鼠曲草化学成分研究

谢建祥， 王海东， 林伟青*

（1.江西省儿童医院，江西　南昌　330006；2.江西省人民医院，江西　南昌　330006）

［成分分析］

鼠曲草化学成分研究

谢建祥1， 王海东2， 林伟青2*

（1.江西省儿童医院，江西南昌330006；2.江西省人民医院，江西南昌330006）

目的 研究鼠曲草的化学成分。方法 鼠曲草的乙醇提取物依次经石油醚和乙酸乙酯萃取，再经硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20柱色谱法等进行分离纯化，并通过波谱技术及理化性质鉴定化合物结构。结果 从鼠曲草中分离得到8个化合物，分别为β-谷甾醇（1），芦丁（2），槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3），异泽兰黄素（4），5-羟基-6，7，3′，4′-四甲氧基黄酮（5），槲皮素（6），木犀草素（7）和芹菜素（8）。结论 其中化合物5为首次从鼠曲草属植物中分离得到，化合物8为首次从该植物中分离得到。

鼠曲草；乙醇提取物；化学成分；异泽兰黄素；5-羟基-6，7，3′，4′-四甲氧基黄酮；芹菜素

鼠曲草Gnaphlium affine D.Don又名佛耳草、清明菜、白艾，系菊科鼠曲草属植物，具有降血脂、降血糖、降血压、抗衰老、消炎抑菌、增强免疫力等多种功效［1-2］。清明节前后，民间广泛利用鼠曲草嫩尖叶加工饵料，故有“清明菜”之称。为更好地开发利用该资源，阐明其药效物质基础，对该植物化学成分进行了较为系统的研究，从中分离得到8个化合物，分别鉴定为：β-谷甾醇（1），芦丁（2），槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3），异泽兰黄素（4），5-羟基-6，7，3′，4′-四甲氧基黄酮（5），槲皮素（6），木犀草素（7）和芹菜素（8）。

1　仪器与材料

Yanaco MP-s3显微熔点测定仪（未校正，日本Yanaco公司），Bruker ARX-300/600核磁共振仪（TMS内标，瑞士Bruker公司），LCQ Advantage型LC-MS质谱仪测定（美国Thermofinnigan公司），薄层色谱及柱色谱用硅胶（青岛海洋化工厂），葡聚糖凝胶Sephadex LH-20（瑞士Pharmacia公司），所用试剂均为分析纯。

药材于2009年5月采集自江西省靖安县，并由江西中医药大学中药学院龚千峰教授鉴定，标本存放于江西省儿童医院。

2　提取与分离

将7.5 kg鼠曲草药材粉末置于渗漏桶中，用95%乙醇浸提7 d，重复3次，合并提取液并减压浓缩至无醇味，得总浸膏910 g。总浸膏与适量水混悬，然后依次用石油醚、乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯部分（179 g）利用硅胶柱层析分离纯化，以石油醚-丙酮梯度洗脱（60∶1→1∶1），得到7个亚组分（EA 1～EA7）。EA3组分经硅胶柱层析（石油醚-乙酸乙酯，20∶1→10∶1）得化合物1（200 mg）。EA4用硅胶柱层析（石油醚-乙酸乙酯，10∶1→4∶1）和Sephadex LH-20（EtOH）法，得到化合物4（20 mg）和5（32 mg）。EA 6采用Sephadex LH-20（乙醇）柱层析得化合物6（8 mg），7（24 mg）和8（40 mg）。EA7通过RP-18硅胶柱（MeOHH2O，20∶1→10∶1）和Sephadex LH-20（乙醇）依次层析，得到化合物2（22 mg）和3（10 mg）。

3　结构鉴定

化合物1：无色针晶（乙酸乙酯），mp 139～140℃。薄层层析TLC检测Rf值和显色行为与β-谷甾醇对照品一致，与β-谷甾醇对照品混合后，熔点不下降，故鉴定为β-谷甾醇（β-sitosterol）。

化合物2：黄色粉末（甲醇），mp 176～178℃。盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应阳性，酸水解检出葡萄糖和鼠李糖。1H-NMR（300 MHz，DMSO-d6）δ：12.58（1H，s，5-OH），6.18（1H，brs，H-6），6.37（1 H，brs，H-8），7.54（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），7.52（1H，dd，J=8.7，2.0 Hz，H-6'），6.84（1H，d，J=8.7 Hz，H-5′），5.34（1H，d，J=6.3 Hz，H-1′），4.37（1H，brs，H-1″），0.99（3H，d，J=6.0 Hz，Rha-CH3）。13C-NMR（75 MHz，DMSO-d6）δ：156.4（C-2），133.8（C-3），177.6（C-4），161.5（C-5），99.1（C-6），164.5（C-7），93.8（C-8），156.9（C-9），104.5（C-10），121.3（C-1′），115.2（C-2′），144.9（C-3′），148.5（C-4′），116.3（C-5′），121.3（C-6′），101.2（glc-1），74.3（glc-2），76.5（glc-3），70.1（glc-4），76.2（glc-5），67.1（glc-6），100.8（rha-1），70-5（rha-2），70.7（rha-3），72.0（rha-4），68.5（rha-5），17.8（rha-6）。以上数据与文献［3］报道的芦丁基本一致，故鉴定化合物2为芦丁。

