金诃子低温提取物对6种标准菌株的抑制作用观察

赵小霞，邱丽君，苏卫东，宣成睿，孙鹏，杨丽敏

(1天津市第四中心医院，天津300140;2内蒙古医科大学)

诃子又名诃黎勒、诃黎、诃梨、随风子等，为君子科植物诃子及其变种绒毛诃子干燥的成熟果实，其味涩、性平，可祛三弊所引起的诸疾，有解毒之功效。文献［1～4］报道，诃子对多种致病菌和病毒有抑制和杀灭作用，是一种抗菌谱较广的单味药材。金诃子是诃子当中的最佳品种，色显金黄，故名为金诃子，具有涩肠止泻、利咽、调和药性、解毒等功效。本研究观察了金诃子不同部位低温提取物对6种标准菌株(大肠杆菌、痢疾杆菌、铜绿假单胞菌、白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌)在体外及体内试验中的抑制作用，旨在为金诃子的成分、药效研究及临床应用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 试验药物、菌株、动物及仪器 金诃子5种低温提取物由本课题组自行制备，分别称为1号部位、2号部位、3号部位、4号部位、5号部位，具体提取工艺见文献［5］;营养琼脂培养基购于上海伊华医学科技有限公司;胃膜素购于重庆格瑞林药业有限公司。大肠杆菌(细菌编号:25922)、痢疾杆菌(细菌编号:51285)、假单胞绿脓菌(细菌编号:27853)、变形杆菌(细菌编号:49001)、白色葡萄球菌(细菌编号:26101)、金黄色葡萄球菌(细菌编号:25923)购于中国生物制品检定所。昆明鼠360只，18～22 g，雌雄各半，购自内蒙古大学动物室。DZG-303A离子纯水机购于美国摩尔公司;培养箱购于日本日立公司;显微镜购于德国Leica公司;电子天平购于上海精科天平公司;PYX-DHS-35隔水式电热恒温培养箱购于上海医疗器械七厂。

1.2 金诃子低温提取物体外抑菌实验 将冻干的6种标准菌株进行复苏、传代培养，连续传代3代，后用密集划线法将每种菌株接种至1个固体培养皿中(共计6个培养皿)，将4个无菌钢杯等间距对称置于每个培养皿中。分别称取一定量的5种金诃子提取物(1号部位、2号部位、3号部位、4号部位、5号部位)，每种金诃子提取物用0.45%盐水配制成4种浓度，即 0、5、15、30 mg/mL，0.22 μm 微孔滤膜滤过除菌，每个钢杯中加入200 μL，药物含量分别为0、1、3、6 mg(共计30个培养皿)。37 ℃培养箱中培养24 h，观察抑菌圈直径，并用游标卡尺测量数据，单位为mm。

1.3 金诃子低温提取物体内抑菌实验 360只小鼠建立6种标准菌株的感染小鼠模型，小鼠腹腔注射含有5%胃膜素和致死剂量的标准菌株，每种模型60只。然后每种模型取10只小鼠灌胃给予0.45%盐水1 mL(对照组)，另50只小鼠分别灌胃40 mg/mL金诃子低温提取物1 mL，每种提取物灌胃10只小鼠(分别为1号部位、2号部位、3号部位、4号部位、5号部位组)，给药后观察24 h，观察小鼠存活情况。

1.4 统计学方法 采用SPSS10.0统计软件。计量资料以±s表示，组间比较采用方差分析。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 金诃子低温提取物体外抑菌实验结果 结果见表1。由表1可知，金诃子5种提取物在体外对6种标准菌株均有生长抑制的作用(P均＜0.05)。

2.2 金诃子低温提取物体内抑菌实验结果 结果见表2。

表1 金诃子低温提取物对6种标准菌株抑菌圈直径比较(mm，±s)

表1 金诃子低温提取物对6种标准菌株抑菌圈直径比较(mm，±s)

