放疗与榄香烯注射液联合治疗原发性肝癌的效果评价

郑瑞明 张东泉 汪勇军

1．浙江衢化医院检验科，浙江衢州324000；2．浙江衢化医院职业病科，浙江衢州324000；3．浙江省衢州市人民医院检验科，浙江衢州324000

放疗与榄香烯注射液联合治疗原发性肝癌的效果评价

郑瑞明1张东泉2汪勇军3

1．浙江衢化医院检验科，浙江衢州324000；2．浙江衢化医院职业病科，浙江衢州324000；3．浙江省衢州市人民医院检验科，浙江衢州324000

目的观察榄香烯注射液联合放疗治疗原发性肝癌疗效及对血清中基质金属蛋白酶（MMP）－2和MMP－9的影响。方法将我院收治的100例原发性肝癌患者随机分为对照组和观察组，每组50例。采用常规放疗方式对对照组患者实施治疗；观察组在上述基础上放疗第1天开始予揽香烯注射液600 mg/d，直至放疗结束。统计两组治疗总有效率，并观察治疗前后血清MMP－2和MMP－9变化。结果观察组的治疗总有效率达92%，明显高于对照组的72%（P＜0．05），观察组治疗前后MMP－2和MMP－9血清浓度分别下降为（89．36±11．03）ng/L和（85．28± 8．32）ng/L，显著高于对照组的（46．28±10．12）ng/L和（39．66±9．43）ng/L（P＜0．05），观察组的放疗计划实施时间和住院接受治疗总时间分别为（14．53±3．08）d和（21．67±3．54）d，明显短于对照组的（25．43±5．20）d和（35．41±6．56）d，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论应用榄香烯注射液与放疗方式联合对原发性肝癌患者实施治疗的临床效果明显，并能有效下调血清中MMP－2和MMP－9表达，对抑制肿瘤进展有重要作用。

原发性肝癌；榄香烯；放射治疗；基质金属蛋白酶

原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，是高侵袭性的恶性肿瘤，发病隐匿，具有发病率高、疾病进展迅速且易复发，约85%的患者在就诊时已经发生多发病灶和肝硬化，待确诊时大多数患者已丧失手术时机，死亡率高[1]。对于中晚期发现的肝癌，由于无法进行手术，所以主要采用放疗联合靶向分子药物治疗。经肝动脉导管栓塞化疗术（TACE）是原发性肝癌首选的治疗技术之一，但肿瘤细胞对所用的化疗药物尚有敏感性及耐药性问题，不仅杀伤作用有限，而且对患者的肝肾功能、胃肠道系统及造血系统会产生严重的副作用，容易导致肝癌治疗相关性并发症，故疗效亦不尽人意，且采用肝动脉化疗栓塞（TACE）近期有一定疗效，但远期效果不够理想[2]。目前对于因各种原因不能接受TACE、局部消融治疗或化疗的原发性肝癌患者，必须积极地研究新的更有效的治疗方法。

近年来，三维适形放疗为中晚期肝癌患者提供了一条新的治疗途径[3]，其能够在有效保护患者正常组织的前提下，给予肿瘤组织高剂量的射线照射，达到尽可能杀灭肿瘤组织、提高临床疗效的作用。

放疗是治疗不能手术的晚期肝癌的一种重要方法，可杀死部分癌细胞，但是放疗也会对患者产生一些严重的不良反应，因此采用放疗联合其他药物治疗方法共同治疗肿瘤日益受到人们的重视。榄香烯注射液是从姜科植物温郁金中提取的抗癌有效成分[4]，药理学实验表明腹腔注射榄香烯可明显抑制肿瘤细胞的DNA、RNA及蛋白质合成，阻碍肿瘤细胞生成。该药物还可作用肿瘤细胞的细胞膜，造成细胞破裂死亡，并能改变肿瘤细胞的免疫原性，诱发机体对肿瘤细胞的免疫反应。榄香烯注射液临床用于治疗恶性肿瘤已有10余年的历史，经实验研究及临床实验表明有良好的抗肿瘤作用，但是三维适形放疗联合榄香烯注射液治疗肝癌的研究报道不多。本文观察原发性肝癌患者在常规三维适形放疗基础上加用榄香烯注射液的疗效及对血清中MMP－2和－9的影响，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2009年1月1日～2013年12月31日我科确诊原发性肝癌患者100例。根据治疗方法不同分为对照组和观察组各50例。其中对照组男30例，女20例，平均年龄58．5岁，Child－Pugh分级A级31例，B级19例；观察组男28例，女22例，平均年龄60．3岁，Child－Pugh分级A级30例，B级20例。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0．05）。

