复方枸橼酸喷托维林颗粒中枸橼酸喷托维林的含量测定

李 霞，柳小秦，王红英，段婧婧，戴 涌，刘海静（.陕西省食品药品检验所，西安 70065；.西安交通大学药学院，西安 7006）

复方枸橼酸喷托维林颗粒中枸橼酸喷托维林的含量测定

李 霞1，柳小秦1，王红英2，段婧婧1，戴 涌1，刘海静1（1.陕西省食品药品检验所，西安 710065；2.西安交通大学药学院，西安 710061）

目的 建立HPLC法测定复方枸橼酸喷托维林颗粒中枸橼酸喷托维林的含量。方法 色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为1mL·L－1三乙胺溶液（pH3.0）－甲醇（45∶55）；检测波长215nm；柱温35℃；流速1.0mL·min－1。结果 枸橼酸喷托维林在0.04～2.0mg·mL－1范围内线性关系良好（r＝0.999 9），定量限为4μg·mL－1，高、中、低3种质量浓度的平均回收率为100.2%（RSD＝0.78%）。结论 该方法简便、准确、专属性好，能有效控制复方枸橼酸喷托维林颗粒中枸橼酸喷托维林的含量。

复方枸橼酸喷托维林颗粒；枸橼酸喷托维林；含量；高效液相色谱法

复方枸橼酸喷托维林颗粒为复方类祛痰镇咳平喘药，其主要成分枸橼酸喷托维林为非成瘾性镇咳药，镇咳作用强度约为可待因的1／3，具有中枢和外周性镇咳作用，除对延髓的呼吸中枢有直接作用外，还有微弱的阿托品样作用。口服后作用可持续4～6h，吸收后部分药物经呼吸道排出，可轻度抑制支气管感应器和传入神经末梢，减小咳嗽反射。大剂量使用可使痉挛的支气管平滑肌松弛，减小气管阻力。该品种目前的执行标准为国家药品标准WS－10001－（HD－1161）－2002［1］，采用的是样品经乙醚反复提取后用非水溶液滴定法测定枸橼酸喷托维林的含量。该方法样品前处理复杂，费时，费力，损失大。有文献报道，采用HPLC法测定其他制剂中枸橼酸喷托维林的含量［2－6］，本文建立的HPLC法采用三乙胺溶液－甲醇系统为流动相测定复方枸橼酸喷托维林颗粒中枸橼酸喷托维林的含量。方法操作简便，结果准确，专属性强，为进一步提高复方制剂的质量标准提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters 2489高效液相色谱仪，紫外检测器（VWD）；十万分之一天平（CP225D型，德国Sartorius）。

1.2 试药 枸橼酸喷托维林对照品（中国药品生物制品检定研究院，批号100432－200401）；复方枸橼酸喷托维林颗粒（同一生产厂家提供，批号110101， 110102，110103）；甲醇为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性实验 固定相为Kromasil C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为1mL·L－1的三乙胺溶液（磷酸调pH3.0）－甲醇（45∶55）；柱温：35℃；检测波长：215nm；流速：1.0mL·min－1，进样量10μL。

在此条件下，枸橼酸喷托维林与其他组分达到基线分离，与相邻的色谱峰分离度大于1.5，理论板数按枸橼酸喷托维林峰计算不低于2 000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取枸橼酸喷托维林对照品约200mg，置于50mL量瓶中，加甲醇∶水（1∶1）溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液；再精密量取5mL，置于50mL量瓶中，定容，摇匀，即得对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取供试品适量（约相当于枸橼酸喷托维林20mg），置于50mL量瓶中，加甲醇∶水（1∶1）适量，振摇使其溶解，用上述溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.4 专属性实验 取不含枸橼酸喷托维林的阴性样品溶液约1g，置于100mL量瓶中，加甲醇∶水（1∶1）适量振摇使其溶解，再定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，按2.1项下的色谱条件进样分析。结果表明，在该色谱条件下辅料及其他成分对原料药的含量测定无干扰，见图1。

2.5 线性关系考察 精密吸取2.2项下的对照品储备液1，5，10，15，20和50mL，分别置于100mL量瓶中，用甲醇∶水（1∶1）稀释至刻度，摇匀。按2.1项下的色谱条件进样，以枸橼酸喷托维林的峰面积为纵坐标、质量浓度（mg·mL－1）为横坐标，进行线性回归，回归方程为：Y＝2.074 4×107X－2.849 1×104（r＝0.999 9），线性范围为0.04～2.0mg·mL－1。

