白芍总皂苷部位的液质联用分析

陈佩东，周 习（南京中医药大学，南京210046）

·方药研究·

白芍总皂苷部位的液质联用分析

陈佩东，周 习
（南京中医药大学，南京210046）

目的 分析白芍总皂苷部位中的化学成分。方法 应用大孔树脂纯化白芍总皂苷，高效液相-四级杆质谱分析，采用Kromasil C18柱（250mm×6mm，5μm）；流动相A为0.05％甲酸，B为乙腈，梯度洗脱；对白芍总皂苷部位进行分析，对主要离子碎片裂解过程进行解析。结果 白芍总皂苷中鉴定出22个化合物。其中所含的化合物除少数为黄酮、三萜类苷元外，均为白芍苷等蒎烷类单萜苷成分。结论 白芍总皂苷中主要为单萜皂苷类成分。

白芍；白芍苷；总皂苷；液质联用分析

还不系统深入，为进一步研究白芍总皂苷的药效基础，提取、分离纯化了白芍中总皂苷，并对总皂苷部位的化学成分进行了液质联用分析。

1 样品与仪器

1.1 样品 白芍饮片（批号：120809，产地：安徽），经南京中医药大学鉴定教研室吴德康教授鉴定为毛茛科芍药属植物（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根。芍药苷对照品（中国食品药品检定研究院，110736-201136），氧化芍药苷和芍药内酯对照品（成都曼思特生物科技公司Must-120708，Must-120516）。样品中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷的含量经高效液相测定分别为0.5％，0.71％，1.72％，液相色谱图见图1。所用试剂甲醇（江苏汉邦科技有限公司），乙腈（湖北杜克化学科技有限公司）为色谱纯。

1.2 仪器 高效液相为Waters 2695高效液相色谱仪，Waters 2489 UV检测器，Empower色谱工作站；液质联用系统为Agilent 1290 Infinity LC System，Agilent 6460 Triple Quadrupole LC/MS system，AgilentMassHunterWorkstation software（Version B.03.00）。

2 方法

2.1 色谱条件

2.1.1 液相色谱条件 Kromasil C18（250 mm×6 mm，5μm）色谱柱，柱温：30℃，流动相（A）为0.05％甲酸，（B）为乙腈，梯度洗脱，0～10min，85％→80％A；10～35 min，80％～75％A；35～55 min，75％～70％A；55～65min，70％～60％A；65～90 min，60％～35％ A；90～92.5 min，35％～5％A；92.5～102.5 min，5％ A；102.5～110 min，5％～85％A；110～115 min，85％ A；流速0.6mL/min，进样3μL，检测波长254 nm。

2.1.2 质谱条件 电喷雾离子源，负离子模式扫描；干燥气温度350℃，干燥气流量10 min/L，离子源温度320℃，雾化气电压40 psi，毛细管电压3 500 V。

2.2 供试样品的制备 取白芍2 g，以12倍体积的50％乙醇加热回流2次，每次2 h，合并提取液，回收乙醇，放冷、抽滤，加水至50 mL，制成上样液。取经预处理的AB-8型大孔吸附树脂30 mL（湿体积），置于层析柱（2 cm×20 cm）中。白芍提取液上样，静置吸附12 h后，用蒸馏水洗脱，至洗脱液无色，弃水液，以80％乙醇洗脱4 BV。收集洗脱液，浓缩，所得样品含芍药苷23.4％，芍药苷转化率71.89％，干膏得率6.9％。将浸膏溶于50mL甲醇，高速离心（15 000 r/min）、抽滤。取10mL滤液，过0.22μm微孔滤膜，得供试液进行测试。

图1 白芍中氧化芍药苷混合对照品和白芍HPLC图

图2 白芍总皂苷负离子模式总离子流图（254 nm）

2.3 白芍总皂苷液质分析 白芍总皂苷负离子模式的总离子流图见图2，通过对质谱的分子离子峰和主要碎片离子峰分析，鉴定了其中的22个化合物，结果见表1。

综上所述，对妊娠期高血压疾病患者实施认知行为技术干预能够有效降低患者围产期血压值，改善孕产妇心理状态、妊娠结局和新生儿分娩结局，提高患者满意度，值得临床推广应用。

