规模化猪场肺炎支原体、鼻支原体与蓝耳病病毒感染情况调查

于 淼，王洪利，王新福，王 涛，王克伟，于 江，张玉玉，韩 红，吴家强

（1.山东畜牧兽医职业学院，山东潍坊 261061；2.临沂市兰山区畜牧局，山东临沂 276000；3.蒙阴县畜牧兽医局，山东蒙阴 276200；4.山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，山东济南 250100）

规模化猪场肺炎支原体、鼻支原体与蓝耳病病毒感染情况调查

于 淼1，王洪利1，王新福2，王 涛3，王克伟4，于 江4，张玉玉4，韩 红4，吴家强4

（1.山东畜牧兽医职业学院，山东潍坊261061；2.临沂市兰山区畜牧局，山东临沂276000；3.蒙阴县畜牧兽医局，山东蒙阴 276200；4.山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，山东济南250100）

[目的] 为分析猪肺炎支原体（MHP）、猪鼻支原体（MHR）与猪蓝耳病病毒（PRRSV）在临床感染中的相互关系。[方法]对从山东省规模化猪场收集的213份疑似病料进行PRRSV、MHP和MHR的检测，结合猪场的免疫背景对结果进行分析。[结果]发现在猪肺炎支原体免疫猪场，猪肺炎支原体感染比例显著降低，而在猪肺炎支原体非免疫猪场，猪鼻支原体与猪肺炎支原体、猪蓝耳病病毒的混合感染率极高。无论在肺炎支原体免疫场还是非免疫场，猪蓝耳病病毒与猪鼻支原体的混合感染率，都超过了猪蓝耳病病毒与猪肺炎支原体的混合感染率。[结论]PRRSV与MHP和MHR之间有着密切的关系，除猪肺炎支原体外，猪鼻支原体目前已成为危害养猪业的又一重要因素。

猪鼻支原体；猪肺炎支原体；猪蓝耳病病毒；病料检测；感染比例；混合感染

猪支原体是猪呼吸道疾病综合征的主要病原之一[1]，临床症状主要表现为猪地方性肺炎（又叫猪气喘病，SEP），病猪和带菌猪是主要传染源，带菌母猪可垂直传染仔猪，猪群间主要通过接触传染[2]。猪鼻支原体（MHR）为猪呼吸道疾病综合征的第二致病原，可以引发肺炎或者协同猪肺炎支原体共同引起肺炎[4]。近几年的研究表明，猪肺炎支原体的感染可加重猪蓝耳病病毒的感染[5]。通过对多个规模化猪场的213份临床病料进行检测，分析总结出了猪鼻支原体感染猪群的现状及与猪蓝耳病病毒、猪肺炎支原体的混合感染的规律。

1 材料与方法

1.1 试剂

dNTP Mixture、ExTaqDNA聚合酶、TRIZOL试剂等试剂，购自Invitrogen公司；M-MLV，购自Promega公司；猪肺炎支原体PCR 检测试剂盒，购自大连宝生物工程有限公司。

表1 样品免疫背景

表2 猪肺炎支原体和猪鼻支原体双重PCR引物和PRRSV引物序列

表3 病料检测结果统计

表4 MHP免疫场病料检测结果

表5 MHP未免疫场检测结果

1.2 临床样品

临床样品采集于山东省地区的规模化猪场，全部为有肺炎症状的猪肺脏组织。免疫背景如表1：

1.3 临床病料检测

1.3.1 病料中核酸的提取。将病料按1∶3的比例与PBS缓冲液混合后充分研磨，冻融三次后离心，取上清液分别利用大连宝生物公司的猪肺炎支原体PCR检测试剂盒及Invitrogen公司的TRIZOL试剂对病料进行DNA及RNA提取；经RNA反转录成cDNA后，与病料DNA分别保存备用。

1.3.2 病料的PCR检测。支原体检测引物及反应体系参照刘茂军等[6]建立的猪肺炎支原体与猪鼻支原体鉴别双重PCR，PRRSV引物序列及反应体系参照邓雨修等不同引物RT-PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的比较研究[7]，取PCR产物于1%琼脂糖凝胶电泳观察。

2 结果

2.1 三种病原的检测率结果对规模化猪场的213份临床病料（肺脏）进行检测，检测结果如表3所示：从结果中可以看出，PRRSV的临床

检出率非常高，阳性率超过了80%（包括疫苗毒），而MHP与MHR的阳性率均超过了30%，说明猪场的支原体感染严重。在调查的规模化猪场中，MHR的感染比例（38.97%）超过了MHP的感染比例（32.39%），差异显著（P＜0.05）。同时，MHR与PRRSV的混合感染率（33.80%）超过了MHP与PRRSV的混合感染率（24.88%），差异极显著（P＜0.01）。

2.2 免疫猪肺炎支原体疫苗对病原检测结果的影响

将46份免疫过猪肺炎支原体疫苗的病料和167份未免疫过猪肺炎支原体疫苗的病料进行分析，结果见表4、表5。

从表中可以看到，接种猪肺炎支原体疫苗的猪场，MHP的阳性率显著降低，但是，猪肺炎支原体疫苗的接种对于MHR的发病率并没有明显的改善（P＞0.05），甚至免疫场MHR的阳性率还高于未免疫场（P＜0.05）。而在MHP免疫猪场，PRRSV的检出率仍旧很高，达到了86.96%（包括疫苗毒），但PRRSV与MHP的混合感染率相对于未免疫场有了明显的改善（P＜0.05），而PRRSV与MHR的混合感染率相对于未免疫场没有明显的改观。