化合物3：黄色粉末（甲醇），mp 225～227℃，盐酸-镁粉反应阳性，Molish反应阳性。1HNMR（300 MHz，DMSO-d6）δ：12.58（1H，s，5-OH），7.58（1H，d，J=1.8 Hz，H-2′），7.56（1 H，dd，J=8.8，1.8 Hz，H-6′），6.84（1 H，d，J=8.8 Hz，H-5′），6.38（1H，d，J=1.5 Hz，H-8），6.20（1 H，d，J=1.5 Hz，H-6），5.47（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″）。13C-NMR（75 MHz，DMSO-d6）δ：156.3（C-2），133.6（C-3），177.6（C-4），161.7（C-5），98.8（C-6），164.5（C-7），93.6（C-8），156.5（C-9），104.4（C-10），121.3（C-1′），115.4（C-2′），144.8（C-3′），148.6（C-4′），116.5（C-5′），121.6（C-6′），100.8（C-1″），74.2（C-2″），77.7（C-3″），70.4（C-4″），76.6（C-5″），61.2（C-6″）。以上数据与文献［4］报道的数据基本一致，故鉴定化合物3为槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物4：黄色固体，ESI-MS m/z 345［M+ H］+（分子式C18H16O7）。三氯化铁-铁氰化钾反应阳性，提示存在酚羟基，盐酸-镁粉反应阳性，三氯化铝反应阳性，提示该化合物为黄酮类化合物。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：7.64（1H，dd，J=2.1，8.5 Hz，H-6′），7.52（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），7.08（1H，d，J=8.6 Hz，H-5′），6.93（1H，s，H-3），6.61（1H，s，H-8），3.87（6-OCH3），3.84（3′-OCH3），3.76（4′-OCH3）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：182.6（C-4），163.8（C-2），157.7（C-7），153.2（C-5），152.9（C-9），152.6（C-4′），149.4（C-3′），131.8（C-6），123.4（C-1′），120.4（C-6′），112.1（C-5′），109.8（C-2′），104.6（C-10），103.8（C-3），94.8（C-8），60.4，56.3，56.2（each OCH3）。以上数据与文献［5-6］报道的异泽兰黄素（eupatilin）基本一致，故鉴定化合物4为5，7-二羟基-6，3′，4′-三甲氧基黄酮，即异泽兰黄素。

化合物5：黄色晶体，C19H18O7。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：7.50（1H，dd，J=8.4，1.6 Hz，H-6′），7.31（1H，d，J=1.6 Hz，H-2′），6.96（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.58（1H，s，H-8），6.53（1H，s，H-3），3.91（3H，s，OCH3），3.95（3H，s，OCH3），3.96（3H，s，OCH3），3.97（3H，s，OCH3）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：164（s，C-2），104.4（d，C-3），182.5（s，C-4），153.2（s，C-5），132.7（s，C-6），158.7（s，C-7），90.6（d，C-8），153.2（s，C-9），106.1（s，C-10），123.8（s，C-1′），111.2（d，C-2′），149.3（s，C-3′），152.3（s，C-4′），108.8（d，C-5′），120.1（d，C-6′），60.8（OCH3），56.3（OCH3），56.1（OCH3），56.0（OCH3）；ESI-MS m/z 356［M-H］-。以上数据与文献报道［7］的5-hydroxy-6，7，3′，4′-tetramethoxyflavone（HTF）基本一致，故鉴定化合物5为5-羟基-6，7，3′，4-四甲氧基黄酮。

化合物6：黄色粉末，mp 313～315℃，ESIMS m/z 301［M-H］-，盐酸-镁粉反应阳性。1HNMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：12.48（1H，5-OH），7.67（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），7.52（1H，dd，J=8.4，2.0 Hz，H-6′），6.87（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.41（1H，d，J=1.6 Hz，H-8），6.19（1H，d，J=1.6 Hz，H-6）。其波谱数据与文献［8-9］报道的数据基本一致，故确定该化合物为槲皮素。

