蛋白表达阳性率明显高于对照组，且随着分期不同、分化程度不同、淋巴转移与否，TGF-β1的表达阳性率均呈现显著性差异，由此可见TGF-β1与结直肠癌及病情发展有明显相关性。

3.3 mTOR与结直肠癌 mTOR为一类蛋白质物质，对人体蛋白质的合成及细胞的生长分裂起着重要的调节作用。mTOR通过介导细胞生长分裂时所需的养料及氧气对其发挥调控作用；此外mTOR信号通路通过控制mTOR的表达量间接调控细胞，这与TGF-β1(可通过介导smads的信号通路以间接对细胞起到调控作用)调控癌变细胞生长分裂作用有了交集；另外mTOR对癌变细胞的凋亡起着显著的调控作用，它能够明显降低细胞抗凋亡因子的活性，并促进促凋亡因子的表达，从而促进癌变细胞的死亡。本研究显示，结直肠癌变组的mTOR蛋白表达阳性率明显高于对照组，且随着分期不同、分化程度不同以及是否发生淋巴转移，mTOR表达阳性率均呈现显著性差异，由此可见mTOR与结直肠癌及病情发展有明显相关性。

本研究还对Akt、TGF-β1、mTOR三者联合及单独用于结直肠癌诊断的准确度、敏感性、特异性进行了比较，证实三者联合诊断的准确度、敏感性、特异性明显高于单独检测。

总之Akt、TGF-β1、mTOR三者的表达与结直肠癌发病具显著相关性，且随着TNM分期、分化程度、淋巴转移情况不同而有显著差异。三者联合检测用于结直肠癌病情程度的诊断具有较高的敏感性、特异性及准确度，因此Akt、TGF-β1、mTOR三者表达的联合检测可能对结直肠癌变的病理程度及治疗有一定的指导意义。

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10.3969/j.issn.1008-8849.2015.21.026

R735.3

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1008-8849(2015)21-2351-03

2014-12-15