淫羊藿醇提取与水提取工艺的比较

朱裕林， 陈卫东 ， 张冬梅， 习斌斌

(1. 蚌埠医学院第一附属医院，安徽 蚌埠233004;2. 安徽中医药大学，安徽 合肥230031)

淫羊藿含有多种生物活性成分，主要包括黄酮类化合物、多糖、生物碱、木脂素、挥发油、萜类化合物及锌、铜、钙、锰等微量元素［1-3］。《中国药典》2010 年版［4］收载淫羊藿为小檗科淫羊藿属的淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.、箭叶淫羊藿 Epimedium sagittatum (Sieb. Et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim.或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai 的干燥叶。现代药理研究表明，淫羊藿具有抗勃起功能障碍、抗骨质疏松、免疫调节、改善心功能、抗肿瘤、抗衰老等作用［5-9］。黄酮类化合物为主要有效成分，其中淫羊藿苷为淫羊藿药材定性定量的指标［10］。淫羊藿苷溶于乙醇、乙酸乙酯，难溶于水，目前多用乙醇溶液进行提取［11-13］。本课题组前期研究淫羊藿水提取工艺，结果表明淫羊藿苷提取率较高。本实验以淫羊藿苷提取率为指标，采用L9(34)正交设计优选淫羊藿醇提取和水提取工艺条件。

1 仪器与材料

1.1 试剂与药品 药材购于亳州市万珍中药饮片厂，经安徽中医药大学刘守金教授鉴定为柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim. 的干燥叶。淫羊藿苷对照品(icariin)，由中国食品药品检定研究院提供，批号110737-200415;乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯，纯净水(娃哈哈饮料有限公司)。

1.2 仪器 LC-15 型高效液相色谱仪(日本岛津公司);SPD-M20A 型紫外检测器(日本岛津公司);Cosmosil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)。

2 方法与结果

2.1 淫羊藿苷测定 根据预试验方法［14］，对淫羊藿药材中淫羊藿苷进行定量测定。色谱条件为Cosmosil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相为乙腈-水(30 ∶70);体积流量1 mL /min;柱温25 ℃;检测波长270 nm，进样量20 uL。

2.2 醇提取工艺优选 根据预试验，淫羊藿药材吸收约3倍量的乙醇溶液，考虑到淫羊藿药材比较疏松，故第1 次回流时多加入3 倍乙醇溶液。采用L9(34)正交设计优选淫羊藿的醇提取工艺，试验安排见表1，试验结果见表2，方差分析见表3。

表1 醇提取因素水平

以淫羊藿苷提取率为指标，极差R 表明各影响因素程度为D ＞C ＞A ＞B。方差分析显示因素A、C、D 均具有显著性差异。各因素影响趋势为D3＞D1＞D2，C2＞C1＞C3，A3＞A1＞A2。确定最优方案为A3B1C2D3即8 倍量70%乙醇回流提取3 次，每次2 h，第1 次需多加入3 倍70%乙醇。

表2 醇提取正交试验结果

表3 醇提取方差分析

2.3 水提取工艺优选 第1 次煎煮时多加入3 倍水。采用L9(34)正交设计优选淫羊藿的水提取工艺，试验安排见表4，试验结果见表5，方差分析见表6。

表4 因素水平

表5 水提取正交试验结果

表6 水提取方差分析

以淫羊藿苷提取率为指标，极差R 表明各影响因素程度为为C ＞A ＞B。方差分析显示因素C 具有显著性差异。各因素影响趋势:C2＞C3＞C1，A3＞A2＞A1。确定最优方案为A3B1C2即8 倍量水煎煮2 次，每次1 h，第1 次需多加入3 倍水。

2.4 验证试验 按正交设计优选方案分别对醇提取和水提取工艺进行验证，结果见表7。

表7 醇提取与水提取工艺验证结果

3 讨论

预实验选择药材时，本实验考察了淫羊藿地上部分(叶)和地下部分(仙灵脾)中淫羊藿苷的分布情况，结果淫羊藿地下部分(仙灵脾)淫羊藿苷的含量仅为淫羊藿叶的1/8，且远低于《中国药典》2010 年版标准，表明淫羊藿苷具有明显的部位分布选择性［15］。符合《中国药典》对淫羊藿部位的要求即:“干燥叶”。淫羊藿虽无“道地药材”之说，但实际上由于淫羊藿地理分布广泛，品种较多的缘故，市售淫羊藿药材的质量良莠不齐，控制药材质量成为选择中药材的关键。

