胆囊癌组织中Survivin蛋白的表达变化及其与Bcl-2、p53表达的关系

刘谊，李强

(1天津市儿童医院，天津300074;2天津市肿瘤医院)

胆囊癌是肝外胆道中最常见的恶性肿瘤，在我国消化道肿瘤中居第5位。胆囊癌的发生发展是多基因改变、多阶段的复杂过程，联合应用手术、放疗、化疗、生物治疗等各种手段用于胆囊癌患者，但其预后并无明显改善。Survivin蛋白是一种新型凋亡抑制因子，其基因位于染色体17 q25上，在几乎所有的恶性肿瘤组织中均广泛的表达。Bcl-2和p53是迄今为止研究的最深入、广泛的肿瘤相关基因，与细胞凋亡密切相关，二者与Survivin的相关性是近来研究的热点。本研究采用免疫组化法检测胆囊癌、正常胆囊、胆囊息肉、胆囊炎组织中Survivin的表达，研究其与胆囊癌临床特征的关系，并探讨其与Bcl-2、p53表达的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择天津医科大学附属肿瘤医院1995年1月～2005年1月收治的临床及病理资料完整的原发性胆囊癌患者56例，其中男19例、女37例，年龄25～76岁、平均56.3岁。临床 Nevin(1976)分期:Ⅰ期1例，Ⅱ期9例，Ⅲ期17例，Ⅳ期19例，Ⅴ期10例。组织学分化:高分化9例，中分化18例，中低分化14例，低分化15例。局部淋巴结转移25例，伴有胆囊结石27例。所有患者均行根治术或扩大根治术，术前均未接受过放疗或化疗等任何治疗。同时随机选取胆囊炎患者15例、胆囊良性息肉患者15例、正常者10例作为对照。所有病例均经病理证实。

1.2 Survivin、Bcl-2、p53蛋白检测 从病理科调取全部入组患者存档的术后原始病理组织蜡块，重新进行切片、制片，采用SP法［1］对切片进行预处理、涂胶、免疫组化染色，并选用已知阳性肝癌切片作阳性对照，用 PBS代替一抗作阴性对照，检测 Survivin、Bcl-2、突变型p53蛋白。结果判定:Survivin和Bcl-2均表达于细胞质，p53表达于细胞核，细胞质或细胞核被染为淡黄色至棕黄色，染色强度明显高于背景者为Survivin、Bcl-2或p53表达阳性;细胞质或细胞核无黄色染色或显色强度与背景无明显差别者为表达阴性。

1.3 随访方法 采用门诊复查、电话及书信进行随访。生存时间为自手术治疗之日至末次随访日或死亡的时间，以月为单位计算总体生存率，随访满5 a截止。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。计数资料比较用χ2检验，生存率采用Kaplan-Meier方法计算;各变量与预后的关系采用单因素方差分析;相关分析采用Spearman相关分析法。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

Survivin蛋白在胆囊癌组织中的表达阳性率为73.2%(41/56)，在胆囊炎、胆囊良性息肉、正常胆囊组织中均无Survivin表达。与胆囊炎、胆囊良性息肉、正常胆囊组织比较，胆囊癌Survivin表达增强(P均＜0.05)。胆囊癌组织中Survivin蛋白表达与临床病理特征的关系见表1。胆囊癌中Survivin的表达与患者的年龄、性别、临床分期、组织学分化、是否有淋巴结转移、是否伴有胆囊结石等均无相关性(P均＞0.05)。56例胆囊癌中29例p53蛋白阳性表达，阳性率为51.8%。p53表达阳性者中Survivin蛋白表达阳性率为86.2%(25/29)，p53表达阴性者中为59.3%(16/27)，两者比较，P ＜0.05。56 例胆囊癌中34例 Bcl-2蛋白阳性表达，阳性率为60.7%。Bcl-2表达阳性者中Survivin蛋白阳性率为85.3%(29/34);Bcl-2表达阴性者中为54.5%(12/22)，两者比较，P＜0.05。胆囊癌患者Survivin蛋白阳性表达的生存时间为(16.7±1.9)个月，中位生存时间(15.0±2.3)个月，其1、3年生存率分别为58.5%和4.9%。而Survivin蛋白阴性表达的生存时间为(26.5 ±4.3)个月，中位生存时间(27.0±5.8)个月，其 1、3 年生存率分别为 73.3% 和13.3%。两者相比，Survivin阳性表达的胆囊癌患者1、3年生存率低于 Survivin阴性者(P均 ＜0.05)。详见图1。

