加强兽医实验室建设 提高服务水平

孙艳（湖北省潜江市动物疫病预防控制中心 433199）

加强兽医实验室建设 提高服务水平

孙艳（湖北省潜江市动物疫病预防控制中心 433199）

兽医实验室不仅要利用血清学、流行病学等技术手段对动物疫病进行检测和分析，还必须通过细菌的分离和培养、药敏试验以及病原学检测技术对动物疫病进行确诊，只有防治结合，才能更好的为畜牧业服务。

兽医实验室；检测分析；病原学检测；服务

近年来，随着国家动物疫病检测计划的实施，兽医实验室发挥着越来越重要的作用。实验室能利用血清学、流行病学等技术手段对动物疫病进行检测和诊断，为政府部门和养殖企业提供准确、快速的疫病检测数据和分析报告，协助制订科学的防治政策和建立有效的疫病控制计划与净化措施，为动物疫病控制和疫情处理的决策提供科学、准确的实验室技术依据，为动物疫病的疫情预报预警、风险评估和免疫效果评价提供科学数据，提高潜江市对重大动物疫病早期预警预报能力，动物疫病与畜产品质量安全的追踪溯源能力，处理紧急重大动物疫情和突发动物公共卫生事件的应急反应能力，保障潜江市畜牧业持续健康发展，保护人民身体健康。

1 兽医实验室的现状

1.1 实验室基本情况

本中心实验室建筑面积320m2，属于生物安全一级实验室。中心实验室设有解剖室、档案室和样品保存室、仪器室、洗涤消毒室、血清学检测室，主要负责实验室检测业务的受理、样品处理和保存、流行病学调查和分析及日常管理工作。

1.2 实验室工作人员情况

中心实验室共有专业技术人员3名，其中高级兽医师2名，中级兽医师1名。

1.3 实验室开展检测项目

目前实验室以抗体检测为主，开展了猪瘟ELISA试验、猪（牛）口蹄疫间接血凝试验、鸡新城疫和禽流感血凝与血凝抑制试验、布氏杆菌玻板凝集试验和血吸虫金标免疫试验。2014年本中心监测计划：猪瘟检测1320份、口蹄疫检测1760份、禽流感检测4360份、新城疫检测440份、血吸虫病检测6740份以及布氏杆菌病1000份。

2 提高县级兽医实验室诊断能力

正确合理的运用抗体检测技术，能指导我们正确地及时地进行防疫工作，可为某些疫病的诊断提供必要的依据，但是存在一定的局限性。随着畜牧业的迅速发展，畜禽集约化饲养程度不断提高，饲养规模不断扩大，饲养密度不断增加，产品交流更加频繁，动物疫病已成为制约畜牧业经济效益的主要因素之一。如果发生了疫病，我们就必须进行准确的诊断和治疗，只有防治结合，才能更好的为潜江市畜牧业服务。

2.1 细菌的分离、培养及药敏试验

2.1.1 培养基的制备

培养基是指在人工培养细菌时，提供给细菌生长繁殖所必需的营养物质的制品。基础培养基中所含的营养物质能满足一般病原菌生长繁殖所需的氮源、碳源和无机盐等。在基础培养基的基础上添加一些特殊成分（如糖类、血液、抑制剂等）则可制成营养培养基、鉴别培养基和选择培养基等。下面仅介绍普通琼脂培养基和血液琼脂培养基的制备。

2.1.1.1 普通琼脂培养基

普通琼脂培养基是常用的固体培养基，包括普通琼脂平板和普通琼脂斜面两种，前者用于分离纯种细菌，后者用于增殖纯种细菌或保存菌种。材料：①肉水：200ml；②蛋白胨：2g；③氯化钠：1g；④琼脂：5g；⑤无菌平皿、灭菌试管、三角烧瓶等。方法：①按上述数量把肉水、蛋白胨、氯化钠和琼脂放到三角烧瓶中，加热溶化。②趁热用pH试纸测酸碱度，用10%碳酸氢钠校正pH为7.2左右。③15磅高压蒸汽灭菌20～30min。④趁热将溶化的培养基倒入灭菌平皿内，每个平皿倒入约15ml，凝固后即成普通琼脂平板培养基；如趁热将培养基倒入灭菌试管内，再将试管斜放试验台上，凝固后即成普通琼脂斜面培养基。

2.1.1.2 血液琼脂培养基

有些细菌其营养要求较高，在普通琼脂培养基上生长不良，可用血液琼脂培养基进行培养。将灭菌的普通琼脂培养基加热融化，待冷至50℃左右，加入无菌的脱纤绵羊或家兔鲜血5%（即每100ml普琼加入鲜血5ml），在50～60℃的水中水浴混合后，倒入灭菌平皿，保存于4℃冰箱备用。

2.1.2 需氧性细菌分离培养和移植

2.1.2.1 划线分离培养法

（1）左手持皿，用左手的拇指、食指及中指将皿盖揭开呈20度左右的角度；

（2）右手持接种环，从病料中取少量材料涂布于培养基边缘，然后将接种环上多余的材料在火焰上烧毁，待接种环冷却后，再与所涂材料的地方轻轻接触，开始划线；

（3）划线中不宜过多地重复旧线，以免形成菌苔；

（4）接种完毕，在皿底上作好日期和接种者标记，平皿倒扣，置37℃培养24h。

2.1.2.2 纯培养的获得与移植

将划线分离培养24h的平皿从温箱取出，挑取单个菌落，经革兰氏染色镜检，证明不含杂菌，此时用接种环挑取单个菌落，移植于琼脂斜面培养，所得到的培养物，即为纯培养物。

2.1.3 药敏试验

（1）于纯培养斜面上，挑取相同的菌落4～5个；

（2）接种于肉汤培养基中，35℃培养6～8h；

（3）校正菌液浊度，使其与标准比浊管（0.5麦氏比浊管）的浓度相同；

（4）用无菌棉拭子取校正过的菌液，在试管壁上挤压几次，压去多余的菌液，涂布整个平板表面，多次旋转平板60度，涂布均匀；

（5）在室温中干燥3～5min后，用无菌镊子取药敏纸片，间距不小于24mm，纸片的中心距平板边缘不小于15mm；

（6）置35℃孵育18～24h后，用标尺量取抑菌圈直径，直径越大，对此药物越敏感。

2.2 病原学检测技术

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性—退火—延伸三个基本反应步骤构成：

（1）变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链解离，使之成为单链；

（2）退火：（复性）：温度降到55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；

（3）延伸：模板—引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链；

（4）重复循环变性—退火—延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板，每完成一个循环需2～4min，2～3h就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍；

（5）将扩增产物进行电泳，紫外凝胶成像仪成像观察结果。阳性对照出现清晰目的条带，阴性对照无带出现，实验结果成立。若被检样品出现与阳性对照一样清晰的条带，判为阳性，否则为阴性。

3 结论

科学监测和病原检测、准确分析是保证畜牧业突破性发展的基础，是提前发现疫情，快速反应，减少损失的有效方法。我们要充分发挥实验室资源优势，提高服务技能，逐步扩大服务覆盖面。