IL－23R 基因单核苷酸多态性与肝癌预后的关系①

覃彦平，曹昭，覃锦耀，林观凤，吴君荣

（1.广西柳州市红十字会医院检验科，广西 柳州 545001 E－mail：1227143070＠qq.com；2.广西医科大学第一附属医院检验科，广西 南宁 530021；3.广西柳州市红十字会医院放射科，广西 柳州 545001）

肝癌是广西常见的恶性肿瘤，其发病率、致死率极高。手术治疗是常用的根治性治疗方法，但术后肿瘤复发是影响患者长期生存的关键因素。研究者已发现白细胞介素－23受体（interleukin－23receptor；IL－23R）基因单核苷酸多态性与肝癌发病相关［1－4］，然而IL－23R 基因单核苷酸多态性对肝癌预后作用的相关研究未见报道。因此，本课题组针对68例手术治疗的肝 癌 患 者 进 行IL－23R 基 因rs17375018 及rs11805303位点单核苷酸多态性与预后关系的研究，探讨IL－23R 基因对肝癌预后的影响。

1 对象与方法

1.1 研究对象 研究对象均为2012年7～12月在广西医科大学第一附属医院住院的未经化疗、放疗的广西地区肝癌手术治疗患者。入选对象均为根据患者病史及临床表现，CT、MRI等影像学检查结果阳性，或血清AFP＞400μg／L，或肝脏细胞学检查及肿瘤标本病理诊断符合原发性肝癌的患者。其中，68例有完整随访资料的患者纳入本研究。男58例，女10例，年龄24～69岁，平均年龄（46.4±11.4）岁。

1.2 研究方法

1.2.1 提取DNA 抽取患者静脉血2 ml并用EDTA 抗凝，采用苯酚－氯仿法提取DNA 后置于－20℃冰箱备测。

1.2.2 采用PCR－RFLP 方法检查基因型 引物由上海生工生物科技有限公司合成，rs17375018位点引物序列上游为：5 ˊ－AGTAATTATTCTAGTTGATAACT－3ˊ，下游为：5 ˊ－ AATAAAAGTGAATGTTCTCCTCT－3ˊ；rs11805303位点引物序 列 上 游 为：5 ˊ－TATGCTTGAAACAGAGAACTGTTTCTT－3ˊ，下游为：5ˊ－CACAGAATACTTAAATTTTTTATCC－3 ˊ。采用DA－7300PCR 分析仪进行扩增。PCR 反应体系为25μl，包括基因组DNA 2.0μl，两种引物（1.0μmol／L）各1μl，Dream TaqTM Green PCR Master Mix（2x）12.5μl，余用灭菌去离子水补足。两个位点PCR 反应循 环参数 一致：95 ℃预 变 性2 min，95 ℃变性20s，52 ℃退火30s，72 ℃延伸30s，35个循环，72℃延伸10min。采用Fermentas公司生产的PCR 反应试剂及限制性内切酶。酶切反应体系为：PCR 产物10μl，限制性内切酶（10U／μl）1μl，反应缓冲液2μl，余用灭菌去离子水补足，37 ℃酶切过夜。内切酶分别为Hae3和Dra1。将酶切产物与DNA marker 同步琼脂糖凝胶电泳，观察基因型。

1.2.3 DNA 测序 由上海生工生物有限公司进行抽样测序验证，酶切结果与测序结果相吻合。

1.3 统计学方法 基因型频率及生存率采用直接计数法统计。计数资料的比较采用χ2检验和Fisher精确概率法。所有统计分析采用SPSS 16.0软件处理，以P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

肝癌根治术后患者IL－23R 基因rs17375018及rs11805303位点单核苷酸多态性分布频率及生存率详见表1。rs17375018 位点在年龄、性别、病理组织学、复发及存活与否分组间的分布频率比较差异均无统计学意义（P ＞0.0 5）；rs11805303位点除了在男女性别间多态性分布频率比较差异有统计学意义（P＜0.05）外，其它各组间比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。

表1 IL－23R 基因SNP与肝癌根治术后患者各临床参数及预后的关系

3 讨论

研究发现许多患者发病基础以及治疗条件相似，但由于患者个体基因多态性的差异性导致疾病预后各不相同［5］。基因多态性不仅与肿瘤的发生、发展相关，还影响治疗后的疾病复发率、生存率。炎性细胞因子IL－23R 为膜表面蛋白受体，属于促红细胞生成素受体超家族成员，是IL－23 受体复合物的一个亚基。IL－23R 与多种免疫性疾病、癌症等的发病有关［4－8］，其作用是IL－23发挥其生物学效用的传导器。IL－23在肝癌组织中显著高表达，并参与肝癌血管的形成［9］。IL－23R 还能诱导TH 细胞分化，促使IL－17、IL－10等炎性细胞因子的大量分泌［10］。其中IL－17 可促进肝癌血管生长致使肿瘤向肝外器官侵袭［11］，且与术后复发密切相关［12］；IL－10则可参与大鼠肝癌免疫微环境的免疫抑制调节作用［13］。

本课题组前期已对IL－23R 基因单核苷酸多态性与肝癌的相关性进行了研究［2－4］，本次在前期研究的基础上针对其中的68例肝癌根治术后患者分析其预后与IL－23R 基因单核苷酸多态性的关系，发现IL－23R 基因rs17375018及rs11805303位点基因单核苷酸多态性频率分布与年龄、病理组织学分级、复发及存活与否均无关；在性别组间rs17375018位点多态性频率分布差异无统计学意义（P ＜0.05），rs11805303位点则反之，男性患者CT 型占多数，女性患者为CC型最多。68例患者中3例死于复发，均为男性。其中rs17375018位点携带GG 型者2例，GA 型者1例；全部为rs11805303位点携带CT 型者；病理组织学分级则为Ⅲ＋Ⅳ级2例，Ⅰ＋Ⅱ级1例。12例复发后存活，以rs17375018位点携带GG 型及rs11805303位点携带CT 型者复发率高。53 例存活且无复发，rs17375018位点携带AG 型存活且无复发肝癌患者25例，较携带GG 或AA 型者多；与携带CC 或TT 型者比较，rs11805303位点携带CT 型存活且无复发肝癌患者最多，为28例。携带rs17375018位点GG 型及rs11805303位点CT 型肝癌患者的18个月生存率最低，分别为93.75%和91.67%。

总之，本次对广西肝癌人群IL－23R 基因单核苷酸多态性与肝癌根治术后患者预后的研究证实了IL－23R 基因单核苷酸多态性与术后患者生存状况可能无关。由于样本量、不同种族或人群地域差异等因素不同都会影响研究结果。因此，要全面了解IL－23R基因单核苷酸多态性对肝癌预后的影响，尚需进行不同人群、大样本的研究。

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