ABO血型鉴定中2例混合视野结果分析

靖春旭 赵菲

ABO血型鉴定中2例混合视野结果分析

靖春旭 赵菲

目的探讨ABO血型正反定型鉴定困难的血型鉴定及结果判断与分析。方法采用血型血清学方法对标本2例进行血型鉴定, 采用PCR-SSP法进行基因分型。结果案例1血清学ABO血型为A3B3亚型, 其基因分型结果为A102, B101, O01。案例2血清学ABO血型为A3亚型, 其基因分型结果为A101型。结论某些生理和病理原因会造成ABO正反定型不符, 在ABO血型检测时应注意结合临床诊断进行区分, 正确鉴定ABO血型。

ABO血型；亚型；混合视野

ABO血型系统是1900年由Karl Landsteiner 首先发现的,其A﹑B 抗原的免疫原性是所有人类血型系统抗原中免疫原性最强的, 血清中规律的存在抗-A或(和)抗-B抗体, ABO血型的正确定型对输血至关重要。由于生理或病理原因引起ABO抗原或抗体减弱造成的ABO正反定型不符, 常常会干扰ABO血型的正确定型, 本文以1例嵌合型和1例白血病导致的混合视野外观为研究对象, 对混合视野现象进行比较分析。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 案例1为本中心检验科送检献血者ABO正反不符标本；案例2为外院送检患者标本, 怀疑急性白血病,无输血史, ABO正反不符。

1.2 试剂与仪器 单克隆抗-A﹑抗-B, 抗-A1﹑抗-AB,抗-H, 抗-D﹑抗-C﹑抗-c﹑抗-E﹑抗-e, ABO试剂红细胞, 谱细胞均为上海血液生物医药有限公司产品。人源抗-A﹑抗-B(效价均≥64), 成人ABO细胞均为实验室自制试剂。所有试剂均经过批批检合格, 并在有效期内使用。KA-2200离心机(日本久保田), 毛细管血液离心机TG12MX(湖南赛特湘仪), 所有仪器均在校准有效期内使用。

1.3 血清学检测方法 均采用经典试管法进行检测［1］。

1.3.1 正反定型试验 按照标准操作规程进行操作。先将受检者红细胞洗涤3次, 配制成3%～5%红细胞悬液备用。正定型：取2支干净试管, 分别标为抗-A﹑抗-B, 分别滴加1滴抗血清试剂, 每管滴加1滴3%～5%受检者红细胞悬液；反定型：取4支干净试管, 分别标为Ac﹑Bc﹑Oc﹑自身, 每孔滴加2滴受检者血清, 再分别滴加1滴3%～5%试剂红细胞悬液和受检者红细胞悬液, 混匀, 3400 r/min离心15 s, 观察结果。

1.3.2 H抗原检测 1滴抗-H试剂加1滴3%～5%受检者红细胞悬液, 3400 r/min离心15 s, 观察结果。同时取新鲜成人B型红细胞和O型红细胞做强阳性和弱阳性对照, 根据各血型红细胞H抗原强度由强到弱依次为O型＞A2型＞B型＞A2B型＞A1型＞A1B型的特点, 判断被检者红细胞H抗原是否增强。

1.3.3 毛细管离心分离试验 使用毛细管取压积红细胞,封住远心端一侧, 配平放入毛细管离心机, 10000 r/min离心5 min, 用砂轮截取毛细管近心端约1 cm的红细胞作为新鲜细胞, 取毛细管远心端约1 cm的红细胞作为陈旧细胞, 红细胞三洗后配制成3%～5%的红细胞悬液进行试验。

1.3.4 Rh分型检测 取5支试管分别标识为抗-D﹑抗-C﹑抗-c﹑抗-E﹑抗-e, 每管加入1滴相应的Rh分型试剂, 再各加1滴被检者3%～5%红细胞悬液, 3400 r/min离心15 s,观察结果。

1.3.5 混合视野标准凝集比例建立试验 分别取3～5例检测结果为A型和B型的混合压积红细胞1 ml, 洗涤3次, 按照95%A细胞+5%B细胞, 90%A细胞+10%B细胞, 80%A细胞+20%B细胞…10%A细胞+90%B细胞, 5%A细胞+95%B细胞的比例配制成11份不同比例的3%红细胞悬液；取22支试管, 分别标为1-A﹑1-B…11-A﹑11-B, 加入相应抗-A或抗-B试剂50 μl/孔, 再分别加入50 μl红细胞悬液,混匀, 3400 r/min离心15 s, 反复离心几次, 观察结果。将病例1和病例2的红细胞配制成3%红细胞悬液, 同样条件下检测, 与标准管结果进行比较, 得出其凝集细胞的大致比例。