金诃子低温提取物抑菌圈直径大肠杆菌 痢疾杆菌 假单胞绿脓菌 变形杆菌 白葡球菌 金葡球菌1号部位1 mg 8.3 ±1.0 10.5 ±0.2 14.3 ±0.3 8.7 ±0.3 9.5 ±0.4 10.6 ±0.3 3 mg 8.6 ±0.4 12.4 ±0.4 15.4 ±0.3 10.6 ±0.3 11.2 ±0.2 12.4 ±0.6 6 mg 13.5 ±0.6 14.4 ±0.2 22.3 ±0.5 10.6 ±0.2 14.5 ±0.2 14.3 ±0.4 2号部位1 mg 0 11.6 ±0.2 14.6 ±0.6 7.4 ±0.3 8.6 ±0.3 7.3 ±0.5 3 mg 7.4 ±0.6 12.6 ±0.4 14.6 ±0.3 11.6 ±0.3 10.3 ±0.3 8.4 ±0.7 6 mg 9.3 ±0.5 16.2 ±0.3 22.4 ±0.7 9.6 ±0.3 13.2 ±0.2 10.9 ±0.5 3号部位1 mg 8.5 ±0.5 11.7 ±0.2 16.7 ±0.5 7.8 ±0.3 8.4 ±0.4 8.4 ±0.4 3 mg 9.4 ±0.4 13.2 ±0.3 18.5 ±0.4 10.7 ±0.2 10.7 ±0.4 9.4 ±0.3 6 mg 12.4 ±0.6 16.5 ±0.2 24.5 ±0.3 9.7 ±0.3 11.8 ±0.4 12.4 ±0.2 4号部位1 mg 10.8 ±0.3 11.8 ±0.4 15.7 ±0.3 9.5 ±0.4 8.5 ±0.4 8.3 ±0.6 3 mg 11.7 ±0.3 12.5 ±0.4 17.8 ±0.4 11.6 ±0.4 11.4 ±0.4 10.3 ±0.3 6 mg 15.6 ±0.4 16.8 ±0.2 23.2 ±0.5 12.5 ±0.4 11.5 ±0.4 12.3 ±0.4 5号部位1 mg 8.2 ±0.2 8.9 ±0.3 11.4 ±0.4 15.3 ±0.5 15.4 ±0.3 15.2 ±0.3 3 mg 10.5 ±0.3 10.6 ±0.5 13.6 ±0.2 15.6 ±0.4 15.4 ±0.3 15.3 ±0.3 6 mg 13.4 ±0.8 10.2 ±0.4 15.8 ±0.3 15.6 ±0.3 15.4 ±0.2 15.6 ±0.3

表2 金诃子低温提取物对6种标准菌株感染的小鼠存活率的影响(%，±s)

表2 金诃子低温提取物对6种标准菌株感染的小鼠存活率的影响(%，±s)

注:与对照组比较，*P ＜0.01。

组别小鼠存活率大肠杆菌 痢疾杆菌 铜绿假单胞菌 变形杆菌 白色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌1 号部位组 56.67 ±4.71* 63.33 ±9.43* 63.33 ±9.43* 16.67 ±4.71* 66.67 ±4.71* 66.67 ±4.71*2 号部位组 56.67 ±4.71* 63.33 ±9.43* 63.33 ±9.43* 23.33 ±4.71* 60.00 ±0.00* 23.33 ±4.71*3 号部位组 56.67 ±4.71* 56.67 ±4.71* 56.67 ±4.71* 36.67 ±4.71* 56.67 ±4.71* 70.00 ±0.00*4 号部位组 60.00 ±0.00* 56.67 ±4.71* 50.00 ±0.00* 23.33 ±4.71* 66.67 ±4.71* 53.33 ±4.71*5 号部位组 36.67 ±4.71* 36.67 ±4.71* 36.67 ±4.71* 13.33 ±4.71* 40.00 ±8.16* 36.67 ±4.71*对照组000000

