氟啶蜱脲口服与透皮给药对小鼠的急性毒性试验

王望宝 包喜军 刘文春 叶俊华

氟啶蜱脲口服与透皮给药对小鼠的急性毒性试验

王望宝 包喜军 刘文春 叶俊华

为阐明氟啶蜱脲的毒性，指导临床用药，本试验用昆明小鼠作为试验动物，对氟啶蜱脲原料药和透皮剂进行毒性研究。预实验中小鼠一次性口服不同剂量的原料药和透皮剂，测定LD0和LD100，再根据最大给药试验和简化寇氏法分组正式试验，测定LD50和95%的可信限。结果测出小鼠口服氟啶蜱脲原料药的LD50大于16.0 g/kg，小鼠口服透皮剂的LD50和95%的可信限分别为5.8594g/kg和5.2732～6.5276g/kg，由于LD50值均大于5000m g/kg，故氟啶蜱脲原料药和透皮剂判定为实际无毒或无毒。小鼠透皮给予高剂量透皮剂10.0g/kg，小鼠未出现死亡，表明透皮剂临床用药安全。

氟啶蜱脲是由汽巴——嘉基公司最先研发的一种苯甲酰脲类昆虫生长调节剂，并由诺华公司实现商品化，诺华公司开发的用于控制动物体表寄生的硬蜱。本课题组在参考国内外文献的基础上研制出氟啶蜱脲透皮剂，临床试验表明，透皮剂对犬体表寄生的血红扇头蜱有很好的控制效果。本研究以《化学药物急性毒性试验技术指导原则》为指导，按照简化寇氏法对氟啶蜱脲原料药及透皮剂进行了急性毒性试验，为该药的的毒性研究和临床安全用药提供依据。

一、材料与方法

（一）供试药品

氟啶蜱脲原料药，白色粉末状，水中溶解度小于0.02m g/l，纯度99.2%，批号：121101，常州佳灵药业有限公司提供。氟啶蜱脲透皮剂，淡黄色，透皮油状液体，规格：100m l，10.0g氟啶蜱脲，本课题组研制。吐温80、羧甲基纤维素均购于天津市大茂化学试剂厂。

（二）试验动物

昆明小鼠（普通级）134只，雌雄各半，体重18~22g，购于江西中医学院实验动物中心，许可证号：SCXK(赣)2011-0001。

（三）试验方法

1.药物配置

氟啶蜱脲原料药用含有0.5%羧甲基纤维素、0.1%吐温80的蒸馏水配置成不同质量浓度的悬浮液；透皮剂用食用大豆油配成不同质量浓度。

2.预试验

将8只试验小鼠，雌雄各半，每组4只，禁食12h后，高、低剂量组分别按40m l/kg和20m l/kg体重容积，以最大质量浓度（0.4g/m l）一次性灌服氟啶蜱脲原料药悬浮液，灌胃后观察7天。

每组4只试验小鼠，雌雄各半，禁食12h后，按20m l/kg体重容积灌服不同浓度的氟啶蜱脲制剂，测定LD0和LD100。

将10只试验小鼠，雌雄各半，禁食12h后透皮给予高剂量氟啶蜱脲透皮剂10.0g/kg，观察动物的毒副反应。

3.正式试验

最大给药量试验：将40只小鼠分为2组（实验组和对照组），雌雄各半，禁食12h后，小鼠给予最大质量浓度（0.4g/m l）及最大给药容积40m l/kg，一次性灌服氟啶蜱脲原料药悬浮液，对照组灌服给予等量的溶媒。透皮剂组根据预试验的最高致死量和最低致死量的比值对正式试验分组，每组10只试验动物，雌雄各半。透皮给药的小鼠数量增至20只，雌雄各半。给药后观察小鼠的死亡情况、出现的症状、症状起始时间、严重程度、持续时间，给药后连续观察14天。对试验中死亡的动物以及试验结束时处死的动物进行解剖，对组织出现的体积、颜色等的改变进行详细的记录。

（四）数据处理

数据统计采用SPSS14.0统计软件进行统计分析。

二、结果

（一）预实验

小鼠口服氟啶蜱脲原料药，高剂量组和低剂量组小鼠全部存活，未能测出氟啶蜱脲原料药的LD50，说明原料药的毒性很低，故进行最大给药试验。小鼠口服氟啶蜱脲制剂的LD0及LD100分别为3.59g/kg、8.77g/kg。小鼠按照10.0g/kg的剂量透皮给予氟啶蜱脲制剂，部分小鼠表现为眯眼、弓背、活动减少、呼吸加快、饮食正常，给药8小时后小鼠恢复正常，未见小鼠死亡。