2.6 定量限 取2.2项下的对照品溶液逐级稀释，进样，按10倍信噪比计算，定量限为4μg·mL－1。

2.7 精密度实验 取2.2项下的对照品溶液，按2.1项下的色谱条件重复进样6次，测定枸橼酸喷托维林的峰面积，RSD为0.2%（n＝6）。

图1 HPLC图a.供试品溶液；b.阴性样品溶液；c.对照品溶液；1.枸橼酸喷托维林Fig.1 HPLC chromatogramsa.sample solution；b.negative solution；c.reference substances solution；1.pentoxyverine citrate

2.8 重复性实验 精密称取复方枸橼酸喷托维林颗粒（批号110102）6份，按2.3项下方法配制样品溶液，按2.1项下色谱条件进样，结果枸橼酸喷托维林的平均含量为98.2%（n＝6），RSD为1.8%。

2.9 稳定性实验 取2.3项下的供试品溶液，按2.1项下的色谱条件分别在0，2，4，8，12，16，20和24h各进样10μL，计算枸橼酸喷托维林峰面积的RSD为1.2%，表明供试品溶液在室温下放置24h的稳定性良好。

2.10 准确度实验 称取不含枸橼酸喷托维林的阴性样品约5g，分别精密加入对照品储备溶液（4mg·mL－1）4，5和6mL，照2.3项下方法制备样品，每种质量浓度各配制3份，依法测定。结果见表1。2.11 耐用性实验 实验中比较了Kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）柱、Welch C18（250mm× 4.6mm，5μm）柱等不同厂家的同类型色谱柱，分离效果均良好。

表1 枸橼酸喷托维林准确度实验结果Tab.1 The result of accuracy test of pentoxyverine citrate

2.12 样品的含量测定 分别取不同批号的供试品，平行取样2次，按2.3项下的方法制备样品，按2.1项下的色谱条件下进样，以外标法计算枸橼酸喷托维林的含量。结果3批样品的含量分别为97.9%，98.2%和97.2%。

3 讨论

复方枸橼酸喷托维林为复方制剂，原标准中样品经乙醚反复提取后，采用非水溶液滴定法测定主要成分枸橼酸喷托维林的含量。该方法测定前必须排除其他成分、辅料和水分的干扰，样品前处理复杂，且损失较大，对测定的准确性带来一定影响。本文建立了HPLC法测定枸橼酸喷托维林的含量，样品前处理简单，检测方法准确，专属性好，更适合于该制剂的质量控制。

在色谱条件的选择中，流动相曾采用其他文献中的0.05mol·L－1的醋酸溶液－乙腈－三乙胺（55∶45∶0.05），但枸橼酸喷托维林和相邻峰的分离效果不好，保留时间也不理想，经反复实验，最终选择流动相为1mL·L－1三乙胺溶液（磷酸调pH3.0）－甲醇（45∶55），结果枸橼酸喷托维林的峰形良好，与相邻成分达到基线分离。

［1］ 国家药典委员会.国家药品标准：WS－10001－（HD－1161）－2002.

［2］ 赵霓，李宁.HPLC法测定枸磺新啶片中枸橼酸喷托维林和盐酸溴己新含量［J］.西北药学杂志，2008，26（4）：255－257.

［3］ 袁华峰.愈创维林那敏片中枸橼酸喷托维林的含量测定［J］.中国药业，2009，18（1）：19－20.

［4］ 田兆红，梁柱红.HPLC法测定枸橼酸喷托维林片的含量［J］.西北药学杂志，2008，23（1）：4－6.

［5］ 杨宏伟，张迪.HPLC法同时测定枸磺新啶片中枸橼酸喷托维林和盐酸溴己新的含量［J］.中国药事，2009，23（9）：914－916.

［6］ 童龙彪.高效液相色谱法测定枸橼酸喷托维林片含量［J］.医药导报，2011，30（3）：375－376.

Determination of pentoxyverine citrate in Compound Pentoxyverine Citrate Granules

LI Xia1，LIU Xiaoqin1，WANG Hongying2，DUAN Jingjing1，DAI Yong1，LIU Haijing1（1.Shaanxi Institute for Food and Drug Control，Xi′an 710065China；2.School of Pharmacy，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China）

Objective To establish an HPLC method for the determination of the contents of pentoxyverine citrate in Compound Pentoxyverine Citrate Granules.Methods A C18（250mm×4.6mm，5μm）column was used with 1mL·L－1triethylamine（pH3.0）－methanol（45∶55）as the mobile phase at a flow rate of 1.0mL·min－1.The detection wavelength was set at 215nm.The column temperature was 35℃.Results The linear range was 0.04－2.0mg·mL－1（r＝0.999 9）and the limit of quantification was 4μg·mL.The average recovery was 100.2%（RSD＝0.78%）.Conclusion The method is simple，accurate and can be used for the quality control.

Compound Pentoxyverine Citrate Granules；pentoxyverine citrate；content；HPLC

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.02.012

R927.2

A

0254－1793（2015）02－0145－02

2014－06－20）