1.2 诊断标准

所有患者均符合2001年9月中国抗癌协会肝癌专业委员会制定的“原发性肝癌的临床诊断与分期标准”：所有患者甲胎蛋白显著升高，经过进一步的彩色超声多普勒以及上腹部的CT或者MRI提示肝内占位性病变经过肝穿刺并取少量病变组织送病理检查，确诊为原发性肝癌。纳入及排除标准：所有上述诊断为原发性肝癌的患者，无法手术切除，符合榄香烯注射液联合放疗治疗适应证，全部患者肝功能Child－Pugh分级在B级以上，肾功能正常，预计生存期＞3个月，有典型的肝癌动态CT或MRI阳性表现。

1.3 治疗方法

对照组采用单纯的三维适形放疗治疗。放疗期给予糖皮质激素（地塞米松，国药准字H37021969，辰欣药业股份有限公司，规格：5mg/mL）和（或）甘露醇（国药准字H61020004，西安京西双鹤药业有限公司，规格：100 mL∶20 g）等对症支持治疗。观察组在对照组治疗基础上加用榄香烯注射液（国药准字H10960115，大连华立金港药业有限公司，规格：5mL∶25 mg）600 mg/d，直至放疗结束。

1.4 MMP-2和MMP-9的检测

治疗前后次日清晨空腹抽取静脉血5 mL，经枸橼酸钠抗凝剂抗凝，3500 r/min离心5 min，吸取血浆。收集的血浆标本置于－20℃冰箱保存备用。采用酶联免疫吸附实验检测MMP－2和MMP－9，具体步骤如下：①抗原包被：将MMP－2和MMP－9抗原用包被缓冲液稀释至（10～20）mg/L，在96孔板中每孔加入0．3 mL，37℃水浴3～4 h后放在4℃冰箱。②抗原洗涤：吸取抗原包被缓冲液，每孔加入洗涤缓冲液洗3次，每次5 min。③每孔加入被检测血清0．2 mL，37℃孵育2 h。④用洗涤缓冲液洗3次，每次5 min。⑤加入含酶标记的抗体，37℃孵育2 h。⑥用洗涤缓冲液洗3次，每次5 min。⑦每孔加入0．2 mL底物溶液，室温反应30 min。⑧加终止液终止反应。⑨作标准曲线，计算检测样本值。

1.5 疗效评价标准[5]

观察两组患者接受治疗后的不良反应发生情况。两组患者接受治疗后3个月的近期疗效采用世界卫生组织制定的实体瘤疗效评价标准进行评定，分为完全缓解、部分缓解、稳定以及进展，有效包括完全缓解以及部分缓解，无效包括稳定和进展。

1.6 统计学分析

采用SPSS13．0统计学分析软件，计量资料比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验，P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组放疗实施时间和住院总时间比较

对照组患者常规放疗计划共计实施（25．43±5．20）d，共计住院总时间（14．53±3．08）d；观察组患者放疗计划共计实施（35．41±6．56）d，共计住院总时间（21．67± 3．54）d。两组患者放疗实施时间和住院总时间比较差异有统计学意义（P＜0．05），见表1。

表1 两组患者放疗实施时间与住院总时间比较±s，d）

表1 两组患者放疗实施时间与住院总时间比较±s，d）

组别n 放疗实施时间住院总时间对照组观察组5 0 5 0 t值P 2 5．4 3 ± 5．2 0 3 5．4 1 ± 6．5 6 8．6 7＜0．0 5 1 4．5 3 ± 3．0 8 2 1．6 7 ± 3．5 4 9．4 3＜0．0 5