（二）正式试验

1.口服原药试验

试验组给药后2h大部分小鼠活动减少，反应迟钝，小部分小鼠眯眼，给药后8h小鼠活动恢复正常，未见眯眼，给药后第1天小鼠食欲降低，第2天至14天小鼠饮食正常。对照组小鼠口服溶媒后，未见明显变化。给药后观察14天，试验组和对照组小鼠都未出现死亡。试验结束后，处死小鼠，并剖检，试验组和对照组都未见明显的眼观病变。表明氟啶蜱脲原药口服给药对小鼠的LD50大于16.0g/kg，说明氟啶蜱脲对昆明小鼠无毒。

2.口服制剂试验

测出的LD50=5.8594g/kg，LD50的95%可信限为5.2732～6.5276g/kg。由于LD50值在5000~15000m g/kg之间，因此氟啶蜱脲制剂对昆明小鼠是实际无毒的。

在小鼠口服透皮剂急性毒力试验中，给药后5分钟内大部分小鼠表现为反应迟钝、四肢发紫；给药1h后，大部分小鼠精神沉郁、弓背不动、竖毛、呼吸急促、食欲降低。试验中未死亡的小鼠36小时后能正常运动，死亡时间出现在给药后的1.5~40h。尸体剖检大部分小鼠可见皮下、腹膜、肠系膜、胸膈肌、心被膜、睾丸、子宫轻微充血，胃鼓气，胃壁变薄，十二指肠、空肠坏死液化呈鸡蛋黄色，肠壁变薄，肠粘膜易剥离，肝、脾、肾呈鲜红色，有的小鼠肾和脾肿大，膀胱充盈，肝呈暗红色，肺充血呈鲜红色。试验第14天，未死亡的小鼠处死剖检，未观察到明显的眼观病变。

小鼠口服透皮剂正式试验数据统计

雄性小鼠和雌性小鼠的死亡率无显著差异（P＞0.05）。小鼠的给药、死亡情况详见上表。

3.制剂透皮给药试验

小鼠透皮给予制剂10.0g/kg，给药后0.5h大部分小鼠眯眼，3h后表现为眯眼、弓背、活动减少、呼吸加快、饮食正常，在给药后8h小鼠恢复正常，给药后观察14天，小鼠未出现死亡。试验结束后，处死小鼠，并剖检观察，未见明显的眼观病变。

三、分析与讨论

氟啶蜱脲是一种亲脂性物质(正辛醇水分配系数logP=5.1)，在水中的溶解度小于0.02m g/l，因此选择含有0.5%羧甲基纤维素、0.1%吐温80的蒸馏水把氟啶蜱脲原料药配置成悬浮液便于灌胃给药。本课题组研制的透皮剂也是个油性体系，用含有羧甲基纤维素和吐温80的蒸馏水配置时，会析出乳白色的果冻状物，会造成给药不准确，而大豆油能很好地稀释透皮剂，因此采用大豆油作为稀释剂。

氟啶蜱脲原料药和透皮剂口服给药时，不同给药体积会影响药物的吸收，从而影响到动物的死亡率，因此分别按照40m l/kg、20m l/kg的剂量给小鼠氟啶蜱脲原料药和透皮剂灌胃。此外胃内容物的量会影响到受试物的给药容量；啮齿类动物禁食时间长短会影响药物代谢酶的活性和受试物在肠道的吸收，故小鼠在给药前禁食12h。

试验中，氟啶蜱脲原料药按16.0g*kg-1给昆明小鼠灌胃，未发现小鼠死亡，说明氟啶蜱脲对小鼠实际无毒，这和苯甲酰脲的作用机理有着密切的关系。苯甲酰脲类几丁质合成抑制剂主要通过影响昆虫几丁质的合成而起效，不同于作用于神经系统的传统农药，因此苯甲酰脲类几丁质合成抑制剂对靶标动生物有较高的选择性。此外，透皮剂口服给药对昆明小鼠的LD50为5.86 g/kg、经皮给药对昆明小鼠的LD50大于10.0g/kg，表明了透皮剂对小鼠也是实际无毒的。两种不同给药方式测量的半数致死量有着明显的差别，这可能是因为透皮剂经皮给药的生物利用度有限导致的。

（作者单位：王望宝，修水县畜牧水产局，332400；
包喜军，公安部南京警犬研究所，210012；
刘文春、叶俊华，公安部南昌警犬基地，330100）

（编辑：李 冰）

项目编号：公安部应用创新科研项目（2010YYCXNCJQ154）