水煎煮法淫羊藿苷提取率为77.22%，与余晓辉等［16］报道的乙醇回流法基本一致，表明传统水煎煮法能够将该药材有效成分充分提取，从而成为其传统汤剂发挥药效学的基础。

本实验中水提取法淫羊藿苷提取率虽低于醇提取法，但提取率仍然较高;两者出膏率无明显差别;水提取法溶剂为水，耗时耗材(2 h，水)均明显低于醇提取(6 h，70%乙醇)，能耗和原料成本较低，为其在工业化大生产的推广应用提供了一定参考依据。

［1］ 张华峰，杨晓华. 淫羊藿的生物活性成分及其开发策略研究［J］. 中草药，2010，41(2):329-332.

［2］ 李定芬，高言明，李 健，等. 巫山淫羊藿炮制前后几种微量元素含量变化研究［J］. 微量元素与健康研究，2011，28(3):35-36.

［3］ 郭丽娜，马莹慧，赵 伟，等. 淫羊藿属植物中化学成分分析研究进展［J］. 中国新药杂志，2013，22 (8):919-922.

［4］ 国家药典委员会. 中华人民共和国药典:2010 年版一部［S］. 北京:中国医药科技出版社，306-307.

［5］ Jiang Zhaojian，Hu Benrong，Wang Jialing，et al. Effect of icariin on cyclic GMP levels and on the mRNA expression of cGMP-bindi cGMP-specific phosphodiesterase (PDE5)in Penile Cavernosum［J］. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci，2006，26(4):460-462.

［6］ 张大威，程 岩，张金超，等. 淫羊藿苷对破骨细胞的分化及骨吸收功能的影响［J］. 中国药理学通报，2007，23(4):463-467.

［7］ 包慧兰，陈 黎. 淫羊藿苷抗糖尿病大鼠心肌线粒体氧化应激损伤作用研究［J］. 中国中药杂志，2011，36(11):1503-1507.

［8］ Zhu Danyan，Lou Yijia. Icariin-mediated expression of cardiac genes and modulation of nitric oxide signaling pathway during differentiation of mouse embryonic stem cells into cardiomyocytes in vitro［J］. Acta Pharmacol Sin，2006，27(3):311-330.

［9］ 李 娌，王学美. 淫羊藿苷药理作用研究进展［J］. 中国中药杂志，2008，33(23):2727-2731.

［10］ 徐文芬，何顺志，王悦云，等. 不同产地加工与贮藏方法对淫羊藿药材中淫羊藿苷及总黄酮的影响［J］. 中成药，2012，34(8):1556-1559.

［11］ 严跃进，沈 勇，黄 伟，等. 不同浓度醇提取淫羊藿功效成分的研究［J］. 中国中医基础医学杂志，2011，17(5):568-570.

［12］ 关书博，郑洪新，李可强. 正交试验优化淫羊藿的乙醇提取工艺［J］. 辽宁中医药大学学报，2011，13(6):82-83.

［13］ 刘 明，王慧森，李更生. 正交试验优选强心胶囊制备工艺［J］. 中国实验方剂学杂志，2012，18(4):47-50.

［14］ 朱裕林，张冬梅，王 雷，等. 骨疏灵颗粒提取工艺优化［J］. 安徽医药，2013，17(6):909-911.

［15］ 周 涛，张小波，郭兰萍. 粗毛淫羊藿不同部位、不同生境中淫羊藿苷、总黄酮含量的变化分析［J］. 中国中药杂志，2012，37(13):1917-1921.

［16］ 余晓晖，赵 磊，侯 嘉. 不同提取方法对淫羊藿中总黄酮提取率的比较［J］. 中成药，2011，33(7):1257-1259.