表1 质谱中解析出的化合物

图3 白芍中的单萜苷磺酸盐

白芍总皂苷中发现4个单萜皂苷磺酸盐，结构见图3。有报道［5］经过炮制的白芍会出现化合物的磺酸盐，生成的磺酸盐的药效与原生苷不同，与文献对照，1，3，4和10号峰分别为去苯甲酰芍药苷磺酸盐、异芍药苷磺酸盐、芍药苷磺酸盐和没食子芍药苷磺酸盐。在总皂苷部位的负离子模式总离子流图中，芍药内酯苷、芍药苷和牡丹皮苷Ⅰ分子量均为480，但都出现了［M-H＋COO－］525的强丰度离子峰，3″-甲氧基-4″-羟基芍药苷虽然也出现质荷比为525的离子峰，却没有479的碎片峰，芍药内酯和芍药苷都出现了479的［M-H］峰，同时也都出现449［M-H-30］的峰，而牡丹皮苷E和I由于葡萄糖6位连接苯酰基，则没有449的碎片峰［6］，同样的加羧酸峰也出现在Isomaltopaeoniflorin的基峰中，该化合物分子量为642，得到的离子峰为687，经对照品和文献［7-9］对照，7，11，12 和13号峰分别为牡丹皮苷E、芍药内酯苷、芍药苷和牡丹皮苷I，9号峰为异芍药苷。异杞柳苷是白芍中的查尔酮类成分，经与文献［10］对照，5号峰为异杞柳苷。芍药酮是白芍中的单萜苷元，与文献［11］对照，14号峰为芍药酮，结构见图4。3″-甲氧基，4″-羟基，6′-苯酰基-芍药苷和4″-羟基，6′-O-（4-甲氧基苯甲酰）-芍药苷具有相同分子量，不同的是甲氧基的位置，可以根据［M-H-CO2H4］的碎片峰鉴别，与文献［14］对照，21，22号峰分别为3″-甲氧基，4″-羟基，6′-苯酰基-芍药苷和4″-羟基，6′-O-（4-甲氧基苯甲酰）-芍药苷，裂解途径见图5。

图4 芍药酮的结构

图5 3″-甲氧基，4″-羟基，6′-苯酰基-芍药苷的裂解过程

3 小结

通过对白芍中总皂苷的液质联用分析，可以看出其中所含的化合物除少数为黄酮、三萜类苷元外，均为白芍苷等蒎烷类单萜苷成分。除原生苷外，白芍中尚含有部分磺酸盐衍生物，在结果分析时应予以考虑。在本实验条件下，单萜苷类成分的母核不易裂解，产生的［M-H］离子峰均较强，常见［M-H＋COO－］离子，产生裂解的部位是糖和苯酰基上的基团，可以作为今后分析此类化合物的参考。

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Analysis on total glucosides of paeony by HPLC-MS

CHEN Peidong，ZHOU Xi
（Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210046，China）

Objective To analyze the chemical constituents of total glucosides in paeony.M ethods The total glucosides were purified bymacroporous resin，and the compounds in paeonywere analyzed by HPLC-MS.The separation was performed on Kromasil C18（250mm×6mm，5μm）with amobile phase of0.05％formic acid A and acetonitrile B with gradientelution.Parts of total glucosides in paeonywere analyzed and the splitting process ofmain fragment ionwas analized.Results 22 chemical constituents were identified from total glucosides in paeony.Few of the contained chemical constitutes were flavone and triterpenoid saponins，the rest of itwere all paeony such as pinanemonoterpenoid glycoside.Conclusion The main compounds in total glucosides of paeony weremonoterpenes saponins.

Paeonia Lactiflora Pall；total glucosides of paeony；total saponins；HPLC-MSanalysis

book=241,ebook=27

R284.2

A

2095－6258（2015）02－0241－04

10.13463/j.cnki.cczyy.2015.02.008

2014－08－15）

南京中医药大学科技创新风险基金（CX201202）。

陈佩东（1970－），男，博士，副教授，主要从事中药化学研究。