化合物7：黄色粉末，mp＞300℃，TLC紫外灯下显色，喷AlCl3有黄色荧光，提示可能为黄酮。EI-MS m/z 286（M+，100），258，229，153，134。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：7.41（1H，dd，J=7.6，2.0 Hz，H-6′），7.39（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.88（1H，d，J=7.6 Hz，H-5′），6.66（1H，s，H-3），6.44（1H，brs，H-8），6.18（1H，brs，H-6）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：181.7（C-4），164.3（C-7），163.9（C-2），161.5（C-9），157.3（C-5），149.8（C-4′），145.8（C-3′），121.4（C-6′），119.0（C-1′），116.0（C-5′），113.3（C-2′），103.6（C-10），102.8（C-3），98.9（C-6），93.9（C-8）。其波谱数据与文献［10-11］报道的木犀草素（luteolin）一致。

化合物8：淡黄色粉末，mp＞300℃，TLC紫外灯下显色，喷AlCl3有黄色荧光，提示可能为黄酮。EI-MS出现分子离子峰m/z270（M+，100），碎片峰为242、153、121。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：12.95（1H，5-OH），7.92（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，6′），6.93（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，5′），6.78（1H，s，H-3），6.50（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.20（1H，d，J= 1.2 Hz，H-6）。13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：181.9（C-4），164.3（C-2），164.0（C-7），161.6（C-5），161.3（C-4′），157.5（C-9），128.7（C-2′，C-6′），121.3（C-1′），116.2（C-3′，C-5′），103.8（C-10），103.0（C-3），99.0（C-6），94.2（C-8）。其波谱数据与文献［11-12］报道的芹菜素（apigenin）一致。

［1］ 江苏新医学院.中药大词典：下册［M］.上海：上海人民出版社，1979：2501-2502.

［2］ 席忠新，王 燕，刘 波，等.鼠曲草属植物化学成分与药理作用研究进展［J］.医药导报，2010，29（11）：1462-1466.

［3］ 冯子明，杨桠楠，姜建双，等.小蓟的化学成分研究［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（6）：87.

［4］ 李 菁，于德泉.灯盏花化学成分研究［J］.中国中药杂志，2011，36（11）：1458.

［5］ 张 健，钱大玮，李友宾，等.菊花的化学成分研究［J］.天然产物研究与开发，2006，18（1）：71.

［6］ 唐生安，孙 亮，翟慧媛，等.艾叶化学成分的研究［J］.天津医科大学学报，2011，17（4）：461-463.

［7］ Malterud K E，Hanche-Olsen I M，Smith-Kielland I.Flavonoids from Orthosiphon spicatus［J］.Plant med，1989，55（6）：569-570.

［8］ 李春梅，王 涛，张 祎，等.中药黄蜀葵花化学成分的分离与鉴定（Ⅱ）［J］.沈阳药科大学学报，2010，27（10）：767-771.

［9］ 孙 群，陆 叶，吴双庆，等.秋鼠曲草化学成分研究［J］.中药材，2012，35（4）：566-568.

［10］ Xie T，Liu J，Liang JY，etal.Acetylenes and flavonoids from Artemisia scopariaⅡ［J］.Chin J Nat Med，2005，3（2）：86-89.

［11］ 杨 娟，蔡小梅，穆淑珍，等.猪殃殃黄酮类成分研究［J］.中国药学杂志，2009，34（14）：1475-1477.

［12］ LüH，Li Q，Zhong J，et al.Studies on flavonoids from Hefichrysum arenarium［J］.Chin Pharm J，2008，43（16）：11-13.

Chem ical constituents of Gnaphlium affine

XIE Jan-xiang1， WANG Hai-dong2， LINWei-qing2*
（1.Jiangxi Proυincial Children's Hospital，Nanchang 330006，China；2.Jiangxi Proυincial People's Hospital，Nanchang 330006，China）

AIM To study the chemical constituents of Gnaphlium affine.METHODS 95%ethanolic extract of G.affine was extracted with petroleum ether and ethyl acetate in turn and then was separated extensively by silica gel，Sephadex LH-20 chromatography.Their structures were elucidated by means of spectral data analysis. RESULTS Eight compoundswere isolated and identified asβ-sitosterol（1），rutin（2），quercetin-3-O-β-D glucopyranoside（3），eupatilin（4），5-hydroxy-6，7，3′，4′-tetramethoxyflavone（5），quercetin（6），luteolin（7）and apigenin（8）.CONCLUSION Compound 5 is isolated from the genus for the first time.Compound 8 is isolated from this plant for the first time.

Gnaphalium affine D.Don；ethanolic extract；chemical constituent；eupatilin；5-hydroxy-6，7，3′，4′-tetramethoxyflavone；apigenin

R284.1

A

1001-1528（2015）03-0553-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.03.020

2014-03-15

谢建祥，教授，主任医师，研究方向为中西医结合。E-mail：xiejianx@gmail.com

林伟青 Tel：13576107806，E-mail：lwq1977@126.com