2.2 两组治疗前后血清MMP-2和MMP-9水平改善幅度比较

对照组应用常规放疗方式治疗前后血清MMP－2和MMP－9水平差异有统计学意义（P＜0．05）；观察组应用榄香烯注射液与放疗方式联合治疗前后血清MMP－2和MMP－9水平差异有统计学意义（P＜0．05）。上述两项观察指标治疗前组间差异无统计学意义（P＞0．05），治疗后组间比较差异有统计学意义（P＜0．05），见表2。

2.3 两组近期疗效比较

观察组总有效率92%（完全缓解11例，部分缓解35例，稳定3例，进展1例），明显高于对照组72%（完全缓解5例，部分缓解31例，稳定10例，进展4例），差异有统计学意义（P＜0．01）。见表3。

2.4 两组不良反应发生率

对照组35例患者在常规放疗计划实施后出现肝功能损伤、胃肠道反应、骨髓移植、发热、疼痛等不良反应，不良反应发生率为70%（35/50）；观察组患者有19例放疗计划实施后出现肝功能损伤、胃肠道反应、骨髓移植、发热、疼痛等不良反应，不良反应发生率为38%（19/50），两组差异有统计学意义（P＜0．05）。

3 讨论

原发性肝癌侵袭性强，多数就诊时就已经失去了手术的机会。目前常规采用TACE治疗近期虽然能达到一定的治疗效果，但其远期效果不佳。以往一直认为常规放射治疗对肝脏损伤太大，患者难以耐受，且治疗效果不佳[6，7]。然而近期发现榄香烯注射治疗对众多恶性肿瘤治疗效果较好。榄香烯注射液是从姜科植物温郁金中提取的抗癌有效成分，是我国自主开发研制的广谱抗癌二类新药[8－10]，其可降低癌症细胞有丝分裂能力，诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞生长，诱发机体免疫防御。也有研究发现榄香烯对肝癌细胞系Hep G2具有放射增敏的效果，且其毒副作用较轻[11]，为此，我们在此基础上对采用化疗联合榄香烯注射治疗原发性肝癌效果进行探讨。

表2 两组患者治疗前后血清MMP-2和MMP-9水平改善幅度比较（s，ng/L）

表2 两组患者治疗前后血清MMP-2和MMP-9水平改善幅度比较（s，ng/L）

组别n对照组观察组t值P M M P－2治疗前治疗后变化值M M P－9治疗前治疗后变化值5 0 5 0 1 1 9．7 2 ± 1 1．6 7 1 2 1．8 1 ± 1 2．4 3 0．6 7＞0．0 5 7 3．4 4 ± 8．7 6 3 2．4 5 ± 6．3 4 1 1．4 3＜0．0 5 4 6．2 8 ± 1 0．1 2 8 9．3 6 ± 1 1．0 3 1 0．2 1＜0．0 5 1 1 8．3 1 ± 1 0．5 7 1 2 0．4 9 ± 1 1．9 8 0．5 9＞0．0 5 7 8．6 5 ± 8．0 2 3 5．2 1 ± 7．2 1 1 2．1 4＜0．0 5 3 9．6 6 ± 9．4 3 8 5．2 8 ± 8．3 2 1 1．0 2＜0．0 5

表3 两组患者疗效比较[n（%）]

