六君子汤对胃溃疡大鼠胃组织中EGF、TGF-α的影响

王长宏，刘明晖*，王 璞，窦逾常

(1.吉林大学中日联谊医院 中医科，长春130031;2.吉林大学临床医学院2013级，长春130021)

研究［1-2］表明，表皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF-α)在消化性溃疡修复愈合过程中发挥着重要的作用，已成为近年来消化性溃疡研究的热点［3］。本文以 EGF、TGF-α 作为观察指标探讨六君子汤治疗胃溃疡的作用机制。

1 实验材料

1.1 实验动物 健康成年Wistar大鼠40只，雌雄各半，SPF级，体质量(200±20)g，由吉林大学基础医学院实验动物中心提供，合格证号:SCXK(吉)20110004，通风、光照良好，自由进食与饮水。

1.2 药物与试剂 六君子汤(人参9 g，白术9 g，茯苓9 g，甘草6 g，陈皮3 g，半夏4.5 g，由吉林大学中日联谊医院中药房提供，经我院执业中药师鉴定均为地道药材);奥美拉唑肠溶片(洛赛克，阿斯利康制药有限公司，20 mg/片，批号:1304139);表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒、转化生长因子(TGF-α)ELISA试剂盒(美国R＆D公司，批号:20081217)。

1.3 仪器与设备 K15低温离心机(美国Sigma公司);AEU-210电子分析天平(长沙湘仪天平仪器厂);HH-S恒温水浴锅(江苏医疗仪器厂);PW-960多功能全自动酶标洗板机，MB酶标仪(深圳汇松科技有限公司)。

2 实验方法

2.1 药物制备 将六君子汤水煎分别浓缩成含量为1.60 g生药/mL(高剂量组)和0.80 g生药/mL(低剂量组)的药液，4℃冰箱保存备用;奥美拉唑肠溶片用生理盐水稀释成30%的药液，4℃冰箱保存备用。

2.2 动物模型复制 将Wistar大鼠40只随机分成假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组、奥美拉唑组5组，每组8只，雌雄各半，按照Takagi A［4］等方法，大鼠麻醉腹部，将冰乙酸注入胃黏膜下层处，生理盐水清洗局部，缝合腹壁;假手术组造模时于胃黏膜下层处注射相同剂量的生理盐水。术后3 d开始给药，中药高剂量组16.0 g/kg体质量1次/d灌胃(相当于成人剂量的10倍);中药低剂量组8.0 g/kg体质量1次/d灌胃(相当于成人剂量的5倍);奥美拉唑组4 mg/kg体质量1次/d灌胃;假手术组及模型组给予低剂量等容积的生理盐水，以上各组治疗天数均为14 d。

2.3 标本采集与检测 实验结束时，麻醉大鼠，打开腹腔，摘取全胃，沿胃大弯剪开胃。测量并计算:溃疡指数=溃疡最大长径×垂直于最大长径的最大宽径，溃疡抑制率=(1－实验各组溃疡指数均值/模型组溃疡指数均值)×100%［5］。电子天平秤取0.3～0.4 g胃组织，加入冰生理盐水，制成组织匀浆液，离心，冷冻保存待测EGF及TGF-α，检测方法均采用ELISA法，检测过程严格按照试剂盒说明书操作。

3 结果

3.1 各组大鼠溃疡面积及溃疡抑制率比较 见表1。

表1 各组大鼠溃疡面积和溃疡抑制率比较(±s，n=8)

表1 各组大鼠溃疡面积和溃疡抑制率比较(±s，n=8)

注:与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01;与奥美拉唑组比较，△P＜0.05;与中药高剂量组比较，▲P＜0.05

/%假手术组组 别 溃疡面积/mm2 溃疡抑制率——34.8模型组 26.9±9.98 —中药高剂量组 10.1±4.63##△ 62.8中药低剂量组 19.6±6.03##▲ 27.3奥美拉唑组 17.6±6.17#

3.2 对各组大鼠胃黏膜组织中EGF、TGF-α的影响见表2。

表2 各组大鼠胃黏膜组织中EGF、TGF-α含量的比较(±s，n=8)pg/mL

表2 各组大鼠胃黏膜组织中EGF、TGF-α含量的比较(±s，n=8)pg/mL

注:与模型组比较，##P＜0.01;与奥美拉唑组比较，△△P＜0.01

组 别 EGF TGF-α假手术组 39.43±5.35 56.48±7.55模型组 21.44±4.33 27.86±4.34中药高剂量组 36.54±5.29##△△ 45.26±5.73##△△中药低剂量组 33.58±4.85## 42.55±5.64##奥美拉唑组 31.72±5.64## 39.36±6.26##

4 小结

EGF是一种具有抑制胃酸分泌、促进上皮细胞增殖、组织修复和细胞保护作用的内源性物质，通过作用于靶细胞膜上的特异性受体EGFR激活调节蛋白并通过酶促反应而发挥其生物效应［6］。TGF-α是EGF家族中另一参与胃黏膜损伤后修复的调节肽，由黏膜细胞自身合成，是维持胃黏膜完整性的主要介质，被称为“黏膜完整肽”，通过结合并激活EGFR，并作为自分泌或旁分泌生长因子诱导EGFR磷酸化，从而将持续分裂信号转导到细胞内，引起细胞增值、分化［7-8］。研究［9］发现，一旦溃疡形成，无论何种原因，均有着相似的修复及愈合过程。目前，在溃疡愈合方面有学者提出了溃疡愈合质量(QOUH)的概念，包括缺失黏膜的修复及其黏膜下组织结构与功能的重建［10-11］。EGF、TGF-α 是一组能直接影响 QOUH 的表皮生长因子相关蛋白，通过作用于共同的受体EGFR，发挥其黏膜修复与重建的功能。

本研究发现六君子汤［12］高、低剂量组与模型组、假手术组比较能缩小溃疡面积，提高溃疡抑制率，提高胃黏膜组织中EGF、TGF-α含量，说明六君子汤可激发体内合成和释放内源性EGF、TGF-α，促进胃黏膜的修复与重建，保持胃黏膜的完整性，从而对损伤的大鼠胃黏膜起到了保护和修复的作用。

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