1.4 ABO基因测序 ABO基因测序由试剂公司完成。

2 结果

2.1 案例1试验结果

2.1.1 ABO正反定型检测结果 抗-A﹑抗-B结果为70% mf (表示混合视野)﹑80% mf, 其他为阴性。

2.1.2 人源试剂及抗-H测结果为 人源抗-A﹑抗-B结果为60% mf﹑70% mf；抗-H结果为2+。

2.1.3 Rh分型检测结果 抗-D﹑抗-c﹑抗-E结果为4+﹑3+﹑2+, 抗-C﹑抗-e结果为50% mf﹑40% mf。

2.1.4 毛细管离心分离检测结果 近心端和远心端抗-A﹑抗-B结果均为60% mf﹑70% mf。

2.1.5 基因分型及克隆检测结果 A102, B101, O01。

2.2 案例2试验结果

2.2.1 ABO正反定型检测结果 抗-A结果为40% mf, B细胞4+, 其他阴性。

2.2.2 人源试剂及抗-H检测结果 人源抗-A结果为40% mf﹑人源抗-B结果为阴性；抗-H结果为4+。

2.2.3 毛细管离心分离检测结果 近心端和远心端抗-A结果分别为5% mf﹑50% mf；近心端和远心端抗-B结果均为阴性。

2.2.4 基因分型及克隆检测结果 A101。

3 讨论

案例1的血清学试验结果符合A3B3的反应格局, 但从人群中A﹑B亚型的分布频率来看, 胡应明等［2］和许志远等［3］报道无偿献血者中A3亚型的比例约为1/100 000, B3亚型的比例约为2/100 000, 据此推算, 真正A3B3亚型的比例约为1/5 000 000 000, 极为罕见, 如果血清学检测结果出现A3B3的表现, 应该首先考虑排除其它原因造成的混合视野现象, 如嵌合现象﹑疾病影响(案例1为无偿献血者标本, 通过健康征询已排除输血史﹑移植史等)等。案例2患者无近期输血史,排除了输错血造成的混合视野现象, 进行临床追溯得知其为急性髓系白血病, 可判断为白血病引起的抗原减弱。对于这两例标本, 可以考虑采用毛细管离心分离方法, 检测比较新鲜和陈旧红细胞表面的抗原存在的差异来进行分析, 案例1的毛细管离心结果显示新鲜和陈旧红细胞表面抗原一致, 案例2毛细管离心结果显示新鲜红细胞表面抗原表达明显弱于陈旧红细胞；而生理原因形成的混合视野其新鲜和陈旧红细胞表面抗原表达应该无差异, 疾病状态(血液系统疾病)造成的混合视野可见新鲜和陈旧红细胞表面抗原表达存在明显差异。案例2新鲜细胞抗原比陈旧细胞明显减弱, 这可能是由于白血病引起的A或B抗原表达缺失是由于A或B基因产物欠缺或者不足所致, 而不是由于酶的作用底物缺乏所致,故其陈旧细胞的抗原性强于新鲜细胞［4］。

案例1为嵌合体, 嵌合现象是同种抗体减弱或缺少的不常见原因。真正的嵌合现象很少发现, 大半见于同卵双胎的人体, 有两种种群的红细胞终生存在与在体内。这两种组群的红细胞彼此都认为身体是自己的, 所以这些人不会产生抗-A或抗-B抗体, 而在其血清内没有可检出的同种抗体。若嵌合现象见于非同卵双胎的人体, 则是双受精的情况所引起, 而称之为嵌合体［4］。

嵌合体通过的分子生物学检测可以确认［5,6］, 由于案例1献血者未联系到其家人, 未能进行家系调查。其Rh分型检测抗-C﹑抗-e出现了混合视野也从另一个侧面印证了嵌合型的怀疑。这例标本也为我们对于混合视野的理解开阔了思路。嵌合体在血清学检测不易与亚型的混合视野区分, 临床工作中可能漏检部分嵌合体, 需要对亚型表型的患者进行分子生物学检测以便确认。

［1］ 刘达庄.免疫血液学.上海：上海科技出版社, 2007:41-47.

［2］ 胡应明, 何子毅, 陈金凤, 等.东莞市无偿献血者ABO亚型和弱D型分布调查.临床血液学杂志, 2014, 27(6):475-477.

［3］ 许志远, 王涛.北京地区献血人群ABO亚型研究.北京医学, 2013, 35(8):712-714.

［4］ 杰夫·丹尼尔.人类血型.北京：科学出版社, 2007:57-58.

［5］陈爱蓉, 黄毅.罕见开米拉A3B3血型的分子生物学研究.实验与检验医学, 2012, 30(1):15-18.

［6］喻琼, 郑岩.嵌合体血型的研究进展.中国输血杂志, 2010, 23(2):146-148.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.22.133

2015-08-19］

南阳市2014年科技攻关项目(项目编号：2014GG029)

473000 河南南阳市中心血站