3 讨论

猪鼻支原体（MHR）是仔猪上呼吸道存在的正常菌株，与MHP相似。MHR能粘附于呼吸道上皮细胞上，且部分菌株能够引起肺炎、多发性浆膜炎、关节炎、中耳炎等。在地方性肺炎（SEP）的发生过程中，MHR常常作为第二致病菌，协同MHP共同或单独致病。如Kim等[8]证实，MHR感染实验猪，可引起猪的肺炎，并伴发多发性浆膜炎、关节炎及中耳炎等临床症状；中国的Lin等[9]通过人工感染试验发现，MHR可单独引起肺炎，并且发现在SEP病料中，MHR的阳性率从72.3%上升至99.4%。

本研究对部分规模化猪场有肺炎症状的肺脏进行了PRRSV、MHP、MHR的检测。通过检测结果的分析发现，目前MHR的总检测率高于MHP的检测率。PRRSV与MHP和MHR之间有着密切的关系，混合感染率均超过了30%，而且PRRSV与MHR的混合感染率要高于其与MHP的混合感染率。该结果在一定程度上表明猪鼻支原体与PRRSV之间的相互关系比猪肺炎支原体与PRRSV的关系更加密切（表2）。猪的鼻腔有阻止和过滤灰尘颗粒的作用，支气管纤毛可黏附和清除病菌；支原体肺炎属免疫抑制性疾病，一方面，可破坏纤毛，大大降低其黏附和清除病菌的功能；另一方面，猪支原体肺炎可使肺泡巨噬细胞对病菌的吞噬和消除能力下降，造成机体的免疫力下降。因此猪感染支原体后，可继发感染其它病毒或细菌，如PRRSV、PCV2、SIV、APP、HPS等[10]，多种病原共同作用，使得猪群临床发病情况变的尤为复杂。

使用疫苗接种的效果远远高于药物控制，且更加经济[11]。在MHP免疫场中，MHP的阳性率有了明显降低，说明MHP疫苗对MHP具有良好的保护效果，但是MHP疫苗的免疫对MHR的检出率没有显著的影响，说明猪肺炎支原体疫苗几乎不能提供对MHR的交叉免疫保护；虽然猪场免疫了MHP疫苗，但MHP的检出率达15.22%，可能跟免疫程序、猪场管理方式、猪群饲养条件以及机体内有其他免疫抑制因素（如霉菌毒素、PCV2等）使疫苗保护率降低有关。同时，MHP疫苗的接种，对于PRRSV感染未能体现出应有的效果，除了病料太少（仅46份）的原因外，猪鼻支原体感染可能是导致MHP免疫未能体现效果的重要原因。采集样品的猪场均使用PRRSV弱毒疫苗免疫，本检测方法尚不能区分疫苗毒与野毒，因此在免疫过MHP和PRRSV疫苗的46个猪场中，PRRSV的检测率高于MHP未免疫组，可能有疫苗毒的存在。在MHP免疫场，PRRSV与MHR的混合感染率相对于未免疫场没有明显的改善。同时，在免疫场的46份病料中有7份检测到MHP，而在这7份病料中同时检测到了PRRSV和MHR，尽管样本数量太少，但推测，MHR在很大程度上能够促进PRRSV的感染和传播，而且跟MHP的发生可能有很密切的关系。

[1] 王华，张清，王君玮，等.猪支原体肺炎流行病学和诊断技术研究进展[J].动物医学进展，2009.30（9）：73-77.

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[5]刘青海，车秀华，孙洪升.猪支原体肺炎的研究进展[J].畜牧兽医科技信息，2005（6）：12-13.

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[9]LIN J H，CHEN S P，YEH K S，et al.Mycoplasma hyorhinis in Taiwan：diagnosis and isolation of swine pneumonia pathogen[J].Vet Microbiol，2006，15（1-3）：111-116.

[10]王茂文.猪肺炎支原体病的特点及其防制措施[J].畜禽业，2008（2）：16-17.

[11]何敬军.我区猪支原体肺炎（MPS）的流行与防制[J].中国动物检疫2004，21（8）35-36.

Investigation on Mycoplasma hyopneumoniae，
Mycoplasmahyorhins and PRRSV Infections in Large-scale Swine Farms

Yu Miao1，Wang Hongli1，Wang Xinfu2，Wang Tao3，Wang Kewei4，Yu Jiang4，Zhang Yuyu4，Han Hong4，Wu Jiaqiang4
（1.Shandong Vocational Animal Science and Veterinary College，Weifang，Shandong 261061；2.Linyi Lanshan Animal Husbandry Bureau，Linyi，Shandong 276000；3.Mengyin Animal Husbandry Bureau，Mengyin，Shandong 276200；4.Shandong Key Lab of Animal Disease Control and Breeding，Jinan，Shandong 250022）

[Objective]In order to analysis the relationship of Mycoplasma hyopneumoniae（MHP）、Mycoplasmahyorhins（MHR）and Porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV）in clinical infection.[Method]A total of 213 suspected samples were collected from large-scale swine farms in Shandong province and MHP，MHR and PRRSV were detected by PCR. The detection reports were analyzed on the basis of immunization background of swine herds.[Result]The results showed that positive rate of MHP infection reduced largely in the vaccinated swine herds. The mixed infection rate of MHP，MHR and PRRSV was very high in the non- vaccinated swine herds. The mixed infection rate of MHR and PRRSV was higher than that of MHP and PRRSV whether in the vaccinated or nonvaccinated swine herds.[Conclusion]Those results indicated that MHR had become another important factor threatening pig industry.

MHR；MHP；PRRSV；sample detection；positive rate；mixed infection

S851.31

：B

：1005-944X（2015）02-0008-04

国家自然科学基金（编号：31340047）；山东省现代农业产业技术体系（编号：SDAIT-06-022-06、06-021-07）；山东省农科院重大科技成果培育计划等（编号：2014CGPY04、2014YDHZ32）

吴家强