3 讨论

我国是植物药的大国，在抗生素出现之前，我国的传统中药已在治疗感染疾病方面发挥了重要的作用，所以筛选有抑菌作用的中药具有了一定的优势，且植物药的不良反应小，它不仅具有抗菌作用，同时还具有滋补、调理等其他药用功效，但是由于中药种类繁多，且都具有自己独特的作用机制，而且目前没有一个质量标准体系进行成分测定，所以中药的国际化受到了限制［6］。本研究前期工作已经优化了金诃子的提取工艺，制定了相应的质量标准体系，并探讨了金诃子低温提取物的免疫增强作用和抗肿瘤作用［5，7，8］。诃子是一种抗菌谱较广的单味药材，其对革兰阳性菌、革兰阴性杆菌、幽门螺杆菌及部分真菌等都有抑制作用。Kannan等［2］对诃子甲醇提取物进行了抑菌实验，结果显示诃子甲醇提取物对沙门伤寒杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌以及绿脓假单胞菌和克雷伯杆菌等菌株有高度敏感性，在1 mg/mL的低浓度即显示了较强的抑菌能力。Bag等［3］比较研究了诃子冷水、热水、乙醇3种溶剂提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧嘧啶(SXT)/磺胺甲唑(TMP)的大肠杆菌的抗菌活性，结果发现诃子的3种提取物均有不同程度的抗菌活性，冷水提取物抗菌活性最弱，热水提取物对MRSA的抗菌活性最强，而乙醇提取物对耐SXT/TMP的大肠杆菌的抗菌活性最强。

因为中医传统中主要采用水煎的方法熬制中药，所以本研究传承中药的传统水提取方法，同时改进工艺低温提取金诃子，获得5种不同物理性状、色泽和味道的提取物。本提取工艺可有效提取金诃子不同部位成分，消除杂质及无用部分，确保用药安全可靠［7］。本研究体外实验结果表明，金诃子5种低温提取物均有抑菌活性，且5号部位对于革兰阳性菌的抑菌作用优于革兰阴性菌，其余4个部位对于选择的6个标准菌株的抑制作用无显著性差异。体内实验结果表明，金诃子5种低温提取物均可提高模型鼠的存活率，但5号部位的体内抑菌作用较弱，5个部位对变形杆菌的体内抑菌效果均最差，具体的抑菌机制有待进一步探讨。

［1］刘芳，秦红飞，刘松青.诃子化学成分与药理活性研究进展［J］.中国药房，2012，23(7):670-672.

［2］Kannan P，Ramadevi SR，Hopper W.Antibacterial activity of terminalia chebula fruit extract［J］.Afr J Microbiol Res，2009，3(4):180-185.

［3］Bag A，Bhattacharyya SK.Evaluation of antibacterial properties of chebulic myrobalan(fruit of terminalia chebula of terminalia chebula fruit extract retz)extracts against methicillin resistant Staphylococcus aureus and trimethoprim-sulphamethoxazole resistant uropathogenic escherichia coli［J］.Afr J Plant Sci，2009，3(2):25-28.

［4］Mann A.Antibacterial activity of terpenoidal fractions from anogeissus leiocarpus and terminalia avicennioides against community acquired infections［J］.Afr J Pharm Pharmaco，2009，3(1):22-26.

［5］罗夏，宣成睿，赵小霞，等.两种方法对蒙药金诃子低温提取物多糖成分和含量测定结果比较［J］.山东医药，2014，54(29):27-29.

［6］陈代杰.全球抗菌药研发背景概况及对加快我国抗菌药研发的思考［J］.上海医药，2012，33(19):7-8.

［7］赵小霞，邱丽君，宣成睿，等.金诃子低温提取物的免疫活性［J］.山东医药，2014，54(37):21-23.

［8］包志强，韩浩，杨丽敏，等.诃子水提取物对肺癌A549细胞抑制作用的研究［J］.现代肿瘤医学，2012，20(9):1783-1786.