本研究结果显示，放疗联合榄香烯注射治疗的观察组总有效率显著高于对照组，表明采用放疗联合榄香烯注射治疗较单一用三维适形放射治疗方式效果更优，且治疗后病情进展率较低，主要是因为榄香烯注射可对肝癌细胞起放射增敏的效果。另外原发性肝癌浸润性转移是中晚期最常见的死亡原因，其最重要的环节之一即是底膜或细胞外基质的降解，其在肿瘤转移的起始和终末阶段血管生成中发挥重要作用[12]。众所周知，基质金属蛋白酶（MMP）是高度保守的依赖于锌离子的内切蛋白酶的家族，MMP－2、MMP－9在内皮血管过程的早期血管基底膜的降解中起重要作用[13]。我们对放疗联合榄香烯注射治疗前后MMP－2和MMP－9的活性进行检测，结果显示观察组MMP－2和MMP－9活性降低更为显著，且对照组和观察组的活性变化值之间差异存在统计学意义（P＜0．05），如此表明放疗联合榄香烯注射治疗后或可更为有效地防止原发性肝癌的浸润性转移，效果或优于单独采用放射治疗，主要是因为榄香烯具有明显的抑制血管内皮细胞增值的效果，可使细胞周期阻滞于G1期，诱导细胞凋亡，同时抑制血管内皮中的MMP－2和MMP－9活性，对由MMP－2和MMP－9所引发的机体调节通路阻断产生有效抑制，进而抑制内皮细胞的生成血管能力。

此外，有研究表明榄香烯具有增强细胞免疫功能[14，15]，参与集体免疫调节，可显著提高抗肿瘤效果，同时也可减少患者因放疗引起的白细胞降低等各种毒副作用的发生。本研究也显示除了这一特点，采用榄香烯联合放疗治疗后患者的放疗时间和住院总时间较单独采用放射治疗显著缩短，间接表明榄香烯可促进放疗效果，缩短放疗时间。

综上所述，榄香烯与放疗方案联合治疗原发性肝癌的效果比较明显，比单纯实施放疗可以明显提高近期疗效，降低侵袭转移的发生，缩短住院时间，具有较好的应用前景。

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Clinical observation of elemene injection adjuvant three-dimensional conformal radiotherapy in treatment of primary hepatic cancer

ZHENG Ruiming1ZHANG Dongquan2WANG Yongjun3
1．Department of Clinical Laboratory,Zhejiang Quhua Hospital,Quzhou324000,China;2．Department of Occupational Diseases,Zhejiang Quhua Hospital,Quzhou324000,China;3．Department of Clinical Laboratory,Quzhou People’s Hospital,Quzhou 324000,China

Objective To observe the clinical efficacy of the elemene injection adjuvant three－dimensional conformal radiotherapy to treat the primary liver cancer and their impact to the expression of serum matrix metalloproteinase (MMP)－2 and MMP－9．Methods One hundred primary liver cancer patients were randomly divided into the observation group which was given elemene injection(600 mg/d)adjuvant three－dimensional conformal radiotherapy and the control group which was given three－dimensional conformal radiotherapy in our hospital,with an average 50 cases in each group．The control group was treated with the three－dimensional conformal radiotherapy,while the observation group was given elemene injection(600 mg/d)based on the control group,until the end of radiotherapy．The total efficiency of the two groups and the change of serum MMP－2 and MMP－9 before and after treatment were observed．Results The total efficiency of the observation group was reach to 92%,which was significantly higher than the control group that was only 72%(P＜0．05)．In addition,the decreased changes of the serum MMP－2 and MMP－9 in the observation group were(89．36±11．03)ng/L and(85．28±8．32)ng/L respectively,which were also significantly higher than the control group which were(46．28±10．12)ng/L and(39．66±9．43)ng/L(P＜0．05)．However,the total time for radiotherapy treatment and hospitalization time in the observation group were(14．53±3．08)d and(21．67±3．54)d respectively,which was significantly shorter than the control group which were(25．43±5．20)d and(35．41±6．56)d respectively(P＜0．05)．Conclusion The clinical efficacy of the elemene injection adjuvant three－dimensional conformal radiotherapy in treatment of primary liver cancer is obvious．And it can reduce the expression of MMP－2 and MMP－9 in serum effectively,which have an important role to inhibit the tumor progression．

Primary liver cancer;Elemene;Radiotherapy;Matrix metalloproteinase

R735.7

B

1673-9701（2015）27-0059-04

2015-03-17）

浙江省自然科学基金资助项目（LY13H240001）