表1 Survivin蛋白表达与胆囊癌患者临床病理特征的关系

图1 Survivin蛋白表达与胆囊癌患者生存率的关系

3 讨论

细胞凋亡异常在许多人体恶性肿瘤的发病学上占有十分重要的地位。早在1967年，Iversen［2］就提出肿瘤的生长并不仅是生长迅速，同时其细胞的凋亡率也明显减少。正常机体处在细胞增殖和凋亡的动态平衡中，二者的动态平衡被打破时就会形成肿瘤。Survivin在多种肿瘤中均可见其表达［3～9］。本研究采用免疫组化SP法检测胆囊癌组织中Survivin的表达，结果表明Survivin在胆囊癌组织中高度表达，阳性率为73.2%，而在非肿瘤的胆囊组织中未检测到表达，提示Survivin对胆囊癌的发生发展起重要作用。本研究显示，Survivin的表达与胆囊癌患者的年龄、性别、临床分期、组织学分化、是否伴有淋巴结转移以及是否伴有胆道结石均无明显相关性。Nigam等［3］定量评估了 Survivin在胆囊癌中的表达，血清Survivin蛋白浓度在109 pg/mL时诊断胆囊癌的敏感性为82.05%，特异性为93.33%。推断Survivin的表达上调出现在胆囊癌发生的早期阶段，通过抑制细胞凋亡促进肿瘤的发生、发展。研究Survivin在胆囊癌中的表达对胆囊癌的诊断和治疗有重要的现实意义。同样，检测血清中抗Survivin抗体及胆汁脱落细胞的Survivin表达水平将有助于胆囊癌的早期诊断。另外，由于Survivin具有很强的抗凋亡作用，对其阻滞可能成为胆囊癌基因治疗的新靶点［10］。

本研究结果显示，胆囊癌组织中Bcl-2的表达与Survivin蛋白表达有密切关系。Bc1-2基因定位于染色体18q21，Survivin基因定位于染色体17q25上，此位点不稳定时可能涉及t(14;18)(q24;q21)易位，使Bcl-2基因转位到14号染色体免疫球蛋白重链JH片段，导致Bcl-2基因转录激活而表达失控;而且Survivin和Bc1-2基因均能通过富含鸟嘌呤和胞嘧啶的启动子调节，并在增生活跃的细胞中转录。推测Survivin和Bcl-2可能有共同的转录激活机制，两者协同发挥抗凋亡效应。本研究还表明，p53可负性调节Survivin表达。在体内外多种致DNA损伤因素的作用下，p53-Survivin信号转导途径被激活，使细胞周期停滞在G1/S期并诱发细胞凋亡。但在转化细胞中，由于p53基因发生突变，其功能丧失，致使Survivin表达增高，细胞周期停滞在G2/M期，细胞凋亡减少，最终导致肿瘤的发生。目前，这一推测在急性淋巴细胞白血病中已经得到了证实［11］。此外，在胰腺癌、胃癌、结肠癌中也有类似报道［4，5，12］。

本研究发现Survivin蛋白阳性表达的胆囊癌患者1、3年生存率明显低于 Survivin阴性表达者。Nigam等［3］的研究也得出了相似的结论。但目前关于Survivin的生物学特性及其具体调控机制还不十分明确，针对Survivin的靶向基因治疗所采用的分子拮抗剂、所需载体、转移途径和疗效方面还需进一步研究。相信随着分子生物学和生物工程学等各种学科的发展，针对Survivin的靶向基因治疗可能会为肿瘤的治疗带来新的生机。

［1］陈罡，侯巧燕，陈峰，等.免疫组化SP法操作程序的规范和改良［J］.医学文选，2004，23(4):419-421.

［2］Iversen OH.Kinetics of cellular proliferation and cell loss in human carcinomas:a discussion of methods available for in vivo studies［J］.Eur J Cancer，1967，3(4):389-394.

［3］Nigam J，Chandra A，Kazmi HR，et al.Expression of serum survivin protein in diagnosis and prognosis of gallbladder cancer:a comparative study［J］.Med Oncol，2014，31(9):167.

［4］Krieg A，Baseras B，Tomczak M，et al.Role of survivin as prognostic and clinicopathological marker in gastric cancer:a meta-analysis［J］.Mol Biol Rep，2013，40(9):5501-5511.

［5］Shintani M，Sangawa A，Yamao N，et al.Smac/DIABLO expression in human gastrointestinal carcinoma:association with clinicopathological parameters and survivin expression［J］.Oncol Lett，2014，8(6):2581-2586.

［6］Waligórska SJ，Jankowska A，Waóko R，et al.Survivin-prognostic tumor biomarker in human neoplasms［J］.Ginekol Pol，2012，83(7):537-540.

［7］Huang LN，Wang DS，Chen YQ，et al.Expression of survivin and patients survival in non-small cell lung cancer:a meta-analysis of the published studies［J］.Mol Biol Rep，2013，40(2):917-924.

［8］Smith SD，Wheeler MA，Plescia J，et al.Urine detection of Survivin and diagnosis of bladder cancer［J］.JAMA，2001，285(3):324-328.

［9］Ansari D，Rosendahl A，Elebro J，et al.Systematic review of immune-histochemical biomarkers to identify prognostic subgroups of patients with pancreatic cancer［J］.Br J Surg，2011，98(8):1041-1055.

［10］Mobahat M，Narendran A，Riabowol K.Survivin as a preferential target for cancer therapy［J］.Int J Mol Sci，2014，15(2):2494-2516.

［11］Zhou M，Gu L，Li F，et al.DNA damage induces a novel P53-survivin signaling pathway regulating cell cycle and apoptosis in acute lymphoblastic leukmia cells［J］.J Pharmacol Exp Ther，2002，303(1):121-131.

［12］Sarela AI，Verbeke CS，Ramsdale J，et al.Expression of survivin，a novel inhibitor of apoptosis and cell cycle regulatory protein，in pancreatic adenocarcinoma［J］.Br J Cancer，2002，86(6):886-892.